en polyklonal antikropp är en samling av manyimmunoglobuliner, var och en genererad från en annan b-cellklon. Dessa antikroppar riktar sig mot olika epitoper eller bindningsställen på ett enda antigen. Derivation från flera B-cellkloner och efterföljande inriktning av flera epitoper är det som skiljer polyklonala antikroppar frånmonoklonala antikroppar.

hur man gör polyklonala antikroppar

all antikroppsgenerering, polyklonal eller monoklonal, börjar med att framkalla ett immunsvar, benämnt immunisering. De avsedda målen injiceras i värden, erkända av immunsystemet som främmande och riktade av antikroppar för immunblockering eller clearance. Underlåtenhet att montera ett immunsvar skulle kräva användning av adjuvanser, immunogena substanser såsom Freunds adjuvans eller nyckelhålslimpethemocyanin (KLH), för att ytterligare driva immunrekrytering. Immunisering omfattar majoriteten av vad som krävs för att göra polyklonala antikroppar. Ett typiskt immunsvar beskrivs nedan.

att göra antikroppar börjar med immunisering

Initial exponering för primärt immunsvar

Initial värdexponering för antigen med lämpliga adjuvanser kallas exponering ”Prime” immunisering. Typiska exponeringsmetoder inkluderar injektion i huden, bukhinnan, subkutant skikt eller muskel. Mindre vanliga alternativ är oral och intranasal administrering.DNA-immunisering är också en framväxande teknik för giftiga eller på annat sätt svåra att producera antigener. Varje efterföljande exponering för antigen kallas en” boost ” immunisering.

Antigenbehandling med antigenpresenterande celler

makrofager, dendritiska celler (DC) och i mindre utsträckning B-celler, alla antigenpresenterande celler (APC), internaliserar antigen genom endocytos eller fagocytos. Antigenbehandling bryter antigenet i mindre bitar som sedan flyttas till ytan av APC.

stimulering av B-celler

igenkänning av antigen som presenteras på ytan av APCs inducerar frisättningen av stimulerande signalmolekyler, cytokiner, från hjälpar-T-celler. Dessa cytokiner aktiverar B-celler som också kände igen antigen genom deras b-cellreceptor (BCR). Vissa B-celler kräver inte hjälpar-T-cellaktivering efter BCR-antigeninteraktion, vilket vanligtvis producerar ett snabbare immunsvar med antikroppar med lägre affinitet. Involveringen av hjälpar-T-celler är kritisk i ett fylligt immunsvar såväl som reglerandesjälvtolerans.

Proliferation av B-celler och Antikroppssekretion

aktiverade B-celler delar sig för att skapa både minne B-cell och plasmacellpopulationer. Båda typerna av celler känner igen samma epitop. Plasmaceller utsöndrar antikroppar i serumet för immunigenkänning medan minne B-celler kvarstår under längre perioder, vilket ger snabbt svar på sekundär exponering av samma antigen.

mätning av immunsvaret

mätning av antikroppsnivåerna under immuniseringsprocessen krävs för att utvärdera framsteg. AnELISA mot målantigen jämför immuniserade serumprover med förimmuniserade serumprover som avslöjar graden av immunsvar som drivs av immunisering. Seriella utspädningar av prover bestämmer antikroppens titer. Typiskt en 1:64 000 titer anses vara ett robust immunsvar och tillräckligt för att fortsätta till serumskörd eller lymfocytfusion. Lägre titrar kan kräva efterföljande boostvaccinationer, alternativa administreringsvägar eller ytterligare adjuvanser.

polyklonal Antikroppserumskörd

polyklonal antikroppsproduktion kräver endast återvinning av blod från värddjuret och separation av den cellulära fraktionen från serumfraktionen innehållande utsöndrade antikroppar. Eftersom många antigenspecifika antikroppar utsöndras av flera aktiverade B-celler innehåller blodserum de många produkterna av olika antikroppskloner, därav termen polyklonal antikropp. Specifikt uppnås skapandet av flera klonala antikroppar mot ett antigen genom både bearbetning av antigen i fragment såväl som varje fragment med mindre regioner, benämnda epitoper. Var och en kan kännas igen av specifika BCR. Distinkta B-cellpopulationer utsöndrar specifika, men ändå olika antikroppar mot samma antigen. Dessutom innehåller serum inte bara antikroppar riktade mot det avsedda målantigenet utan alla andra immunoglobuliner mot andra mål, läkemedel, hormoner etc. det finns i serumet. Serum kan användas direkt som en molekylärbiologisk sond, men kräver ofta ytterligare rening för att öka känsligheten och specificiteten hos en viss analys. Affinitetsrening uppnår antikroppsåtervinning i varierande grad beroende på tekniken som visas nedan, men ingen når epitopnivåspecificiteten hos en monoklonal antikropp.

Polyclonal Antibody Applications

polyklonala Antikroppsrelaterade tjänster

OurPolyExpress-tjänsten är ett kostnadseffektivt och snabbt sätt att göra anpassade molekylära sonder. Från antigensekvens till levererade antikroppar på 45 dagar garanteras. Letar du efter ännu mer kontroll över antikroppsutveckling? Ta en titt på några av våra andra antikroppstjänster:

• DNA-immuniseringar, vår specialitet. För starten av något antikroppsutvecklingsprojekt. Kringgår produktionen av proteinantigen in vitro och hanterar svåra mål.
• MonoExpress bär branschledande applikationsgarantier, vilket garanterar framgång i dina analyser.
• Anti-idiotyp antikroppar gör PK-eller PD-testning av terapeutiska antikroppsläkemedel lätt. De upptäcker bara CDR för målantikroppen.

med 12 års erfarenhet av att utveckla anpassade antikroppar är ditt projekt i experthänder. Få en offert idag!

citat och beställning

våra kundtjänstrepresentanter är tillgängliga 24 timmar om dygnet, måndag till fredag för att hjälpa dig.