În: progrese recente în reproducerea animalelor mici, P. W. Concannon, G. England și J. Verstegen (Eds.) Editor: Serviciul Internațional de informații veterinare (www.ivis.org), Ithaca, New York, Statele Unite ale Americii.

inseminarea intrauterină la câine Folosind cateterul Trans-Cervical scandinav și o comparație cu alte metode ( 2-Feb-2001)

C. Linde-Forsberg

Facultatea de Medicină Veterinară, Departamentul de Obstetrică și Ginecologie, Universitatea suedeză de științe Agricole, Uppsala, Suedia

introducere

interesul pentru conservarea materialului seminal canin și inseminarea artificială (AI) este în continuă creștere la nivel mondial, totuși relativ puține studii sunt publicate în fiecare an în acest domeniu și este deosebit de dificil să se găsească date din inseminări artificiale folosind material seminal proaspăt sau material seminal conservat conform diferitelor metode de răcire, congelare și decongelare și, de asemenea, compararea rezultatelor atunci când sunt se folosesc tehnici de efectuare a inseminărilor. Un motiv pentru deficitul de date este că este costisitor să faci studii experimentale la câini și puține centre de cercetare pot păstra colonii de câini suficient de mari pentru acest tip de studii. Un alt motiv este că majoritatea companiilor mari care prelucrează și distribuie material seminal Canin pentru crescătorii de câini lucrează pe o bază pur comercială și, deși unele dintre ele par să țină evidența rezultatelor lor, nici aceste rezultate, nici compoziția extensorilor sau metodele de conservare a materialului seminal nu sunt dezvăluite. Orice cunoaștere astfel dobândită va rămâne, prin urmare, la diferitele companii și nu va fi benefică pentru lumea științifică și, prin urmare, nici pentru crescătorii de câini în general. Singurele studii privind inseminarea artificială canină care raportează rezultatele fertilității dintr-un număr mare de inseminări sunt cele realizate de Seager și colab., pe 156 AIS de material seminal congelat-dezghețat folosind depunere vaginală, Linde-Forsberg & Forsberg pe 470 și respectiv 527 AIs, folosind atât material seminal proaspăt, refrigerat extins și congelat-dezghețat și ai vaginal, cât și intrauterin, Linde-Forsberg și colab., pe 327 AIS de material seminal congelat-dezghețat, comparând ai vaginală și intrauterină, Linde-Forsberg raportând 2041 AIs cu material seminal proaspăt și refrigerat extins și congelat-dezghețat și folosind atât ai vaginală, cât și intrauterină, și Thomassen și colab., pe 312 congelate-dezghețate în principal AIS intrauterină. O serie de factori sunt importanți în determinarea ratei de succes a inseminării artificiale la câini, cum ar fi când și de câte ori în timpul ciclului estros al cățelei se efectuează AI, calitatea și manipularea materialului seminal și tehnica de inseminare. Mai multe informații despre aceste fațete pot fi găsite în referințele citate. Această lucrare se va ocupa doar de tehnicile de inseminare și de efectele locului de depunere a materialului seminal. Studiile clinice recente au evidențiat importanța inseminării artificiale intra-uterine, spre deosebire de inseminarea artificială intravaginală la câine și sunt primele care demonstrează rezultate semnificativ mai bune atunci când materialul seminal a fost depus în uter, mai degrabă decât în vagin. În studiul lui Linde-Forsberg și colab., rata de whelping utilizând depunerea intrauterină a materialului seminal înghețat a fost de 84,4% comparativ cu 58.9% utilizând depunerea vaginală, iar dimensiunea medie a așternutului a fost de 5,4 + 3,0 comparativ cu 4,0

+2,7 pui/așternut (P<0,001). Date de fertilitate din 2041 inseminări artificiale sunt câini, efectuate la cățelele suedeze între 1990 și 1998 și raportate la Kennel Club în termen de 2 săptămâni, (adică. înainte ca un test de sarcină să fi putut fi făcut pentru a evita părtinirea rezultatelor), a arătat că ratele semnificativ mai mari de pui și dimensiunile așternutului au fost obținute nu numai cu material seminal congelat-dezghețat, ci și cu material seminal proaspăt, precum și refrigerat, extins, atunci când materialul seminal a fost depus în uter, mai degrabă decât în vagin (Tabelul 1).

rezultatele utilizării materialului seminal proaspăt, prezentate în tabelul 1, sunt puțin prea mari, deoarece 11% dintre cățelele respective au fost, din diverse motive, nu numai inseminate artificial, ci și împerecheate. Cel mai frecvent motiv pentru aceasta a fost că crescătorii au încercat să împerecheze cățelele prea devreme în timpul estrului și când câinii nu s-ar împerechea, proprietarii lor au solicitat un AI. Rata de pui în grupul de asemenea împerecheat a fost de până la 84,5%, cu o dimensiune medie a puilor de 6,0 + 2,8 pui, comparativ cu o rată de pui de 48,9% și o dimensiune medie a puilor de 5,8 + 2,8 pui pentru acele cățele care au fost doar inseminate artificial. Prin urmare, se pare că o serie de AI care se efectuează cu material seminal proaspăt se fac într-un moment neoptim în timpul estrului, de obicei din cauza lipsei de experiență a crescătorului, dar rezultatul relativ slab este probabil și datorită faptului că AI este solicitat din cauza diferitelor probleme la câini. Cu toate acestea , datele suedeze demonstrează clar că la câine, ai intrauterină îmbunătățește semnificativ rata de pui și dimensiunea așternutului. Rata de creștere prin AI intrauterină a crescut de la 36% pentru materialul seminal proaspăt la 50% pentru materialul seminal congelat-dezghețat, comparativ cu AI vaginală. Și, cu AI intrauterină, dimensiunea medie a așternutului a crescut cu 0,3 pui pe așternut pentru materialul seminal înghețat și cu 0,6 și 0,7 pe așternut pentru materialul seminal extins proaspăt și răcit. De asemenea, este interesant în acest context să observăm că câinele este considerat a fi o specie cu depunere intrauterină a materialului seminal la împerecherea naturală, deoarece până la terminarea legăturii copulatorii, spermatozoizii au ajuns la oviducte . Fracțiunea bogată în spermă este ejaculată la intromisie și în stadiul incipient al cravatei copulatorii și este urmată de un volum mare de lichid prostatic care spală imediat spermatozoizii din vaginul cranian îngust prin colul uterin în corpul uterin și coarne. Vaginul pare să ofere un mediu nefavorabil pentru spermatozoizii canini, deoarece o mare parte își pierde cozile în câteva minute după depunerea în vaginul cranian . De asemenea , s-a demonstrat că sunt necesare aproximativ 10 ori mai multe spermatozoizi pentru a obține rezultate similare prin ai vaginală decât prin ai intrauterină cu material seminal proaspăt, precum și cu material seminal congelat-dezghețat . Există, astfel, mulți factori care contribuie la rezultatele mai slabe obținute prin depunerea intravaginală a materialului seminal comparativ cu depunerea intrauterină.

metode de a efectua ai intrauterină la câine.

ai intrauterină la câine se poate face transcervic fie prin intermediul cateterului scandinav (sau norvegian), fie prin utilizarea unui endoscop vaginal fibroptic rigid pentru a vizualiza colul uterin și un cateter urinar de câine pentru a-l traversa. Ai intrauterină poate fi realizată și prin metode invazive, cum ar fi laparoscopia sau chirurgia abdominală completă. În unele țări, aceste din urmă metode pot fi ilegale sau nu sunt considerate acceptabile din punct de vedere etic.

palparea colului uterin

este absolut esențial ca persoana care dorește să efectueze ai canină să învețe cum să localizeze colul uterin prin palpare abdominală pentru a putea depune materialul seminal în locul corect și pentru a evita rănirea cățelei. Cățea ar trebui să aibă stomacul gol și vezica urinară pentru a facilita procedura. În scopuri de instruire se recomandă utilizarea cateterelor vaginale ai din plastic de unică folosință (Minit Inktibb GmbH, Tiefenbach, Germania) (Fig. 1).

Figura 1. Cele trei dimensiuni ale cateterului de inseminare artificială Scandinavă pentru câini și cateterul de inseminare artificială vaginală de unică folosință din plastic.

deoarece deschiderea ureterală a cățelei este localizată la marginea pelviană, este surprinzător de ușor ca cateterul AI sau un endoscop rigid subțire să fie introdus neintenționat în vezica urinară. În afară de pericolele de perforare a vezicii urinare cu cateterul, este evident că nici o sarcină nu ar urma după o AI. Astfel, poziția corectă a cateterului trebuie verificată întotdeauna prin palpare înainte de depunerea unei doze de material seminal. Dacă cateterul se află în vezica urinară, partea craniană a vaginului și a colului uterin pot fi palpate deasupra cateterului. Pereții vezicii urinare sunt de obicei mai subțiri decât cei ai vaginului, iar vârful cateterului iese în evidență mai distinct decât dacă ar fi în vagin. Pentru a palpa colul uterin, un cateter AI este introdus în vaginul cățelei. Introducerea cateterului este facilitată dacă vulva este ridicată până când este chiar sub anus (ca atunci când cățea reprezintă câinele mascul). Când vârful cateterului este introdus până la cranianul imediat până la marginea pelviană, acesta trebuie palpat. Cranial, vaginul la majoritatea cățelelor se înclină ușor în jos. Cu toate acestea, la unele rase, în special la câinii de vedere cu coapsa foarte arcuită, vaginul are o direcție mai dorsală. Capătul cranian al cateterului ar trebui acum să fie coborât mai aproape de peretele abdominal pentru a deveni mai accesibil palpării. Când vârful cateterului poate fi palpat și poziția corectă în vagin astfel verificată, acesta este introdus cu atenție în continuare, sub control palpator continuu, până când ajunge în zona paracervicală. Aceasta este porțiunea craniană îngustă a vaginului creată de pliul dorsal, median post-cervical și poate fi palpată ca o structură fermă de 1 până la 2 cm lungime. Se termină la colul uterin, care într-o cățea în estrus este o structură tare de 0,5 până la 1,5 cm, rotunjită până la ovoid liber mobilă. De obicei, nu este posibilă trecerea învelișului protector exterior al cateterului scandinav, care are un diametru de 10 mm, în zona paracervicală. De asemenea, cateterul AI din plastic mai subțire, care are un diametru de 5 mm, poate fi prea lat pentru a fi introdus în zona paracervicală la unele cățele, în special la cele ale raselor mai mici sau la cele care nu au născut o așternut de pui. Odată ce cervixul a fost identificat, corpul uterin și coarnele uterine pot fi palpate în fața acestei structuri. Coborâți vârful cateterului și apoi închideți vârful degetului mare față de cel al degetului arătător deasupra cateterului, apoi ridicați capătul cranian al cateterului astfel încât cervixul și coarnele uterine să fie trase în sus între degete. Dimensiunea și consistența lor devin apoi evidente. (Această metodă de palpare a uterului este, de asemenea, foarte utilă pentru detectarea precoce a sarcinii și pentru examinarea cățelelor cu piometru suspectat).

inseminarea intrauterină cu ajutorul cateterului scandinav

cateterul scandinav constă dintr-un cateter de oțel de 1 – 2 mm lățime cu un 0.75 mm la 1 mm diametru sfat, și vine în trei lungimi diferite: 20, 30 sau 40 cm. Se utilizează împreună cu o teacă exterioară de protecție din nailon cu diametrul de 10 mm (Fig. 1 și Fig. 2). Cateterul de dimensiuni medii se potrivește majorității cățelelor mici și mijlocii. Echipamentul poate fi obținut de la asociația norvegiană a crescătorilor de blănuri, P. O. Box 136, Inktokern, n-0509 Oslo 5, Norvegia.

Figura 2. Un prim-plan al celor două dimensiuni ale vârfurilor cateterului ai scandinav pentru câini.

ai intrauterină cu cateterul scandinav este efectuată cu cățea în picioare pe podea sau pe o masă. Sedarea este foarte rar necesară, dimpotrivă, majoritatea cățelelor din estrus acceptă în mod liber acest tip de manipulare. În cazul în care ar trebui necesară o sedare ușoară, de exemplu la o cățea foarte mare, obeză sau nervoasă, se poate utiliza 1 – 3 mg/kg xilazină IM sau IV. Cateterul interior din oțel, cu vârful în interior și protejat de teaca de nailon, este introdus în vagin. Capătul cranian al tecii de nailon este palpat în fața marginii pelvine, așa cum s-a descris anterior. Dacă vârful mantalei cateterului a fost coborât mai aproape de peretele abdominal, colul uterin se găsește de obicei la câțiva cm în fața și deasupra acestuia. Cateterul de oțel este apoi introdus prin teacă până când vârful său ajunge la fornixul ventral. Cervixul este fixat între degetul mare și degetul arătător și, prin aplicarea unei tracțiuni ușor descendente la corpul uterin, este înclinat astfel încât unghiul canalului cervical să devină mai orizontal (Fig. 3).

Figura 3. Un desen schematic al regiunii paracervicale canine și al canalului cervical, cu cateterul scandinav în poziție în vaginul cranian. Prin manipulare la colul uterin și corpus uteri unghiul colului uterin este schimbat pentru a obține canalul cervical în aliniere mai bună cu vârful cateterului pentru a facilita cateterizarea. vârful cateterului este apoi retras cu grijă în timp ce îl împinge în mod repetat pe suprafața colului uterin în căutarea deschiderii canalului cervical. Senzația când se găsește această deschidere poate fi descrisă în majoritatea cazurilor ca senzația de atingere a cartilajului, adică „crocantă”. Odată ce deschiderea a fost găsită, fixați cateterul și începeți să lucrați colul uterin împotriva cateterului. Canalul cervical are o lungime de 5 până la 10 mm și nu întotdeauna complet drept. Astfel, poate fi necesară o ușoară presiune, în timp ce rotiți cateterul pentru a-l ușura. La majoritatea cățelelor, vârful cateterului poate fi simțit cu ușurință în fața colului uterin din corpus uteri. Cu toate acestea, la unele cățele, senzația nu este la fel de distinctă. Seringa care conține material seminal este conectată la cateter și materialul seminal este infuzat încet în uter. Uneori există o rezistență la perfuzie în funcție de faptul dacă deschiderea cateterului apasă pe mucoasa endometrială. O tracțiune ușoară în jos a corpului uterin sau a colului uterin atenuează de obicei situația și permite infuzia de material seminal. Pentru a verifica dacă cateterul se află într – adevăr în uterul cățelei pot fi perfuzate 1-2 ml de soluție salină fiziologică. Dacă cateterul este în poziția corectă în corpul uterin, lichidul poate fi ușor infuzat. Dacă, pe de altă parte, cateterul se află în regiunea paracervicală, va exista un flux de soluție salină aproape imediat între cateter și teaca de nailon. Cateterul este îndepărtat și sferturile posterioare ale cățelei sunt ridicate și cățeaua este ținută în această poziție timp de 5 – 10 minute după AI pentru a minimiza refluxul de material seminal și pentru a facilita transportul uterin al spermatozoizilor către oviducte . Cățeaua ar trebui să fie, de asemenea, cu pene în jurul regiunii perineale, deoarece se crede că aceasta stimulează contracțiile uterine. Pentru a învăța această tehnică necesită o anumită practică, dar odată învățată este o metodă rapidă, de obicei fiind realizată în câteva minute. Se recomandă ca, inițial, probele de organe să fie obținute în scopuri de antrenament și studiu anatomic. Este, de asemenea, un avantaj dacă se fac mai ales primele încercări la cățelele care au născut una sau mai multe așternuturi, deoarece acestea sunt de obicei mult mai ușor de cateterizat. Perforațiile pot apărea dacă cateterul este introdus orbește sau cu forță. Cu condiția ca cateterizarea să fie efectuată sub control palpator atent, totuși, tehnica este complet sigură pentru cățea. Unele cățele sunt mai greu de cateterizat, în special cele aparținând unor rase uriașe, precum și animale obeze sau nervoase. Utilizarea cateterului scandinav numai între 2 și 3,5% din încercările de cateterizare intrauterină nu au avut succes . Ratele rezultate de whelping folosind material seminal congelat-dezghețat au fost raportate a fi 84.5% și 71% atunci când sunt efectuate de inseminatori calificați, o medie de 65% cu material seminal proaspăt și refrigerat și 52% cu material seminal congelat-dezghețat, într-un studiu de teren mai larg care a implicat și inseminatori mai puțin experimentați (Fig. 1). Această tehnică poate fi utilizată și pentru perfuzia intrauterină a mediului de contrast pentru examinarea histerografică a cățelei .

inseminarea intrauterină folosind vizualizarea endoscopică a colului uterin

inseminarea intrauterină transcervicală poate fi realizată și cu ajutorul unui endoscop fibroptic rigid și a unui cateter urinar sau angiografic, pe cățeaua în picioare și fără sedare (Fig. 4 și Fig. 5).

inseminarea intrauterină folosind laparoscopie

laparoscopia abdominală ar trebui să ofere o alternativă ceva mai acceptabilă la intervenția chirurgicală completă pentru AI la câine. Tehnica a fost descrisă de Wildt și Silva și colab. . O rată de sarcină de 60 până la 73% a fost raportată de AI folosind laparoscopie , dar numărul cățelelor din aceste studii a fost mic.

inseminarea intrauterină prin intervenție chirurgicală

a fost raportată intervenția chirurgicală pentru efectuarea inseminării intrauterine . Au fost utilizate diverse proceduri chirurgicale, cu cățea sub anestezie generală și în recumbență dorsală. Abdomenul ventral este tăiat, iar după pregătirea chirurgicală de rutină se face o incizie de 4 -6 cm la jumătatea distanței dintre pubis și ombilic, prin linea alba. Uterul este ridicat prin incizie, iar acul seringii care conține materialul seminal este introdus în lumenul corpului uterin la un unghi de 45o cu teșitura acului în sus. Materialul seminal este injectat lent în uter. Ar trebui să curgă ușor cu distensie evidentă a coarnelor uterine, altfel acul ar trebui repoziționat. Un tifon umezit cu soluție salină este ținut peste locul injectării după extragerea acului. După 1 min, tifonul este îndepărtat, uterul înlocuit în abdomen și rana închisă folosind Metodologia de rutină. Pentru a evita refluxul de material seminal, cățeaua trebuie poziționată cu spatele ridicat pe măsură ce se recuperează din anestezie . Aproximativ 60% rata sarcinii a fost raportată după AI chirurgicală la câine , dar, la fel ca în cazul AI laparoscopic, rezultatele se bazează pe studii experimentale limitate și nu sunt disponibile date de teren pentru evaluare folosind niciuna dintre metode. Dacă este acceptabil din punct de vedere etic să recurgeți la intervenții chirurgicale pentru a realiza sarcini este discutabil. Metoda, deși susținută de unii, este considerată de mulți ca fiind lipsită de etică și inacceptabil de stresantă pentru cățea. Riscurile pentru infecție etc. asociate cu chirurgia în general și numărul limitat de ai chirurgicale care pot fi efectuate într-o anumită cățea sunt două dezavantaje evidente. Metoda este, de asemenea, costisitoare și consumatoare de timp.

1. Seager SWJ, Platz CC, Fletcher WS. Ratele de concepție și datele aferente folosind spermă de câine congelată. J Reprod Fertil 1975; 45:189-192.

2. Linde-Forsberg C, Forsberg M. fertilitatea la câini în raport cu calitatea materialului seminal și timpul și locul inseminării. J Reprod Fertil 1989; 39(Supliment): 299-310. – PubMed –

3. Linde-Forsberg C, Forsberg M. Rezultatele a 527 de inseminări artificiale controlate la câini. J Reprod Fertil 1993; 47(Supliment): 313-323. – PubMed –

4. Linde-Forsberg C, str Inktim Holst B, Govette G. compararea datelor de fertilitate din inseminarea vaginală vs intrauterină a materialului seminal de câine congelat-dezghețat: un studiu retrospectiv. Teriogenologie 1999; 52: 11-23. – PubMed –

5. Linde-Forsberg C. date privind fertilitatea din 2041 inseminări artificiale controlate la câini. În: procedura celui de-al 4-lea Int Symp Canine Feline Reprod, Oslo, 2000, 120 p.(abtr.)

6. Thomassen R, Farstad W, Krogenaes, a, Fougner, J. A. și Andersen Berg K. Inseminarea artificială cu spermă înghețată la câine. Un studiu retrospectiv. J Reprod Fertil 2001, în presă.

7. Tsutsui T, Kawakami E, Murao I și colab. Transportul spermatozoizilor în tractul reproductiv al cățelei: observații prin fistule uterine. Jpn J Vet Sci 1989; 51: 560-565. – PubMed –

8. Linde-Forsberg C. inseminarea artificială cu material seminal proaspăt, răcit extins și congelat-dezghețat la câine. Seminarii în Vet med Surg (Animal mic) 1995;10: 48-58.

9. Tsutsui T, Tezuka T, Shimizu T, Murao I, Kawakami E, Ogasa A. Inseminarea artificială cu material seminal proaspăt în cățelele Beagle. Jpn J Vet Sci 1988; 50: 193-198.

10. Andersen K. inseminarea cu spermă de câine congelată bazată pe o nouă tehnică de inseminare. Zuchthyg 1975; 10: 1-4.

11. Linde C. transportul lichidului radioopac în uter după depunerea vaginală la cățeaua estrală. Acta vet scand 1978; 19: 463-465.

12. Funkquist B, Lagerstedt A-S, Linde C, Obel N. Histerografie în cățea. Vet Radiol 1985; 26: 12-18.

13. Wilson M. inseminare artificială intrauterină non-chirurgicală la cățele folosind material seminal congelat. J Reprod Fertil 1993; 47( Suppl): 307-311. – PubMed –

14. Battista M, Parks J, Concannon PW. Supraviețuirea spermei Canine după dezghețare după înghețarea în paie sau pelete folosind țevi, lactoză, tris sau extendere de testare. În: lucrările celui de-al 11-lea Congres Int Anim Reprod și AI, Dublin 1988;3: 229-231.

15. Wildt DE. Laparoscopie. În: Burke TJ, ed. Reproducerea animalelor mici și infertilitatea. Philadelphia: Lea & Febiger, 1986;121-140.

16. Silva LDM, Onclin K, Snaps F, Verstegen JP. Inseminarea intrauterină laparoscopică la cățea. Teriogenologie 1995; 43: 615-623.

17. Silva LDM, Verstegen JP. Comparații între trei diluanți diferiți pentru inseminarea intrauterină canină cu spermatozoizi congelați-dezghețați. Teriogenologie 1995; 44: 571-579.

18. Silva LDM, Onclin K, Lejeune B, Verstegen JP. Comparații ale inseminării intravaginale și intrauterine a cățelelor cu material seminal proaspăt sau congelat. Vet Rec 1996; 138: 154-157. – PubMed –

19. Smith FO, Graham EF: crioconservarea materialului seminal canin: tehnică și performanță. În: lucrările celui de-al X-lea Congres Int Anim Reprod și AI, Champaign-Urbana 1984;2: 216.

20. Hutchison RV. Vaginal & depunerea chirurgicală intrauterină a materialului seminal. În: Proceedings of the Canine Theriogenology Short Course 1993; 33-37.

21. Hutchison RV. Maximizarea ratelor de concepție folosind material seminal canin proaspăt răcit sau congelat. În: Proceedings of the Canine Male Reprod Symp 1997; 61-70.