| mag vs resolution | working distance | monocular parts | care of the microscopes |
| monocular focusing | oil immersion | measuring field diameter | binocular parts | binocular focusing | PDF version| Microscopy Exercises |

A. Introducere

microscopul luminos compus tipic (Fig.1) este capabil să ne crească capacitatea de a vedea detaliile de 1000 de ori, astfel încât să poată fi văzute obiecte de 0,1 micrometri (um) sau 100 nanometri (nm). Microscoapele electronice extind acest interval,permițându-ne să vedem obiecte la fel de mici ca 0,5 nm în diametru sau aproximativ 1/200.000 dimensiunea pe care o putem vedea cu ochiul liber. Inutil să spun că dezvoltarea și utilizarea microscoapelor ne-au îmbunătățit foarte mult înțelegerea celulelor și a structurii și funcției lor.

Figura 1. Microscop compus Binocular.

B. mărirea, rezoluția și distanța de lucru

mărirea este pur și simplu o funcție de a face un obiect să pară mai mare, cum ar fi atunci când folosim un obiectiv manual pentru a mări cuvântul tipărit. Simpla mărire a unui obiect fără o creștere simultană a cantității de detalii văzute nu va oferi privitorului o imagine bună. Capacitatea unui microscop (sau a unui ochi) de a vedea detaliile este o funcție a puterii sale de rezolvare. Puterea de rezolvare este definită ca distanța minimă dintre două obiecte la care obiectele pot fi distinse doar ca separate și este o funcție a lungimii de undă a luminii utilizate și a calității opticii. În general, cu cât lungimea de undă a sursei de lumină este mai scurtă, cu atât rezoluția microscopului este mai mare.

distanța de lucru este distanța dintre lentila obiectivului și specimen. La mărire mică distanța de lucru este relativ lungă. Pe măsură ce măriți mărirea, distanța de lucru scade dramatic. Lentilele de imersie în ulei ating pactic specimenul. Fiți conștienți de această modificare a distanței de lucru cu mărirea crescândă, astfel încât să preveniți deteriorarea specimenelor dvs.

partea de sus a paginii

C. părți ale microscopului luminos compus Monocular:

vă rugăm să luați timp pentru a vă familiariza cu microscopul și utilizarea corectă a acestuia. Comenzile celor două mărci de Microscoape pe care le folosim în cursurile noastre sunt prezentate mai jos (Fig. 2).

Figura 2. Controale pe microscoapele compuse binoculare Leica și Olympus.

1. Lentile oculare sau ocular: ale noastre sunt mărire 10x. Domeniile pe care le vom folosi sunt Monoculare (doar un ocular.)

2. Tubul corpului: conține oglinzi și prisme care direcționează imaginea către lentila oculară.

3. Nosepiece: deține lentile obiectiv, se rotește, nota opriri pozitive pentru fiecare obiectiv.

4. Lentile obiective: de obicei 3-4 pe domeniile noastre, 4x, 10x, 43x, 100x imersiune în ulei (bandă roșie). Mărire totală = putere oculară x putere obiectivă.

5. Etapă: platformă pe care sunt montate diapozitive pentru vizualizare; unele domenii au etape mecanice. Aflați cum să fixați diapozitivul în poziție corect.

6. Diafragma: diafragma controlează cantitatea de lumină care trece la specimen și poate afecta drastic focalizarea imaginii. ÎNVAȚĂ SĂ FOLOSEȘTI DIAFRAGMA CÂT MAI REPEDE POSIBIL. CELE MAI MULTE PROBLEME PE CARE LE VEȚI AVEA FOCALIZAREA SE VOR DATORA REGLĂRII INCORECTE A LUMINII.

avem două tipuri:

• iris diafragma: uita-te pentru o pârghie chiar sub scena lângă partea din față.
• tip de apelare: chiar sub scenă este un cadran rotativ cu deschideri de dimensiuni diferite (găuri); acest tip este util pentru crearea unui efect de câmp pseudo întunecat.

7. Butoane de focalizare: situat pe partea microscopului; exterior este focalizarea fină și cel mai interior este focalizarea grosieră.
8. Sursa de lumină: domeniile noastre au construit în surse de lumină. Comutatorul cu buton este situat (cel mai adesea) în spatele obiectivului luminos de pe bază.

partea de sus a paginii

D. Îngrijirea și manipularea microscopului compus

există doar câteva reguli ABSOLUTE de respectat în îngrijirea microscoapelor pe care le veți folosi. Având grijă, aceste instrumente vor dura multe decenii și vor continua să funcționeze bine. Vă rugăm să raportați imediat instructorului orice defecțiune.

1. Folosiți întotdeauna două mâini pentru a purta luneta – una pe braț și una sub bază – fără excepții! Nu purtați niciodată domeniul de aplicare cu susul în jos, pentru că ochiul poate și va cădea.

2. Utilizați hârtie pentru lentile pentru a curăța toate lentilele înainte de fiecare sesiune de laborator și după utilizarea lentilei de imersie în ulei. NU FOLOSIȚI NICIODATĂ, NU ACUM, NU FOLOSIȚI NICIODATĂ ALTCEVA DECÂT HÂRTIE PENTRU LENTILE PENTRU A CURĂȚA LENTILELE. Alte hârtii sunt prea impure și vor zgâria acoperirea optică a lentilelor. De asemenea, nu utilizați lichide la curățarea lentilelor – numai hârtie pentru lentile!

3. Utilizați întotdeauna tehnica adecvată de focalizare pentru a evita împingerea obiectivului într – un diapozitiv-acest lucru poate rupe obiectivul obiectivului și/sau poate distruge un diapozitiv scump.

4. Opriți întotdeauna lumina atunci când nu utilizați domeniul de aplicare.

5. Așezați întotdeauna cu atenție firul din calea răului. Firele înfășurate în spațiile picioarelor invită la un dezastru major la microscop. Încercați să glisați firul în jos prin mânerele sertarului bside spațiul bancului.

6. Înlocuiți întotdeauna capacul microscopului atunci când îl puneți deoparte

în partea de sus a paginii

E. procedura de focalizare: Microscoape compuse Monoculare

1. Porniți sursa de lumină.

2. Treceți la obiectivul de 10x.

3. Înapoi pe focalizarea grosieră pentru a ridica piesa nasului.

4. Așezați diapozitivul specimenului pe scenă și fixați-l în poziția corectă. Uită-te la diapozitiv și așezați-l astfel încât specimenul să fie peste deschiderea luminii din scenă.

5. Lentila obiectivului inferior la limita inferioară (aproape de diapozitiv). Ridicați obiectivul folosind butonul de focalizare grosieră până când vedeți că imaginea intră în focalizare și apoi ieșiți din nou, apoi focalizați înapoi până când găsiți focalizarea centrală. Reglați focalizarea fină în mod similar.

6. Centrați imaginea și reglați lumina folosind diafragma.

7. Recenter și reglați focalizarea, mai întâi grosieră, apoi focalizarea fină ca la Pasul 5.

8. Reajustați diafragma după cum este necesar.

9. Acum treceți obiectivele la 43x dacă este necesară o mărire mai mare. Reajustați focalizarea fină și lumina (diafragma) după cum este necesar.

domeniile noastre sunt parfocale, ceea ce înseamnă că atunci când treceți de la putere mică (100x) la putere mare (430X), o imagine focalizată la putere mică va rămâne mai mult sau mai puțin focalizată la putere mai mare. Cel mai probabil va trebui să reajustați ușor focalizarea fină și diafragma.

în partea de sus a paginii

F. procedura de imersie în ulei

pe unele dintre microscoapele noastre monoculare și pe toate microscoapele compuse binoculare, avem lentile de imersie în ulei de 100x. Acestea pot fi identificate printr-o bandă roșie în jurul carcasei obiectivului. La măriri mai mari de aproximativ 500x lumina este refractată prea mult pe măsură ce trece prin aer pentru a produce o putere de rezolvare bună. Astfel, optica pentru aceste măriri mai mari este utilizată cu un ulei mineral de înaltă calitate ca mediu pentru transmiterea luminii. Este imperativ să utilizați numai ulei de imersie și să curățați bine obiectivul cu hârtie pentru lentile după fiecare utilizare.

1. Localizați regiunea de interes pe diapozitiv și centrați-o la 430x.

2. Ridicați lentila obiectivului la limita sa (adică., maximizați distanța dintre etapă și obiective) și rotiți obiectivul din drum aproximativ la jumătatea drumului până la poziția următoare.

3. Așezați cu grijă o mică picătură de ulei de imersie direct pe diapozitiv peste centrul regiunii de interes.

4. Rotiți obiectivul de imersie în ulei în poziție și, cu atenție, în timp ce priviți din lateral, coborâți-l folosind butonul de focalizare grosieră până când obiectivul intră doar în contact cu picătura de ulei. Veți vedea picătură salt în sus într-o coloană ca contactul se face.

5. Coborâți lentila un smidgen mai mult și apoi, folosind focalizarea fină și privind prin lentila oculară, concentrați-vă pe specimen.

6. Când ați terminat, curățați lentila cu hârtie pentru lentile până când nu mai apare ulei și curățați diapozitivul dacă trebuie salvat.

partea de sus a paginii

G. determinarea diametrului câmpului vizual

poate doriți să estimați dimensiunea specimenelor (de exemplu, celule) pe care le veți vedea în laborator. Cel mai bun mod de a face acest lucru este cu un micrometru ocular, o inserție de lentile oculare de precizie care are o riglă gravată în sticlă. Domeniile Monoculare pe care le folosim în cursurile introductive nu sunt atât de echipate, așa că vom folosi o metodă alternativă bazată pe cunoașterea diametrului câmpului vizual pentru microscopul dvs. particular. Pentru a face acest lucru, trebuie să determinați:

• diametrul aproximativ al câmpului de vizualizare cu mărire redusă pentru microscopul dvs. particular.
• mărirea totală pentru fiecare dintre celelalte obiective.

știind acest lucru pentru fiecare obiectiv obiectiv, puteți compara dimensiunea specimenului cu diametrul câmpului cunoscut și puteți face un esimat rezonabil de dimensiune. Această tehnică funcționează pentru orice microscop.

1. Obțineți o scală de diapozitive și poziționați-o pe domeniul dvs. de aplicare. O riglă metrică transparentă va funcționa, de asemenea.

2. Aduceți-l în centrul atenției folosind obiectivul 10x (100x total). Barele de scară sunt trepte de 1mm așa cum se arată în figura de mai jos. Astfel, o bară neagră = 0,5 mm la fel ca un spațiu.

3. Mutați diapozitivul astfel încât marginea unei bare negre exterioare să fie doar tangentă cu câmpul luminat (a se vedea punctul „A” de mai sus).

4. Începând de la acea margine, estimați câte bare și spații este nevoie pentru a traversa câmpul vizual. Probabil va trebui să estimați ultima fracțiune a unui spațiu sau a unei bare. Pentru majoritatea microscoapelor noastre are o lățime de aproximativ 1,8 -2,0 mm. Trebuie să verificați acest lucru pe orice microscop pe care îl utilizați, care nu are un micrometru ocular.

5. Înregistrați numărul de identificare al domeniului de aplicare și diametrul câmpului la 100x în notebook-ul de laborator pentru referințe viitoare.

6. Apoi, calculați lățimea câmpului la o mărire totală de 430x folosind următoarea formulă (ne referim la 100x mag ca „putere redusă” și 430x ca „putere mare”):

(putere redusă mag/ putere mare mag) x Diametru câmp de putere redusă (în mm)

de exemplu, să presupunem că determinați că diametrul câmpului 100x este de 1,8 mm, la 430x, diametrul câmpului ar fi:

(100 / 430) x 1,8 mm = 0,418 mm = 418 um (micrometri)

rețineți că diametrul câmpului la putere mare este proporțional cu raportul dintre obiectivele de putere mică și mare. Adică, pe măsură ce măriți mărirea, câmpul vizual real devine proporțional mai mic.

partea de sus a paginii

H. microscoape optice compuse binoculare
părți ale microscopului luminos

1. Lentile oculare sau ocular: ale noastre sunt mărire 10x. Domeniile pe care le vom folosi sunt binoculare (două oculare).

2. Tubul corpului: conține oglinzi și prisme care direcționează imaginea către lentilele oculare.

3. Nosepiece: ține lentilele obiectivului, se rotește

4. Lentile obiective: de obicei 3-4 pe domeniile noastre, 4x, 10x, 43x, 100x imersiune în ulei (bandă roșie). Mărire totală = putere oculară x putere obiectivă. Majoritatea binoclurilor noastre au lentile de poziție fixe-scena se mișcă în sus și în jos, mai degrabă decât obiectivul.

5. Etapă: platformă mobilă pe care sunt montate diapozitive pentru vizualizare; toate domeniile noastre au trepte mecanice cu cântare X,Y vernier. Butoanele de focalizare deplasează scena în sus și în jos.

6. Condensator: un obiectiv secundar care focalizează lumina pe specimen. Binoclurile noastre au condensatori care se mișcă în sus și în jos pentru a focaliza fasciculul de lumină.

7. Iris Diafragma: diafragma este situată chiar sub scenă și controlează cantitatea de lumină care trece la specimen și poate afecta drastic focalizarea imaginii.

8. Butoane de focalizare: cel mai exterior este focalizarea fină și cel mai interior este focalizarea grosieră. Pe Binocluri, aceste butoane controlează mișcarea în sus / în jos a scenei.

9. Sursa de lumină: domeniile noastre au construit în surse de lumină. Comutatorul de pornire/oprire a reostatului este amplasat fie pe domeniul de aplicare, fie pe sursa de alimentare externă și este utilizat pentru reglarea intensității luminii.

partea de sus a paginii

I. procedura de focalizare: Microscoape compuse binoculare

1. Porniți sursa de lumină. Domeniile Binoc au fie o unitate încorporată, fie o sursă de alimentare externă.

2. Treceți la obiectivul de 10x.

3. Reglați focalizarea grosieră pentru a ridica piesa nasului (sau a coborî scena).

4. Fixați diapozitivul specimenului pe scenă în poziția corectă.

5. Uită-te la lentilele oculare ale domeniului tău de aplicare. Un obiectiv este fix, iar celălalt are un inel de focalizare (ca o pereche de binocluri). Aduceți obiectivul cât mai aproape de diapozitiv, apoi, privind Doar prin lentila oculară fixă, înapoi până când specimenul intră în focalizare. Reglați focalizarea fină în mod similar pentru obiectivul fix.

6. Acum, privind Doar prin ochiul reglabil, reglați focalizarea folosind inelul de focalizare din jurul obiectivului. Priviți cu ambii ochi (reglați distanța interpupilară pentru a vedea un singur câmp luminat rotund) și efectuați orice ajustări minore pentru a focaliza.

7. Centrați imaginea și reglați lumina folosind lentila condensatorului, diafragma irisului și reostatul sursei de lumină.

8. Recenter și reglați focalizarea, mai întâi grosieră, apoi focalizarea fină ca în 5.

9. Reajustați diafragma după cum este necesar.

10.Acum treceți obiectivele la o putere mai mare. Reajustați focalizarea fină și lumina (diafragma) după cum este necesar.

domeniile noastre sunt parfocale, ceea ce înseamnă că atunci când treceți de la putere mică la putere mare, o imagine focalizată la putere mică va rămâne mai mult sau mai puțin focalizată la putere mai mare. Cel mai probabil va trebui să reajustați focalizarea fină și diafragma ușor (creșteți lumina la puteri mai mari.

Modified 11-6-15 gja

Department of Biology, Bates College, Lewiston, ME 04240