¿Qué es un anticuerpo policlonal?
Cómo hacer que los anticuerpos policlonales
Un anticuerpo policlonal es una colección de manyimmunoglobulins, cada generados a partir de un B-clon de células. Estos anticuerpos se dirigen a diferentes epítopos, o sitios de unión, en un único antígeno. La derivación de múltiples clones de células B y la posterior orientación de múltiples epítopos es lo que diferencia los anticuerpos policlonales de los anticuerpos monoclonales.
Cómo fabricar anticuerpos policlonales
Toda la generación de anticuerpos, policlonales o monoclonales, comienza con la obtención de una respuesta inmunitaria, denominada inmunización. Los objetivos previstos son inyectados en el huésped, reconocidos por el sistema inmunitario como extraños, y dirigidos por anticuerpos para la obstrucción o eliminación inmunitaria. La falta de respuesta inmune requeriría el uso de adyuvantes, sustancias inmunogénicas como el adyuvante de Freund o la hemocianina de lapa de ojo de cerradura (KLH), para impulsar aún más el reclutamiento inmune. La inmunización comprende la mayoría de lo que se requiere para fabricar anticuerpos policlonales. A continuación se describe una respuesta inmunitaria típica.
La fabricación De anticuerpos Comienza Con Inmunización
La exposición inicial para la Respuesta Inmunitaria Primaria
La exposición inicial del huésped al antígeno con adyuvantes apropiados se denomina inmunización Primaria. Los métodos típicos de exposición incluyen inyección en la piel, el peritoneo, la capa subcutánea o el músculo. Las alternativas menos comunes son la administración oral e intranasal.La inmunización con ADN también es una tecnología emergente para antígenos tóxicos o difíciles de producir. Cualquier exposición posterior al antígeno se denomina inmunización de «refuerzo».
Procesamiento de Antígenos mediante Células Presentadoras de Antígenos
Los macrófagos, las Células Dendríticas (DC) y, en menor medida, las células B, todas las células presentadoras de antígenos (APC), internalizan el antígeno mediante endocitosis o fagocitosis. El procesamiento de antígenos rompe el antígeno en trozos más pequeños que luego se mueven a la superficie del APC.
La estimulación de células B
El reconocimiento de antígenos presentes en la superficie de los APC induce la liberación de moléculas de señalización estimuladoras, citoquinas, de Células T Colaboradoras. Estas citocinas activan las células B que también reconocen el antígeno a través de su receptor de células B (BCR). Algunas células B no requieren activación de células T colaboradoras después de la interacción entre el antígeno BCR, por lo general produciendo una respuesta inmunitaria más rápida con anticuerpos de menor afinidad. La participación de las células T colaboradoras es fundamental en una respuesta inmunitaria repleta, así como en la regulación de la auto tolerancia.
Proliferación de células B y Secreción de anticuerpos
Las células B activadas se dividen para crear poblaciones de células B de memoria y de células plasmáticas. Ambos tipos de células reconocen el mismo epítopo. Las células plasmáticas secretan anticuerpos en el suero para el reconocimiento inmunitario, mientras que las células B de memoria persisten durante períodos más largos, lo que proporciona una respuesta rápida a la exposición secundaria del mismo antígeno.
Medir la Respuesta inmune
Medir los niveles de anticuerpos durante el proceso de inmunización es necesario para evaluar el progreso. AnELISA contra el antígeno diana compara muestras de suero inmunizadas con muestras de suero preinmunizadas que revelan el grado de respuesta inmunitaria impulsada por la inmunización. Las diluciones seriadas de las muestras determinan el título del anticuerpo. Típicamente un 1:64.000 títulos se consideran una respuesta inmunitaria robusta y suficiente para proceder a la recolección de suero o fusión de linfocitos. Los títulos más bajos pueden requerir inmunizaciones de refuerzo posteriores, vías de administración alternativas o adyuvantes adicionales.
Recolección de anticuerpos policlonales en suero
La producción de anticuerpos policlonales solo requiere la recuperación de sangre del animal huésped y la separación de la fracción celular de la fracción sérica que contiene anticuerpos secretados. Como muchos anticuerpos específicos de antígenos son secretados por múltiples células B activadas, el suero sanguíneo contiene los muchos productos de diferentes clones de anticuerpos, de ahí el término anticuerpo policlonal. Específicamente, la creación de múltiples anticuerpos clonales contra un antígeno se logra mediante el procesamiento del antígeno en fragmentos, así como cada fragmento que tiene regiones más pequeñas, denominadas epítopos. Cada uno puede ser reconocido por BCR específicos. Distintas poblaciones de células B secretan anticuerpos específicos, pero diferentes, contra el mismo antígeno. Además, el suero contiene no solo anticuerpos dirigidos contra el antígeno diana previsto,sino todas las demás inmunoglobulinas contra otras dianas, medicamentos, hormonas, etc. que están en el suero. El suero se puede utilizar directamente como sonda de biología molecular, pero a menudo requiere una mayor purificación para aumentar la sensibilidad y especificidad de un ensayo en particular. La purificación de afinidad logra la recuperación de anticuerpos en diversos grados dependiendo de la técnica, como se muestra a continuación, sin embargo, ninguno alcanza la especificidad de nivel de epítopo de un anticuerpo monoclonal.
| Affinity Purification Technique | Pro | Con |
|---|---|---|
| Protein A/G | Simple, Cost effective | Recovers all immunoglobulin. |
| Antigen Specific | Recovers only antigen specific antibody. | Requiere una cantidad no trivial de antígeno. |
Polyclonal Antibody Applications
| Application | Polyclonal AntibodyUse Rationale |
|---|---|
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ELISA Detection Antibody
(direct, indirect, sandwich, and capture ELISA formats) |
Binds multiple epitopes to deliver many detection molecules.
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ELISA Capture Antibody
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Polyreactivity can maximally recover antigen from samples.
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Western Blot
Detection Antibody |
Multiple epitope recognition can allow for antigen changes (denaturing/linearizing).
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Target recognized by many Ab for maximal drug delivery, immune recruitment, blocking, or activation.
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Ensayos Clínicos
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el potencial aumento de la capacidad de detección.
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