O que é um anticorpo policlonal?
Como fazer anticorpos policlonais
Um anticorpo policlonal é uma coleção de manyimmunoglobulins, cada geradas a partir de diferentes células B clone. Estes anticorpos visam diferentes epítopos, ou locais de ligação, em um único antígeno. Derivação de múltiplos clones de células B e posterior direcionamento de múltiplos epitópios é o que diferencia anticorpos policlonais de anticorpos homonoclonais.
como produzir anticorpos policlonais
toda a geração de anticorpos, policlonais ou monoclonais, começa com a elicição de uma resposta imunitária, denominada imunização. Os alvos pretendidos são injetados no hospedeiro, reconhecido pelo sistema imunológico como estranho, e direcionados por anticorpos para bloqueio imunológico ou depuração. A incapacidade de montar uma resposta imunitária exigiria o uso de adjuvantes, substâncias imunogênicas, tais como o adjuvante de Freund ou hemocianina limpeta de fechadura (KLH), para impulsionar ainda mais o recrutamento imunológico. A imunização compreende a maioria do que é necessário para produzir anticorpos policlonais. A resposta imunitária típica é descrita abaixo.
Fazendo Anticorpos Começa Com a Imunização
a Exposição Inicial para o Primeiro-Resposta Imune
host Inicial a exposição ao antígeno com, apropriado adjuvantes, a exposição é chamado de “Primeira” imunização. Os métodos típicos de exposição incluem a injecção na pele, peritoneu, camada subcutânea ou músculo. Alternativas menos comuns são a administração oral e intranasal.A imunização do ADN é também uma tecnologia emergente para a produção de antigénios tóxicos ou de outra forma difícil. Qualquer exposição subsequente ao antigénio é denominada imunização “boost”.
processamento do antigénio por células que apresentam antigénios
macrófagos, células dendríticas (DC), e, em menor extensão, células B, todas as células que apresentam antigénios (Pcpa), internalizar o antigénio por endocitose ou fagocitose. O processamento do antigénio quebra o antigénio em pedaços mais pequenos, que são depois movidos para a superfície da APC.
estimulação das células B
reconhecimento do antigénio apresentado na superfície dos RCP induz a libertação de moléculas de sinalização estimuladoras, citoquinas, das células T auxiliares. Estas citoquinas activam células B que também reconheceram o antigénio através do seu receptor das células B (BCR). Algumas células B não necessitam de activação auxiliar das células T após a interacção do antigénio BCR, produzindo normalmente uma resposta imunitária mais rápida com anticorpos de menor afinidade. O envolvimento das células T auxiliares é fundamental numa resposta imunitária repleta, bem como na auto-tolerância regulatória.
proliferação de células B e secreção de anticorpos
células B activadas dividem-se para criar as populações de células B e plasma da memória. Ambos os tipos de células reconhecem o mesmo epítopo. As células plasmáticas secretam anticorpos no soro para o reconhecimento imunológico enquanto as células B da memória persistem por períodos mais longos, proporcionando uma resposta rápida à exposição secundária do mesmo antigénio.é necessário medir os níveis de anticorpos durante o processo de imunização para avaliar o progresso. AnELISA contra o antigénio alvo compara amostras de soro imunizadas com amostras de soro pré-imunizado, revelando o grau de resposta imunitária impulsionado pela imunização. As diluições em série das amostras determinam o título do anticorpo. Tipicamente um 1:64 000 títulos são considerados uma resposta imunitária robusta e suficientes para prosseguir com a colheita sérica ou fusão linfocitária. Títulos mais baixos podem requerer imunizações adicionais, vias alternativas de administração ou adjuvantes adicionais.a produção de anticorpos policlonais para a colheita sérica de anticorpos
a produção de anticorpos policlonais requer apenas a recuperação de sangue do animal hospedeiro e a separação da fracção celular da fracção sérica contendo anticorpos secretados. Como muitos anticorpos específicos do antigénio são segregados por várias células B activadas, o soro sanguíneo contém os muitos produtos de diferentes clones de anticorpos, daí o termo anticorpo policlonal. Especificamente, a criação de múltiplos anticorpos clonais contra um antígeno é alcançada tanto pelo processamento de antígeno em fragmentos, bem como cada fragmento com regiões menores, chamados epítopos. Cada um pode ser reconhecido por BCRs específicos. Populações distintas de células B secretam anticorpos específicos, mas diferentes contra o mesmo antigénio. Além disso, o soro contém não só anticorpos dirigidos contra o antigénio alvo pretendido, mas todas as outras imunoglobulinas contra outros alvos, medicamentos, hormonas, etc. isso está no soro. O soro pode ser usado diretamente como uma sonda de biologia molecular, mas muitas vezes requer purificação adicional para aumentar a sensibilidade e especificidade de um determinado ensaio. A purificação da afinidade alcança uma recuperação de anticorpos em diferentes graus, dependendo da técnica como mostrado abaixo, porém nenhuma atinge a especificidade de nível de epítopo de um anticorpo monoclonal.
| Affinity Purification Technique | Pro | Con |
|---|---|---|
| Protein A/G | Simple, Cost effective | Recovers all immunoglobulin. |
| Antigen Specific | Recovers only antigen specific antibody. | requer uma quantidade não trivial de antigénio. |
Polyclonal Antibody Applications
| Application | Polyclonal AntibodyUse Rationale |
|---|---|
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ELISA Detection Antibody
(direct, indirect, sandwich, and capture ELISA formats) |
Binds multiple epitopes to deliver many detection molecules.
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ELISA Capture Antibody
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Polyreactivity can maximally recover antigen from samples.
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Western Blot
Detection Antibody |
Multiple epitope recognition can allow for antigen changes (denaturing/linearizing).
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Target recognized by many Ab for maximal drug delivery, immune recruitment, blocking, or activation.
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Testes Clínicos
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Potencialmente, o aumento da capacidade de detecção.
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