| mag vs resolution | working distance | monocular parts | care of the microscopes |
| monocular focusing | oil immersion | measuring field diameter | binocular parts | binocular focusing | PDF version| Microscopy Exercises |

A. Introdução

O típico composto de microscópio de luz (Fig.1) é capaz de aumentar a nossa capacidade de ver detalhes em 1000 vezes para que objetos tão pequenos como 0,1 micrômetro (um) ou 100 nanômetros (nm) podem ser vistos. Os microscópios de elétrons estendem essa faixa permitindo – nos ver objetos tão pequenos quanto 0,5 nm em diâmetro ou aproximadamente 1/200.000 do tamanho que podemos ver a olho nu. Escusado será dizer que o desenvolvimento e o uso de microscópios melhorou muito a nossa compreensão das células e da sua estrutura e função.

Figura 1. Microscópio composto Binocular.

B. Ampliação, a Resolução e a Distância de Trabalho

Ampliação é simplesmente uma função de fazer um objeto parecer maior, como quando usamos uma lente de mão para ampliar palavra impressa. A mera ampliação de um objeto sem um aumento simultâneo na quantidade de detalhes vistos não dará ao espectador uma boa imagem. A capacidade de um microscópio (ou olho) para ver detalhes é uma função de seu poder de resolução. Resolução de potência é definida como a distância mínima entre dois objetos em que os objetos podem apenas ser distinguidos como separados e é uma função do comprimento de onda da luz utilizada e da qualidade da óptica. Em geral, quanto menor o comprimento de onda da fonte de luz, maior a resolução do microscópio.a distância de trabalho é a distância entre a lente objetiva e a amostra. Em baixa ampliação, a distância de trabalho é relativamente longa. À medida que você aumenta a ampliação, a distância de trabalho diminui drasticamente. As lentes de imersão em óleo tocam pacticamente no espécime. Esteja ciente desta mudança na distância de trabalho com o aumento da ampliação de modo a evitar danos aos seus espécimes.partes do microscópio Monocular composto de luz: por favor, tome algum tempo para se familiarizar com o seu microscópio e com a sua utilização adequada. Os controles das duas marcas de microscópios que usamos em nossos cursos são mostrados abaixo (Fig. 2).

Figura 2. Controles nos microscópios de compostos binoculares de Leica e Olympus.

1. Lente Ocular ou ocular: a nossa ampliação é de 10x. Os escopos que vamos usar São Monoculares(uma única ocular.)

2. Tubo corporal: contém espelhos e prismas que direccionam a imagem para a lente ocular.3. Nosepiece: segura as lentes objetivas, roda, Nota as paragens positivas para cada lente.4. Lentes objetivas: geralmente 3-4 em nossos âmbitos, 4x, 10x, 43x, 100x imersão em óleo (bandagem vermelha). Ampliação Total = potência ocular x Potência objectiva.5. Fase: plataforma sobre a qual as lâminas são montadas para visualização; alguns âmbitos têm estágios mecânicos. Aprenda a grampear o slide na posição correta.6. Diafragma: o diafragma controla a quantidade de luz que passa para o espécime e pode afetar drasticamente o foco da imagem. APRENDA A USAR O DIAFRAGMA O MAIS RÁPIDO POSSÍVEL. A MAIORIA DOS PROBLEMAS QUE VOCÊ TERÁ FOCO SERÁ DEVIDO AO AJUSTE INCORRETO DA LUZ.

temos dois tipos:

• diafragma da íris: procure uma alavanca logo abaixo do palco perto da frente.
• dial type: logo abaixo do estágio está UM dial rotativo com aberturas de tamanho diferente (buracos); este tipo é útil para criar um efeito de campo pseudo escuro.

7. Botões de focagem: localizado no lado do microscópio; mais externo é o foco fino e mais interno é o foco grosseiro.
8. Fonte de luz: os nossos âmbitos foram construídos em fontes de luz. O interruptor de pushbutton está localizado (na maioria das vezes) atrás da lente de luz na base.

no topo da Página

D. Cuidado e manipulação do microscópio composto

existem apenas algumas regras absolutas para observar no cuidado com os microscópios que você vai usar. Estes instrumentos durarão muitas décadas e continuarão a funcionar bem. Por favor, informe imediatamente o seu instrutor de qualquer avaria.1. Use sempre duas mãos para carregar o escopo-um no braço e um sob a base – sem exceções! Nunca carregar o escopo de cabeça para baixo, pois a ocular pode e vai cair.2. Use papel de lente para limpar todas as lentes antes de cada sessão de laboratório e depois de usar a lente de imersão de óleo. NUNCA, NEM AGORA, NEM NUNCA, USE NADA ALÉM DE PAPEL DE LENTE PARA LIMPAR AS LENTES. Outros papéis são muito impuros e vai raspar o revestimento óptico nas lentes. Além disso, não use quaisquer líquidos ao limpar as lentes – apenas papel de lente!3. Use sempre a técnica de focagem adequada para evitar bater a lente objetiva em um slide-isso pode quebrar a lente objetiva e / ou arruinar um slide caro.4. Sempre desligue a luz quando não usar o escopo.5. Sempre cuidadosamente colocar o fio fora de perigo. Fios enrolados nos espaços das pernas convidam a um grande desastre de microscópio. Tenta deslizar o fio pela gaveta com as manivelas do banco.6. Substituir sempre a tampa no microscópio quando a colocar no topo da Página

E. procedimento de focagem: microscópios Monoculares compostos

1. Liga a fonte de luz.2. Muda para a lente de objectivo 10x.3. Afasta-te do foco grosseiro para levantar a parte do nariz.4. Colocar a lâmina do espécime no palco e na posição correcta. Olhe para o deslizamento e coloque-o para que o espécime esteja sobre a abertura de luz no palco.5. Lente objectiva inferior ao limite inferior (perto da lâmina). Elevar a lente usando o botão de foco grosseiro até que você veja a imagem entrar em foco e, em seguida, sair novamente, em seguida, concentrar-se de volta até que você encontrar o foco central. Ajustar o foco fino da mesma forma.6. Centrar a imagem e ajustar a luz usando o diafragma.7. Reentrar e ajustar o foco, primeiro grosseiro, em seguida, Fino Foco como no Passo 5.8. Reajustar o diafragma quando necessário.9. Agora mude os objetivos para o 43x se for necessária uma ampliação maior. Reajustar o foco fino e a luz (diafragma) conforme necessário.

nossos âmbitos são parfocais, o que significa que quando você muda de baixa (100x) para alta (430x) potência, uma imagem focada a baixa potência permanecerá mais ou menos em foco na maior potência. O mais provável é que tenhas de reajustar ligeiramente o foco e o diafragma.em alguns dos nossos microscópios Monoculares, e em todos os microscópios compostos binoculares, temos 100x lentes de imersão em óleo. Estes podem ser identificados por uma banda vermelha em torno da lente. Em ampliações maiores do que cerca de 500x luz é refratada demais à medida que passa pelo ar para produzir Boa Energia de resolução. Assim, a óptica para estas magnificações mais elevadas são feitas para usar com um óleo mineral de alta qualidade como meio de transmissão de luz. É imperativo que você use apenas óleo de imersão e que você limpe a lente completamente com papel de lente após cada uso.

1. Localize a região de interesse no seu ‘slide’ e Centre-a em 430x.

2. Elevem a lente objetiva ao seu limite (i.e., maximizar a distância entre o palco e os objetivos) e balançar a lente para fora do caminho cerca de meio caminho para a próxima posição.3. Cuidadosamente coloque uma pequena gota de óleo de imersão diretamente sobre o slide sobre o centro da região de interesse.4. Rode o objectivo de imersão do óleo em posição e, cuidadosamente, ao olhar de lado, baixa-o usando o botão de foco grosseiro até que a lente apenas faça contacto com a gota de óleo. Você verá a gota Saltar para uma coluna à medida que o contato é feito.5. Abaixe a lente um smidgen mais e, em seguida, usando o foco fino e olhando através da lente ocular, foco no espécime.6. Quando feito, lente limpa com papel de lente até que não saia mais óleo e deslize limpo, se for para ser salvo.

Top of page

G. Determining Field of View Diameter

pode querer estimar o tamanho dos espécimes (por exemplo, células) que irá ver no laboratório. A melhor maneira de fazer isso é com um micrômetro ocular, uma lente ocular de precisão que tem uma régua gravada em vidro. Os âmbitos Monoculares que usamos nos cursos introdutórios não estão tão equipados, então vamos usar um método alternativo baseado no conhecimento do diâmetro do campo de visão para seu microscópio particular. Para fazer isso, você deve determinar:

• O diâmetro aproximado do seu campo de visão de baixa ampliação para o seu microscópio particular. a ampliação total para cada uma das outras lentes objetivas. sabendo disso para cada lente objetiva, você pode comparar o tamanho da amostra com o diâmetro do campo conhecido e fazer um esimato razoável de tamanho. Esta técnica funciona para qualquer microscópio.
  

  1. Obtenha uma escala de deslizamento e posicione-a no seu escopo. Uma régua métrica transparente também funcionará.2. Coloque-o em foco usando o objetivo 10x (100x total). As barras de escala são incrementos de 1 mm, conforme mostrado na figura abaixo. Assim, uma barra preta = 0,5 mm assim como um espaço.3. Mova o slide de tal forma que a borda de uma barra preta exterior é apenas tangente ao campo iluminado (ver ponto “a” acima).4. A partir dessa aresta, estimar quantas barras e espaços são necessários para atravessar o campo de visão. Você provavelmente terá que estimar a última fração de um espaço ou barra. Para a maioria dos nossos microscópios tem aproximadamente 1,8-2,0 mm de largura. Você deve verificar isso em qualquer microscópio que você usa que não tem um micrômetro ocular.5. Regista o número de identificação e o diâmetro do campo da tua mira a 100x no teu caderno de laboratório para futura referência.6. Em seguida, calcular a largura do campo a 430x ampliação total usando a seguinte fórmula (nós nos referimos ao 100x mag como ” baixa potência “e 430x como”alta potência”):

  (baixa potência mag/ alta potência mag) x de baixa energia do campo diâmetro (em mm)

  Por exemplo, suponha que você determinar que a 100x campo diâmetro é de 1,8 mm, em 430x, o campo de diâmetro seria:

  (100 / 430) x 1,8 mm = 0.418 mm = 418 um (micrômetros)
  

  Observe que o campo diâmetro em alta potência é proporcional à razão entre a baixa para alta potência objetivos. Isto é, à medida que você aumenta a ampliação, o campo de visão real torna-se proporcionalmente menor.

  no topo da Página

  H. microscópios luminosos compostos Binoculares
  partes do microscópio luminoso

  1. Lente Ocular ou ocular: a nossa ampliação é de 10x. Os escopos que vamos usar São binoculares (dois eyepieces).2. Tubo corporal: contém espelhos e prismas que direccionam a imagem para as lentes oculares.3. Nosepiece: mantém as lentes objetivas, roda

  4. Lentes objetivas: geralmente 3-4 em nossos âmbitos, 4x, 10x, 43x, 100x imersão em óleo (bandagem vermelha). Ampliação Total = potência ocular x Potência objectiva. A maioria dos nossos binóculos tem lentes de posição fixas–o palco move-se para cima e para baixo em vez da lente.5. Palco: plataforma móvel sobre a qual as lâminas são montadas para visualização; todos os nossos âmbitos têm estágios mecânicos com escamas X,Y vernier. Os botões de foco movem o palco para cima e para baixo.6. Condensor: uma lente de sub-palco que foca a luz no espécime. Os nossos binóculos têm condensadores que se movem para cima e para baixo para focar o feixe de luz.7. Diafragma Da Íris: o diafragma está localizado logo abaixo do palco e controla a quantidade de luz que passa para o espécime e pode afetar drasticamente o foco da imagem.8. Saliências de focagem: exterior é o foco fino e interior é o foco grosseiro. Nos binóculos estes botões controlam o movimento para cima/para baixo do palco.9. Fonte de luz: os nossos âmbitos foram construídos em fontes de luz. O interruptor reóstato ligado/desligado está localizado no escopo ou na fonte de alimentação externa e é usado para regular a intensidade da luz.

  no topo da página

  I. procedimento de focalização: Microscópios de compostos binoculares

  1. Liga a fonte de luz. Os telescópios Binoc têm uma unidade incorporada ou uma fonte de alimentação externa.2. Muda para a lente de objectivo 10x.3. Ajustar o foco grosso para levantar a parte do nariz (ou baixar o estágio).4. Clipe o espécime deslizar no palco na posição adequada.5. Olha para as lentes oculares da tua Mira. Uma lente é fixa e a outra tem um anel de focagem (como um par de binóculos). Trazer a lente o mais perto possível do deslizamento, então, olhando apenas através da lente ocular fixa, para trás até que o espécime apenas entra em foco. Ajustar o foco fino da mesma forma para a lente fixa.6. Agora, olhando apenas através do ocular Ajustável, Ajuste seu foco usando o anel de foco em torno da lente. Olhar com ambos os olhos (ajustar para a distância interpupilar para ver um único campo arredondado iluminado) e fazer quaisquer pequenos ajustes para o foco.7. Centrar a imagem e ajustar a luz usando a lente condensadora, o diafragma da íris e o reóstato da fonte de luz.8. Reentrar e ajustar o foco, primeiro grosseiro, em seguida, Fino Foco como em 5.9. Reajustar o diafragma quando necessário.10.Agora muda os objectivos para uma potência superior. Reajustar o foco fino e a luz (diafragma) conforme necessário.

  nossos âmbitos são parfocais, o que significa que quando você muda de baixa para alta potência, uma imagem focada a baixa potência permanecerá mais ou menos em foco na maior potência. Muito provavelmente você terá que reajustar o foco fino e diafragma ligeiramente (aumentar a luz em poderes superiores.

Modified 11-6-15 gja

Department of Biology, Bates College, Lewiston, ME 04240