In: Recent Advances in Small Animal Reproduction, P. W. Concannon, G. England and J. Verstegen (Eds.) Wydawca: międzynarodowy serwis informacji weterynaryjnej (www.ivis.org), Ithaca, Nowy Jork, USA.

inseminacja wewnątrzmaciczna u psa za pomocą skandynawskiego cewnika Trans-szyjkowego i porównanie z innymi metodami ( 2-Feb-2001)

C. Linde-Forsberg

Wydział Medycyny Weterynaryjnej, Katedra Położnictwa i Ginekologii, Swedish University of Agricultural Sciences, Uppsala, Szwecja

wprowadzenie

zainteresowanie konserwacją i sztuczną inseminacją psów (AI) stale rośnie na całym świecie, ale stosunkowo niewiele badań jest publikowanych każdego roku w tej dziedzinie, a szczególnie trudno jest znaleźć dane dotyczące sztucznej inseminacji przy użyciu świeżego nasienia lub nasienia konserwowanego różnymi metodami chłodzenia, zamrażania i rozmrażania, a także porównywanie danych z Wyniki, gdy różne stosowane są techniki wykonywania inseminacji. Jednym z powodów niedoboru danych jest to, że jest kosztowne do badań eksperymentalnych u psów, i niewiele ośrodków badawczych może utrzymać Wystarczająco duże kolonie psów dla tego rodzaju badań. Innym powodem jest to, że większość dużych firm przetwarzających i dystrybuujących nasienie psów dla hodowców pracuje na czysto komercyjnych zasadach, i chociaż niektóre z nich wydają się prowadzić dokumentację swoich wyników ani te wyniki, ani skład przedłużaczy ani metody konserwacji nasienia nie są ujawniane. Tak zdobyta wiedza pozostanie więc w rękach różnych firm i nie będzie korzystna dla świata nauki, a tym samym dla hodowców psów w ogóle. Jedyne badania nad sztuczną inseminacją psów dotyczące wyników płodności z dużej liczby inseminacji to badania Seager et al., na 156 zamrożonych rozmrożonych Nasieniach AIs z wykorzystaniem osadzania pochwy, Linde-Forsberg & Forsberg na odpowiednio 470 i 527 AIs, stosując zarówno świeże, schłodzone rozszerzone i zamrożone rozmrożone nasienie i pochwy, jak i wewnątrzmaciczną sztuczną inteligencję, Linde-Forsberg et al., na 327 zamrożonych rozmrożonych Nasieniach AIs, porównując Sztuczną sztuczną inteligencję pochwy i wewnątrzmaciczną, Linde-Forsberg raportując o sztucznej inteligencji 2041 ze świeżym i schłodzonym rozszerzonym nasieniem i zamrożonym rozmrożonym nasieniem i używając sztucznej inteligencji pochwy i wewnątrzmacicznej, oraz Thomassen et al., na 312 zamrożonych-rozmrożonych głównie wewnątrzmacicznych AIs. Wiele czynników mają znaczenie w określaniu wskaźnika sukcesu sztucznej inseminacji u psów, takich jak kiedy i ile razy podczas cyklu Rui suki AI jest wykonywana, jakość nasienia i obsługi, i technika inseminacji. Więcej informacji o tych aspektach można znaleźć w cytowanych referencjach. Artykuł ten będzie dotyczył jedynie technik inseminacji i efektów miejsca osadzania nasienia. Ostatnie badania kliniczne podkreśliły znaczenie wewnątrzmacicznej w przeciwieństwie do dopochwowej sztucznej inseminacji u psa i są pierwszymi, które wykazują znacznie lepsze wyniki, gdy nasienie zostało zdeponowane w macicy, a nie w pochwie. W badaniu przeprowadzonym przez Linde-Forsberg et al., wskaźnik whelping przy użyciu wewnątrzmacicznego osadzania zamrożonego nasienia wynosił 84,4% w porównaniu do 58.Średnia wielkość miotu wynosiła 5,4 + 3,0 w porównaniu do 4,0

+2,7 szczeniąt/miotu (P< 0,001). Dane dotyczące płodności z 2041 sztucznych inseminacji to psy, wykonane u suk Szwedzkich w latach 1990-1998 i zgłoszone do Związku Kynologicznego w ciągu 2 tygodni (tj. przed wykonaniem testu ciążowego w celu uniknięcia wpływu na wyniki), wykazano, że znacznie wyższe wskaźniki whelping i rozmiary miotu uzyskano nie tylko w przypadku nasienia zamrożonego, rozmrożonego, ale także w przypadku nasienia świeżego, jak również schłodzonego, przedłużonego, gdy nasienie zostało zdeponowane w macicy, a nie w pochwie (Tabela 1).

wyniki z użyciem świeżego nasienia, przedstawione w tabeli 1, są nieco za wysokie, ponieważ 11% tych suk było z różnych powodów nie tylko sztucznie zapłodnionych, ale także splecionych. Najczęstszym powodem tego było to, że hodowcy starali się kojarzyć suki zbyt wcześnie podczas rui, a gdy psy nie chciały się kojarzyć, ich właściciele prosili o sztuczną inteligencję. Wskaźnik whelping w grupie również matowanej wynosił aż 84,5%, przy średniej wielkości miotu 6,0 + 2,8 szczeniąt, w porównaniu do wskaźnika whelping 48,9% i średniej wielkości miotu 5,8 + 2,8 szczeniąt dla tych suk, które były tylko sztucznie zapłodnione. Wydaje się, w związku z tym, że liczba AI, które są wykonywane ze świeżym nasieniem faktycznie są wykonywane w nieoptymalnym czasie podczas rui, zwykle z powodu braku doświadczenia hodowcy, ale stosunkowo słaby wynik jest prawdopodobnie również ze względu na to, że AI jest wymagane z powodu różnych problemów u psów. Szwedzkie dane jednak wyraźnie pokazują, że u psa wewnątrzmaciczna sztuczna inteligencja znacznie poprawia szybkość szczenięcia i wielkość miotu. Wskaźnik wychłodzenia przez wewnątrzmaciczną sztuczną inteligencję wzrósł z 36% W przypadku świeżego nasienia do 50% W przypadku zamrożonego rozmrożonego nasienia, w porównaniu z sztuczną inteligencją pochwy. W przypadku AI wewnątrzmacicznej średnia wielkość miotu wzrosła o 0,3 szczeniąt na miot w przypadku zamrożonego nasienia oraz o 0,6 i 0,7 na miot w przypadku świeżego i schłodzonego nasienia przedłużonego. Interesujące jest również w tym kontekście, aby zauważyć, że pies jest uważany za gatunek z wewnątrzmacicznym odkładaniem nasienia podczas naturalnego krycia, ponieważ do czasu zakończenia wiązania kopulacyjnego plemniki dotarły do jajowodów . Frakcja bogata w plemniki jest wytryskowana podczas intromisji i we wczesnym stadium wiązania kopulacyjnego, a następnie następuje duża objętość płynu sterczowego, który natychmiast wypłukuje plemniki z wąskiej pochwy czaszkowej przez szyjkę macicy do ciała macicy i rogów. Pochwa wydaje się oferować niekorzystne środowisko dla plemników psów, ponieważ duża część traci ogony w ciągu kilku minut po osadzeniu się w pochwie czaszkowej . Wykazano również, że około 10 razy więcej plemników jest potrzebnych do uzyskania podobnych wyników przez sztuczną inteligencję pochwy, jak przez sztuczną inteligencję wewnątrzmaciczną ze świeżym nasieniem, a także z zamrożonym rozmrożonym nasieniem . Istnieje zatem wiele czynników, które przyczyniają się do gorszych wyników uzyskiwanych przez odkładanie nasienia dopochwowego w porównaniu z odkładaniem wewnątrzmacicznym.

metody wykonywania wewnątrzmacicznej AI u psa.

wewnątrzmacicznej AI u psa można zrobić przeziernie albo za pomocą skandynawskiego (lub Norweski) cewnik, lub za pomocą sztywnego fiberoptic endoskopu pochwy do wizualizacji szyjki macicy i psa cewnik moczowy poprzecznie go. Wewnątrzmaciczna AI może być również realizowane za pomocą inwazyjnych metod, takich jak laparoskopia, lub pełnej chirurgii jamy brzusznej. W niektórych krajach te ostatnie metody mogą być nielegalne lub uznane za nieakceptowalne etycznie.

badanie palpacyjne szyjki macicy

jest to absolutnie niezbędne dla osoby, która chce wykonać psią sztuczną inteligencję, aby dowiedzieć się, jak zlokalizować szyjkę macicy poprzez badanie palpacyjne brzucha, aby móc zdeponować nasienie we właściwym miejscu i uniknąć zranienia suki. Suka powinna mieć pusty żołądek i pęcherz, aby ułatwić procedurę. Do celów szkoleniowych zaleca się stosowanie jednorazowych plastikowych cewników dopochwowych dla psów (Minitüb GmbH, Tiefenbach, Niemcy) (rys. 1).

Rysunek 1. Trzy rozmiary skandynawskiego cewnika do sztucznej inseminacji dla psów oraz plastikowego jednorazowego użytku dopochwowego cewnika do sztucznej inseminacji.

ponieważ otwór cewki moczowej znajduje się na brzegu miednicy, zaskakująco łatwo jest przypadkowo wprowadzić cewnik AI lub cienki sztywny endoskop do pęcherza moczowego. Oprócz ryzyka perforacji pęcherza moczowego cewnikiem, oczywiste jest, że żadna ciąża nie nastąpi po AI. Tak więc prawidłowe położenie cewnika powinno być zawsze sprawdzane przez badanie palpacyjne przed odłożeniem dawki nasienia. Jeśli cewnik znajduje się w pęcherzu moczowym, czaszkowa część pochwy i szyjka macicy mogą być palpowane powyżej cewnika. Ściany pęcherza moczowego są zwykle cieńsze niż ściany pochwy, a końcówka cewnika wyróżnia się wyraźniej niż gdyby znajdowała się w pochwie. Aby palpować szyjkę macicy, cewnik AI wprowadza się do pochwy suki. Wprowadzenie cewnika jest ułatwione, jeśli srom jest podwyższony, dopóki nie znajduje się tuż poniżej odbytu (tak jak w przypadku suki oznacza samca psa). Gdy końcówka cewnika jest wprowadzana aż do natychmiastowej czaszki do brzegu miednicy, należy ją palpować. Czaszkowo pochwa u większości Suk opada lekko ku dołowi. U niektórych ras, jednak, zwłaszcza psów wzroku z bardzo łukowatym lędźwiowym, pochwa ma bardziej grzbietowy kierunek. Czaszkowy koniec cewnika powinien być teraz obniżony bliżej ściany brzucha, aby stał się bardziej dostępny do badania palpacyjnego. Gdy końcówka cewnika może być palpowana i sprawdzana w ten sposób jego prawidłowa pozycja w pochwie, jest ona ostrożnie wprowadzana dalej, pod ciągłą kontrolą palpacyjną, aż dotrze do obszaru paracerwialnego. Jest to wąska, czaszkowa część pochwy tworzona przez grzbietowy, środkowy fałd po-szyjny i może być wyczuwalna jako jędrna struktura o długości od 1 do 2 cm. Kończy się na szyjce macicy, która u suki w rui mA 0,5-1,5 cm twardą, zaokrągloną do jajowatej, swobodnie ruchomą strukturę. Zazwyczaj nie jest możliwe przejście zewnętrznej osłony ochronnej cewnika skandynawskiego, która ma średnicę 10 mm, do obszaru paracerwialnego. Również cieńszy plastikowy cewnik AI, który ma średnicę 5 mm, może być zbyt szeroki, aby wprowadzić do obszaru paracervical w niektórych Suk, zwłaszcza tych mniejszych ras, lub tych, które nie urodziły miotu szczeniąt. Po zidentyfikowaniu szyjki macicy korpus macicy i rogi macicy mogą być palpowane przed tą strukturą. Opuść końcówkę cewnika, a następnie zamknij końcówkę kciuka względem końcówki palca wskazującego nad cewnikiem, a następnie podnieś czaszkowy koniec cewnika w taki sposób, aby szyjka macicy i rogi macicy były wciągane do góry między palcami. Ich wielkość i konsystencja stają się wtedy widoczne. (Ta metoda palpacji macicy jest również bardzo przydatna do wczesnego wykrywania ciąży i badania Suk z podejrzeniem pyometry).

inseminacja wewnątrzmaciczna przy użyciu cewnika skandynawskiego

cewnik skandynawski składa się z cewnika stalowego o szerokości 1-2 mm z 0.Końcówka o średnicy od 75 mm do 1 mm, dostępna w trzech różnych długościach: 20, 30 lub 40 cm. Jest on stosowany razem z zewnętrzną osłoną nylonową o średnicy 10 mm (rys. 1 i Rys. 2). Średniej wielkości cewnik pasuje do większości małych i średnich Suk. Sprzęt można uzyskać w norweskim Związku Hodowców futer, P. O. Box 136, Økern, N-0509 Oslo 5, Norwegia.

Rysunek 2. Zbliżenie dwóch rozmiarów końcówek skandynawskiego cewnika AI dla psów.

wewnątrzmaciczna AI z cewnikiem skandynawskim wykonywana jest z suką stojącą na podłodze lub na stole. Sedacja jest bardzo rzadko potrzebna; wręcz przeciwnie, większość suk w rui swobodnie akceptuje ten rodzaj obsługi. W przypadku, gdy konieczne jest lekkie uspokojenie, na przykład u bardzo dużej, otyłej lub nerwowej suki, można zastosować 1 – 3 mg/kg ksylazyny IM lub IV. Wewnętrzny stalowy cewnik, z końcówką wewnątrz i zabezpieczony nylonową osłoną, jest wprowadzany do pochwy. Czaszkowy koniec osłony nylonowej jest palpowany przed brzegiem miednicy, jak opisano wcześniej. Jeśli czubek osłony cewnika został obniżony bliżej ściany brzucha, szyjka macicy zwykle znajduje się kilka cm przed nią i nad nią. Cewnik stalowy jest następnie wprowadzany przez osłonkę, aż jej końcówka osiągnie otwór brzuszny. Szyjka macicy jest zamocowana między kciukiem a palcem wskazującym, a poprzez zastosowanie lekko trakcji w dół w ciałach macicy, jest przechylana tak, aby kąt kanału szyjki macicy stał się bardziej poziomy (rys. 3).

Rysunek 3. Schematyczny rysunek obszaru paracerwicznego psa i kanału szyjki macicy, z cewnikiem skandynawskim w pozycji w pochwie czaszkowej. Manipulując szyjką macicy i korpusem macicy kąt szyjki macicy zmienia się, aby uzyskać kanał szyjki macicy w lepszym wyrównaniu z końcówką cewnika, aby ułatwić cewnikowanie.

końcówka cewnika jest następnie ostrożnie wycofywana, naciskając go wielokrotnie na powierzchnię szyjki macicy w poszukiwaniu otwarcia kanału szyjki macicy. Uczucie po znalezieniu tego otworu można w większości przypadków opisać jako uczucie dotykania chrząstki, tj. „chrupiące”. Po znalezieniu otworu przymocuj cewnik i rozpocznij pracę szyjki macicy z cewnikiem. Kanał szyjny ma długość od 5 do 10 mm i nie zawsze jest całkowicie prosty. W związku z tym może być konieczne przyłożenie lekkiego nacisku, obracając cewnik, aby go ułatwić. U większości Suk, końcówka cewnika łatwo można wyczuć przed szyjką macicy w ciałach macicy. U niektórych Suk jednak uczucie nie jest tak wyraźne. Strzykawka zawierająca nasienie jest podłączona do cewnika, a nasienie powoli wlewa się do macicy. Czasami występuje oporność na infuzję w zależności od tego, czy otwarcie cewnika naciska na błonę śluzową endometrium. Lekka trakcja w dół korpusu macicy lub szyjki macicy zwykle łagodzi sytuację i umożliwia napar nasienia. Aby sprawdzić, czy cewnik naprawdę znajduje się w macicy suki, można podać 1-2 ml soli fizjologicznej. Jeśli cewnik znajduje się we właściwej pozycji w ciele macicy płyn można łatwo podać. Z drugiej strony, jeśli cewnik znajduje się w obszarze paracerwicznym, nastąpi niemal natychmiastowy przepływ soli fizjologicznej między cewnikiem a osłoną nylonową. Cewnik jest usuwany, a tylne ćwierci suki są uniesione i suka utrzymywana w tej pozycji przez 5-10 minut po AI, aby zminimalizować przepływ wsteczny nasienia i ułatwić macicy transport plemników w kierunku jajowodów . Suka powinna być również pierzaste wokół okolicy krocza, ponieważ uważa się, że stymuluje skurcze macicy. Nauczenie się tej techniki wymaga pewnej praktyki, ale raz się jej nauczyliśmy, jest to szybka metoda, Zwykle realizowana w ciągu kilku minut. Zaleca się, aby początkowo próbki narządów były pozyskiwane w celach treningowych i anatomicznych. Zaletą jest również to, że szczególnie pierwsze próby są podejmowane u suk, które urodziły jeden lub więcej miotów, ponieważ zwykle są one znacznie łatwiejsze do cewnikowania. Perforacje mogą wystąpić, jeśli cewnik zostanie wprowadzony na ślepo lub z siłą. Pod warunkiem, że cewnikowanie odbywa się pod staranną kontrolą palpacyjną, jednak technika jest całkowicie bezpieczna dla suki. Niektóre suki są trudniejsze do cewnikowania, szczególnie te należące do niektórych ras olbrzymich, a także otyłych lub nerwowych zwierząt. Stosowanie skandynawskiego cewnika tylko od 2 do 3,5% prób cewnikowania wewnątrzmacicznego zakończyło się niepowodzeniem . Wyniki whelping stopy przy użyciu zamrożone rozmrożone nasienia odnotowano 84.5% i 71% W przypadku wykonywania przez wykwalifikowanych inseminatorów, średnio 65% W przypadku nasienia świeżego i schłodzonego oraz 52% W przypadku nasienia mrożonego rozmrożonego, w większym badaniu terenowym z udziałem również mniej doświadczonych inseminatorów (rys. 1). Technika ta może być również stosowana do wewnątrzmacicznego wlewu środka kontrastowego do badania histerograficznego suki .

inseminacja wewnątrzmaciczna z wykorzystaniem endoskopowej wizualizacji szyjki macicy

przezcewkowe inseminacje wewnątrzmaciczne można również wykonać za pomocą sztywnego endoskopu światłowodowego i cewnika moczowego lub angiograficznego, na stojącej suce i bez sedacji (rys. 4 i Rys. 5).

inseminacja wewnątrzmaciczna przy użyciu laparoskopii

laparoskopia brzuszna powinna oferować nieco bardziej akceptowalną alternatywę dla pełnej operacji dla AI u psa. Technika została opisana przez Wildta i Silvę et al. . 60 do 73% przypadków ciąży zgłaszano przez AI przy użyciu laparoskopii, ale liczba suk w tych badaniach była niewielka.

donoszono o inseminacji wewnątrzmacicznej przy użyciu operacji

w celu wykonania inseminacji wewnątrzmacicznej . Stosowano różne zabiegi chirurgiczne, z suką w znieczuleniu ogólnym i w leżeniu grzbietowym. Brzuch brzuszny jest obcięty, a po rutynowym przygotowaniu chirurgicznym wykonuje się nacięcie 4-6 cm w połowie drogi między łonem a pępkiem, przez linea alba. Macica jest podwyższona przez nacięcie, a igła strzykawki zawierającej nasienie jest wprowadzana do światła ciała macicy pod kątem 45o ze skosem igły w górę. Nasienie powoli wstrzykuje się do macicy. Powinien płynąć łatwo z oczywistym rozdęciem rogów macicy, w przeciwnym razie igła powinna być przestawiona. Po wyjęciu igły nad miejscem wstrzyknięcia trzyma się gazę zwilżoną roztworem soli fizjologicznej. Po 1 min. usuwa się gazę, macicę zastępuje się brzuchem, a ranę zamyka się przy użyciu rutynowej metodologii. Aby uniknąć przepływu wstecznego nasienia suka powinna być umieszczona z tyłu podniesiony, jak ona odzyskuje od znieczulenia . Około 60% wskaźnik ciąży odnotowano po chirurgicznej sztucznej inteligencji u psa, ale podobnie jak w przypadku laparoskopowej sztucznej inteligencji wyniki są oparte na ograniczonych badaniach eksperymentalnych i brak danych terenowych są dostępne do oceny przy użyciu obu metod. Czy etycznie dopuszczalne jest uciekanie się do operacji w celu osiągnięcia ciąży jest dyskusyjne. Metoda, chociaż zalecana przez niektórych, jest uważana przez wielu za nieetyczną i niedopuszczalnie stresującą dla suki. Ryzyko infekcji itp. związane z operacją w ogóle i ograniczona liczba chirurgiczne AI, które mogą być wykonywane w danej suki są dwie oczywiste wady. Metoda ta jest również kosztowna i czasochłonna.

1. Seager SWJ, Platz CC, Fletcher WS. Wskaźniki poczęcia i powiązane dane z wykorzystaniem zamrożonego nasienia psa. J Reprod Fertil 1975; 45: 189-192.

2. Linde-Forsberg C, Forsberg M. płodność u psów w zależności od jakości nasienia oraz czasu i miejsca inseminacji. J Reprod Fertil 1989;39 (Suppl): 299-310. – PubMed –

3. Linde-Forsberg C, Forsberg M. Wyniki 527 kontrolowanych sztucznych inseminacji u psów. J Reprod Fertil 1993;47( Suppl): 313-323. – PubMed-

4. Linde-Forsberg C, Ström Holst B, Govette G. Comparison of fertility data from vaginal vs intrauterine insemination of frozen-thawed dog semen: a retrospektywne study. Theriogenology 1999; 52: 11-23. – PubMed –

5. Linde-Forsberg C. dane dotyczące płodności z 2041 r. kontrolowane sztuczne zapłodnienia u psów. In: Proceedings of the 4th Int Symp Canine Feline Reprod, Oslo, 2000, 120 s.(abstr.)

6. Thomassen R, Farstad W, Krogenaes, a, Fougner, J. A. and Andersen Berg K. Sztuczne zapłodnienie zamrożonym nasieniem u psa. Badanie retrospektywne. J Reprod Fertil 2001, in press.

7. Tsutsui T, Kawakami E, Murao I, et al. Transport plemników w drogach rodnych suki: obserwacje przez przetoki maciczne. Jpn J Vet Sci 1989;51: 560-565. – PubMed –

8. Linde-Forsberg C. sztuczne zapłodnienie świeżym, schłodzonym rozszerzonym i zamrożonym rozmrożonym nasieniem u psa. Seminaria w Vet Med Surg (Małe Zwierzę) 1995;10: 48-58.

9. Tsutsui T, Tezuka T, Shimizu T, Murao I, Kawakami E, Ogasa A. Sztuczne zapłodnienie świeżym nasieniem u suk Beagle. Jpn J Vet Sci 1988; 50: 193-198.

10. Andersen K. inseminacja mrożonym nasieniem psa w oparciu o nową technikę inseminacji. Zuchthyg 1975;10: 1-4.

11. Linde C. Transport płynu radiopauzalnego do macicy po odkładaniu się pochwy u suki Rui. Acta vet scand 1978;19:463-465.

12. Funkquist B, Lagerstedt A-S, Linde C, Obel N. Vet Radiol 1985;26:12-18.

13. Wilson M. niechirurgiczna sztuczna inseminacja wewnątrzmaciczna u suk z użyciem zamrożonego nasienia. J Reprod Fertil 1993; 47 (Suppl): 307-311. – PubMed –

14. Battista M, Parks J, Concannon PW. Psie plemniki przetrwają po rozmrożeniu po zamrożeniu w słomkach lub granulkach przy użyciu rur, laktozy, trisu lub przedłużaczy testowych. In: Proceedings of the 11th Int Congr Anim Reprod and AI, Dublin 1988;3: 229-231.

15. Wildt DE. Laparoskopia. In: Burke TJ, ed. Rozmnażanie małych zwierząt i bezpłodność. Lea & Febiger, 1986;121-140.

16. Silva LDM, Onclin K, Snaps F, Verstegen JP. Laparoskopowe zapłodnienie wewnątrzmaciczne u suki. Theriogenology 1995; 43: 615-623.

17. Silva LDM, Verstegen JP. Porównanie trzech różnych przedłużaczy do inseminacji wewnątrzmacicznej psów z zamrożonymi rozmrożonymi plemnikami. Theriogenology 1995; 44: 571-579.

18. Silva LDM, Onclin K, Lejeune B, Verstegen JP. Porównanie zapłodnienia dopochwowego i wewnątrzmacicznego Suk nasieniem świeżym lub mrożonym. Vet Rec 1996;138: 154-157. – PubMed –

19. Smith FO, Graham EF: Cryopreservation of canine semen: Technique and performance. In: Proceedings of the Xth Int Congr Anim Reprod and AI, Champaign-Urbana 1984;2: 216.

20. Hutchison RV. Pochwy & chirurgiczne osadzanie wewnątrzmaciczne nasienia. In: Proceedings of the Canine Theriogenology Short Course 1993; 33-37.

21. Hutchison RV. Maksymalizacja szybkości poczęcia przy użyciu świeżego chłodzonego lub mrożonego nasienia psa. In: Proceedings of the Canine Male Reprod Symp 1997; 61-70.