co to jest przeciwciało poliklonalne?
jak zrobić przeciwciała poliklonalne
przeciwciało poliklonalne jest zbiorem wielu immunoglobulin, każda wygenerowana z innego klonu komórki B. Przeciwciała te celują w różne epitopy lub miejsca wiązania na pojedynczym antygenie. Wyprowadzenie z wielu klonów limfocytów B i późniejsze ukierunkowanie na wiele epitopów jest tym, co odróżnia przeciwciała poliklonalne od przeciwciał monoklonalnych.
jak wytwarzać przeciwciała poliklonalne
wszystkie generacje przeciwciał, poliklonalne lub monoklonalne, zaczynają się od wywołania odpowiedzi immunologicznej, zwanej immunizacją. Zamierzone cele są wstrzykiwane do gospodarza, rozpoznawane przez układ odpornościowy jako obce, i kierowane przez przeciwciała do blokowania odporności lub klirensu. Brak odpowiedzi immunologicznej wymagałby zastosowania adiuwantów, substancji immunogennych, takich jak adiuwant Freunda lub hemocyjanina limpet keyhole (KLH), w celu dalszego napędzania rekrutacji immunologicznej. Immunizacja obejmuje większość tego, co jest wymagane do wytworzenia przeciwciał poliklonalnych. Typowa odpowiedź immunologiczna jest przedstawiona poniżej.
wytwarzanie przeciwciał zaczyna się od immunizacji
początkowa ekspozycja na pierwszorzędową odpowiedź immunologiczną
początkowa ekspozycja gospodarza na antygen z odpowiednimi adiuwantami, ekspozycja jest określana jako „pierwsza” immunizacja. Typowe metody ekspozycji obejmują wstrzyknięcie do skóry, otrzewnej, warstwy podskórnej lub mięśni. Mniej powszechnymi alternatywami są podawanie doustne i donosowe.Immunizacja DNA jest również rozwijającą się technologią toksycznych lub w inny sposób trudnych do wytworzenia antygenów. Każda kolejna ekspozycja na antygen jest określana jako immunizacja „boost”.
przetwarzanie antygenu przez komórki prezentujące antygen
makrofagi, komórki dendrytyczne (DC) i w mniejszym stopniu komórki B, wszystkie komórki prezentujące antygen (APC), internalizują antygen przez endocytozę lub fagocytozę. Przetwarzanie antygenu rozbija antygen na mniejsze kawałki, które są następnie przenoszone na powierzchnię APC.
Stymulacja limfocytów B
rozpoznanie antygenu prezentowanego na powierzchni APCs indukuje uwalnianie stymulujących cząsteczek sygnałowych, cytokin, z pomocniczych limfocytów T. Cytokiny te aktywują komórki B, które również rozpoznały antygen poprzez swój receptor komórek B (BCR). Niektóre limfocyty B nie wymagają aktywacji pomocniczych limfocytów T po interakcji z antygenem BCR, Zwykle wytwarzając szybszą odpowiedź immunologiczną z przeciwciałami o niższym powinowactwie. Udział pomocniczych limfocytów T ma kluczowe znaczenie dla pełnej odpowiedzi immunologicznej, jak również dla regulacji tolerancji.
proliferacja komórek B i wydzielanie przeciwciał
aktywowane komórki B dzielą się, tworząc zarówno populacje komórek B pamięci, jak i komórek plazmatycznych. Oba typy komórek rozpoznają ten sam epitop. Komórki plazmatyczne wydzielają przeciwciała do surowicy w celu rozpoznania odporności, podczas gdy komórki pamięci B utrzymują się przez dłuższy czas, zapewniając szybką odpowiedź na wtórną ekspozycję tego samego antygenu.
pomiar odpowiedzi immunologicznej
pomiar poziomu przeciwciał podczas procesu immunizacji jest wymagany do oceny postępu. AnELISA przeciwko docelowemu antygenowi porównuje immunizowane próbki surowicy do wstępnie immunizowanych próbek surowicy, ujawniając stopień odpowiedzi immunologicznej spowodowanej immunizacją. Seryjne rozcieńczenia próbek określają miano przeciwciał. Typowo a 1:64 000 mian uważa się za silną odpowiedź immunologiczną i wystarczającą do rozpoczęcia pobierania surowicy lub fuzji limfocytów. Niższe miana mogą wymagać kolejnych szczepień wzmacniających, alternatywnych dróg podawania lub dodatkowych adiuwantów.
pozyskanie przeciwciał poliklonalnych w surowicy
produkcja przeciwciał poliklonalnych wymaga jedynie odzyskania krwi od zwierzęcia gospodarza i oddzielenia frakcji komórkowej od frakcji surowicy zawierającej wydzielone przeciwciała. Ponieważ wiele przeciwciał specyficznych dla antygenu jest wydzielanych przez wiele aktywowanych komórek B, surowica krwi zawiera wiele produktów różnych klonów przeciwciał, stąd termin przeciwciało poliklonalne. W szczególności, tworzenie wielu klonalnych przeciwciał przeciwko jednemu antygenowi uzyskuje się zarówno przez przetwarzanie antygenu na fragmenty, jak i każdy fragment mający mniejsze regiony, zwane epitopami. Każdy może być rozpoznany przez określone BCR. Różne populacje komórek B wydzielają specyficzne, ale różne przeciwciała przeciwko temu samemu antygenowi. Ponadto surowica zawiera nie tylko przeciwciała skierowane przeciwko zamierzonemu antygenowi docelowemu, ale wszystkie inne immunoglobuliny przeciwko innym celom, lekom, hormonom itp. które są w surowicy. Surowica może być stosowana bezpośrednio jako sonda biologii molekularnej, ale często wymaga dalszego oczyszczania w celu zwiększenia czułości i swoistości konkretnego testu. Oczyszczanie z powinowactwem osiąga odzysk przeciwciał w różnym stopniu, w zależności od techniki, jak pokazano poniżej, jednak żadna z nich nie osiąga swoistości poziomu epitopu przeciwciała monoklonalnego.
| Affinity Purification Technique | Pro | Con |
|---|---|---|
| Protein A/G | Simple, Cost effective | Recovers all immunoglobulin. |
| Antigen Specific | Recovers only antigen specific antibody. | wymaga nietrywialnej ilości antygenu. |
Polyclonal Antibody Applications
| Application | Polyclonal AntibodyUse Rationale |
|---|---|
|
ELISA Detection Antibody
(direct, indirect, sandwich, and capture ELISA formats) |
Binds multiple epitopes to deliver many detection molecules.
|
|
ELISA Capture Antibody
|
Polyreactivity can maximally recover antigen from samples.
|
|
Western Blot
Detection Antibody |
Multiple epitope recognition can allow for antigen changes (denaturing/linearizing).
|
|
Target recognized by many Ab for maximal drug delivery, immune recruitment, blocking, or activation.
|
|
|
testy kliniczne
|
potencjalnie zwiększona zdolność wykrywania.
|
usługi związane z przeciwciałami Poliklonalnymi
nasza Usługapolyexpress™ jest opłacalnym i szybkim sposobem tworzenia niestandardowych sond molekularnych. Od sekwencji antygenu do dostarczonych przeciwciał w 45 dni gwarantowane. Szukasz jeszcze większej kontroli nad rozwojem przeciwciał? Spójrz na niektóre z naszych innych usług przeciwciała:
- szczepienia DNA, nasza specjalność. Na początek dowolnego projektu rozwoju przeciwciał. Omija produkcję antygenu białkowego in vitro i zajmuje się trudnymi celami.
- serwis przeciwciał MonoExpress™ zapewnia wiodące w branży Gwarancje aplikacji, zapewniając sukces w testach.
- Przeciwciała anty-idiotypowe ułatwiają testowanie PK lub PD leków na przeciwciała terapeutyczne. Wykrywają tylko CDR docelowego przeciwciała.
dzięki 12-letniemu doświadczeniu w opracowywaniu niestandardowych przeciwciał Twój projekt jest w rękach ekspertów. Uzyskaj wycenę już dziś!
oferty i zamówienia
nasi przedstawiciele działu obsługi klienta są dostępni 24 godziny na dobę, Od Poniedziałku do piątku, aby ci pomóc.