Wat is een polyclonal antilichaam?
Hoe te maken van polyklonale antilichamen
Een polyklonaal antilichaam is een verzameling van manyimmunoglobulins, elke gegenereerd uit een andere B-cel kloon. Deze antilichamen richten zich op verschillende epitopes, of bindingsplaatsen, op één enkel antigeen. De afleiding van veelvoudige B-cel klonen en het daaropvolgende richten van veelvoudige epitopes is wat polyclonal antilichamen van monoclonal antilichamen onderscheidt.
hoe polyklonale antilichamen te maken
alle polyklonale of monoklonale antilichaamgeneratie begint met het opwekken van een immuunrespons, immunisatie genoemd. De beoogde doelen worden geïnjecteerd in de gastheer, erkend door het immuunsysteem als vreemd, en gericht door antilichamen voor immuunblokkering of klaring. Het niet monteren van een immuunrespons zou het gebruik van adjuvantia, immunogene substanties zoals Freund ‘ s adjuvans of keyhole limpet hemocyanin (KLH) vereisen, om immune rekrutering verder te drijven. De immunisatie omvat de meerderheid van wat wordt vereist om polyclonal antilichamen te maken. Een typische immuunrespons wordt hieronder beschreven.
het maken van antilichamen begint met immunisatie
initiële blootstelling voor primaire immuunrespons
initiële blootstelling aan antigeen met geschikte adjuvantia wordt blootstelling “Prime” immunisatie genoemd. De typische methodes van blootstelling omvatten injectie in de huid, buikvlies, onderhuidse laag, of spier. Minder gebruikelijke alternatieven zijn orale en intranasale toediening.De immunisatie van DNA is ook een opkomende technologie voor giftig of anders moeilijk om antigenen te produceren. Om het even welke latere blootstelling aan antigeen wordt genoemd een “boost” immunisatie.
antigeen verwerking door antigeen presenterende cellen
macrofagen, dendritische cellen (DC), en in mindere mate B-cellen, Alle antigeen presenterende cellen (Apc ‘ s), internaliseren antigeen door endocytose of fagocytose. De antigeenverwerking breekt het antigeen in kleinere stukken die dan aan de oppervlakte van APC worden bewogen.
stimulatie van B-cellen
herkenning van antigeen gepresenteerd op het oppervlak van Apc ‘ s induceert de afgifte van stimulerende signaalmoleculen, cytokines, uit Helper T-cellen. Deze cytokines activeren B-cellen die ook antigeen door hun B-celreceptor (BCR) erkennen. Sommige B-cellen vereisen geen Helpert-celactivering na BCR-antigeeninteractie, gewoonlijk veroorzakend een snellere immune reactie met lagere affiniteitantilichamen. De betrokkenheid van Helpert-cellen is cruciaal in een volle immuunrespons evenals het regelen van zelftolerantie.
proliferatie van B-cellen en Antilichaamsecretie
geactiveerde B-cellen delen om zowel geheugen-B-cel-als plasmacelpopulaties te creëren. Beide typen cellen herkennen dezelfde epitoop. Plasmacellen scheiden antilichamen af in het serum voor immune herkenning terwijl geheugen-B-cellen langer aanhouden, waardoor een snelle reactie op secundaire blootstelling van hetzelfde antigeen wordt gegeven.
het meten van de immuunrespons
Het meten van de antilichaamspiegels tijdens het immunisatieproces is nodig om de voortgang te evalueren. AnELISA tegen target-antigeen vergelijkt geïmmuniseerde serummonsters met vooraf geïmmuniseerde serummonsters, waaruit de mate van immuunrespons door immunisatie blijkt. De periodieke verdunningen van steekproeven bepalen de titer van het antilichaam. Typisch een 1:64.000 titer wordt beschouwd als een robuuste immuunrespons en voldoende om over te gaan tot serumoogst of lymfocytenfusie. Lagere titers kunnen daaropvolgende boost immunisaties, alternatieve toedieningswegen, of extra adjuvantia vereisen.
Polyclonal Antilichaamserum Harvest
Polyclonal antilichaamproductie vereist alleen het herstel van bloed van het gastdier en scheiding van de cellulaire fractie van de serumfractie die uitgescheiden antilichamen bevat. Aangezien vele antigeenspecifieke antilichamen door veelvoudige geactiveerde B-cellen worden afgescheiden, bevat het bloedserum de vele producten van verschillende antilichaamklonen, vandaar de term polyclonal antilichaampje. Specifiek, wordt de verwezenlijking van veelvoudige klonale antilichamen tegen één antigeen bereikt door zowel de verwerking van antigeen in fragmenten als elk fragment die kleinere gebieden hebben, genoemd epitopes. Elk kan worden herkend door specifieke BCR ‘ s. De verschillende B-celpopulaties scheiden specifieke, maar verschillende antilichamen tegen hetzelfde antigeen af. Voorts bevat het serum niet alleen antilichamen tegen het beoogde doelantigeen, maar alle andere immunoglobulins tegen andere doelstellingen, drugs, hormonen, enz. die in het serum zitten. Het Serum kan direct als moleculaire biologiesonde worden gebruikt, maar vereist vaak verdere reiniging om gevoeligheid en specificiteit van een bepaalde analyse te verhogen. De affiniteitsreiniging bereikt antilichaamterugwinning in verschillende graden afhankelijk van de techniek zoals hieronder getoond, nochtans bereikt geen de epitope niveauspecificiteit van een monoclonal antilichaam.
| Affinity Purification Technique | Pro | Con |
|---|---|---|
| Protein A/G | Simple, Cost effective | Recovers all immunoglobulin. |
| Antigen Specific | Recovers only antigen specific antibody. | vereist een niet-triviale hoeveelheid antigeen. |
Polyclonal Antibody Applications
| Application | Polyclonal AntibodyUse Rationale |
|---|---|
|
ELISA Detection Antibody
(direct, indirect, sandwich, and capture ELISA formats) |
Binds multiple epitopes to deliver many detection molecules.
|
|
ELISA Capture Antibody
|
Polyreactivity can maximally recover antigen from samples.
|
|
Western Blot
Detection Antibody |
Multiple epitope recognition can allow for antigen changes (denaturing/linearizing).
|
|
Target recognized by many Ab for maximal drug delivery, immune recruitment, blocking, or activation.
|
|
|
klinische Tests
|
potentieel verhoogde detectiecapaciteit.
|
Polyclonal Antibody Related Services
onze Polyexpress™ service is een kostenefficiënte en snelle manier om aangepaste moleculaire probes te maken. Van antigeensequentie tot aangeleverde antilichamen in 45 dagen gegarandeerd. Op zoek naar nog meer controle van antilichaamontwikkeling? Bekijk enkele van onze andere antilichaamdiensten:
- DNA-immunisaties, onze specialiteit. Voor het begin van om het even welk antilichaamontwikkelingsproject. Omzeilt de productie van eiwitantigeen in vitro en behandelt moeilijke doelen.
- Mono-Express™ Antibody Service service biedt toonaangevende toepassingsgaranties, waardoor succes in uw assays wordt gegarandeerd.
- Anti-idiotype antilichamen maken PK-of PD-testen van therapeutische antilichaamgeneesmiddelen gemakkelijk. Ze ontdekken alleen de CDR van het doelantilichaam.
Met 12 jaar ervaring in het ontwikkelen van aangepaste antilichamen, is uw project in deskundige handen. Ontvang vandaag nog een offerte!
offertes en bestelling
onze vertegenwoordigers van de klantenservice staan 24 uur per dag, van maandag tot en met vrijdag, voor u klaar.