retentietijd en dode tijd
De meeste scheidingstechnieken bestaan uit een chromatografische kolom, stationaire fase en mobiele fase, en gebruiken gemeenschappelijke terminologie. Daarom is het beter leren sommige beschreven in het tekstboek voor HPLC (Ref.1) Als overzicht:
de retentietijd $t_\mathrm{R}$ opgeloste stof A kan worden gedefinieerd als de tijd vanaf de injectie van het monster tot de tijd van de elutie van de verbinding, genomen op het maximum (apex) van de piek die behoort tot de specifieke moleculaire species A (bekend of onbekend). De retentietijd geeft aan hoe lang het duurt voor een verbinding A uit de kolom (van de injector naar de detector) elueren. De retentietijd van de laatste piek (als de steekproef meerdere samenstellingen bevat) in een chromatogram wordt gebruikt om de noodzakelijke lengte van de chromatografische looppas te schatten. In het algemeen kan voor een moleculaire soort A de retentietijd worden aangegeven als $t_\mathrm{R}$(A) en wordt de tijd meestal gemeten in $\pu{min}$. Echter, het deel “(A)” in de notatie wordt soms weggelaten, toch is $t_\mathrm{R}$ altijd gerelateerd aan een specifieke moleculaire soort.
retentietijd hangt niet alleen af van de structuur van het specifieke molecuul, maar ook van factoren zoals de aard van de mobiele en stationaire fasen, het debiet van de mobiele fase en de afmetingen van de chromatografische kolom. De retentietijd is meestal kenmerkend voor een specifieke verbinding in een bepaalde scheiding. Om deze reden, is de bewaartijd kritiek in het identificeren van analytes zodra hun bewaartijd bekend is (b.v., door normen te gebruiken).
van bijzonder belang bij een scheiding is de dode tijd $t_\mathrm{M}$, De tijd die een niet-behouden moleculaire soort uit de chromatografische kolom moet elueren. De dode tijd is ook bekend als void time of holdup time. De dode tijd $t_ \ mathrm{M}$ kan ook geïnterpreteerd worden als een deel van de retentietijd $t_\mathrm{R}$(A) voor de analyte A, die de analyte doorbrengt in de mobiele fase die door de kolom beweegt (dat is de reden voor de subcrpt “M” die mobiel betekent). Deze parameter houdt geen verband met het retentieproces en hangt af van het debiet en de fysische kenmerken van de kolom (d.w.z. lengte, diameter, poreusheid van de stationaire fase). Het verschil tussen de retentietijd ($t_\mathrm{R}$) en de dode tijd ($t_\mathrm{M}$) vertegenwoordigt de tijd dat de analyte A wordt behouden op de stationaire fase ($t_\mathrm{s}$). Dit verschil wordt aangegeven als gereduceerde retentietijd $t_\mathrm{s}$ (of $t ‘ _\mathrm{R}$) en wordt uitgedrukt door de formule:$$T_ \ mathrm{s}=t_\mathrm{R} – t_\mathrm{M}$$
de waarde voor $t_\mathrm{M}$ wordt meestal verkregen als een benadering door gebruik te maken van verbindingen die zeer licht behouden blijven, omdat het moeilijk kan zijn om een verbinding te vinden die helemaal niet behouden is op een chromatografische kolom. Bijvoorbeeld, tijdens HPLC looppas, kan het oplosmiddel voor het inspuiten van de steekproef (wanneer verschillend van de mobiele fase) worden gebruikt dergelijke samenstelling zijn, en de behoudtijd van deze oplosmiddelpiek kan als dode tijd worden genomen.