morfologie en ontwikkelingssnelheid van de Blaasvlieg, Hemipyrellia ligurriens (Diptera: Calliphoridae): Forensische Entomologie toepassingen
Abstract
Hemipyrellia ligurriens (Diptera: Calliphoridae) is een forensisch belangrijke blaasvliegsoort die in veel landen voorkomt. In deze studie bepaalden we de morfologie van alle stadia en de ontwikkelingsgraad van H. ligurriën gekweekt onder natuurlijke omgevingsomstandigheden in de Phitsanulok provincie, Noord Thailand. Morfologische kenmerken van alle stadia gebaseerd op het observeren onder een lichtmicroscoop werden beschreven en aangetoond om te gebruiken voor identificatiedoeleinden. Bovendien werd ontwikkelingstijd in elke fase gegeven. De ontwikkelingstijd van H. ligurriens tot volledige metamorfose; van ei, larve, pop tot volwassene, duurde 270,71 uur gedurende 1 ontwikkelingscyclus. De resultaten van deze studie kunnen niet alleen nuttig zijn voor toepassing in forensisch onderzoek, maar ook voor studie in zijn biologie in de toekomst.
1. Inleiding
Specimens van blaasvliegen (Diptera): Calliphoridae), met name vliegenlarven gevonden in lijken en/of op de doodscènes, kunnen worden gebruikt als entomologisch bewijs in forensisch onderzoek, dat wil zeggen, het schatten van het postmortem interval (PMI) en het bepalen van toxische stoffen, antemortem trauma , en of verplaatsing van stoffelijke resten had plaatsgevonden, zoals reeds gedocumenteerd . Nauwkeurige morfologische identificatie van insectenspecimens is een van de zeer belangrijke factoren vanuit een toegepast oogpunt, omdat zij relevante bewijzen voor forensisch onderzoek leveren . Hemipyrellia ligurriens (Wiedemann) is een forensisch belangrijke blaasvliegsoort, zoals eerder gemeld in Thailand en Maleisië . Deze vliegensoort is wijd verspreid en omvat Korea, Taiwan, Laos, Singapore, Papoea-Nieuw-Guinea, Australië, India, China, de Filippijnen, Sri Lanka, Maleisië, Indonesië en Thailand . Naast zijn forensische belang, kan H. ligurriens een overlast zijn in markten en tuinen, en volwassenen zijn ook mechanische vectoren van ziekteverwekkers, vanwege hun aantrekkingskracht op menselijke uitwerpselen in de buurt van door mensen bezette omgevingen . Voorheen werd de morfologie van sommige onvolgroeide stadia (ei, 3e Stadium larven, en puparium) van H. ligurriens alleen bestudeerd door te observeren onder een scanning elektronenmicroscoop en een lichtmicroscoop . Om die reden is de beschikbare informatie van H. ligurriens onvolledig voor het identificeren van alle onvolwassen bewijzen die kunnen worden gevonden in de doodscènes. Bovendien is de ontwikkelingssnelheid van deze soort, die belangrijke gegevens is voor het schatten van PMI, niet gevonden in de geciteerde literatuur. Bovendien zijn lokale populatiespecifieke ontwikkelingsgegevens zeer belangrijk voor het schatten van de leeftijd van de larve om PMI te bepalen . Om de nauwkeurigheid en precisie bij het toepassen van deze informatie in forensische onderzoeken te verhogen, is de studie van al zijn onrijpe stadia en ontwikkelingstarief van groot belang omdat de morfologie van elk specifieke eigenschappen zou kunnen verstrekken die voor een juiste identificatie belangrijk zullen worden, en de groeigegevens in bijzondere voorwaarde essentiële gegevens voor PMI-schatting zouden kunnen verstrekken. Daarom was deze studie bedoeld om de onderscheidende kenmerken van al zijn onvolgroeide stadia te onderzoeken door onder de lichtmicroscoop te observeren, om enkele belangrijke details voor identificatie te geven en om zijn ontwikkelingstarief te bepalen, in het bijzonder in conditie in Phitsanulok provincie, Noord-Thailand.
2. Materialen en methoden
2.1. Onderhoud van H. ligurriën in het laboratorium
De Kolonie van H. ligurriens gebruikt in deze studie werd oorspronkelijk verkregen door het verzamelen van volwassen vliegen met een veegnet in gebieden van Sao Hin dorp, Muang Phitsanulok district, Phitsanulok provincie, Thailand (16°44 ’18N; 100°13′ 44e). Alle volwassenen van H. ligurriens werden verzameld in het veld en geïdentificeerd op basis van hun morfologie, met behulp van de taxonomische sleutel van Tumrasvin et al. , alvorens verder in het laboratorium te worden gekweekt. Vliegen werden gekweekt onder natuurlijke omgevingsconditie in de open opfokruimte, volgens de methode van Sukontason et al. . In het kort werden de volwassen dieren in een opfokkooi gehouden (30 × 30 × 30 cm) en gevoed met 2 soorten voedsel: i) een mengsel van 10% (g/v) suikeroplossing en 1,5% (v/v) multivitamine siroopoplossing (SEVEN SEA, Engeland) en ii) verse varkenslever. Verse varkenslever werd geleverd als voedsel voor larven en als plaats van ovipositie. De aanwezigheid van eieren op de varkenslever werd dagelijks waargenomen. Toen eieren werden gevonden, werd de varkenslever met vliegeieren voorzichtig overgebracht in een larve-opfokdoos met behulp van een tang, en vervolgens werden 2 of 3 Stuks (≈50 g/dag) verse varkenslever toegevoegd als voedsel voor de larven. Sommige stukken verse varkenslever werden dagelijks toegevoegd totdat de larven in de doos stopten met eten en bewegen of ze werden het prepupale stadium (laat 3e Stadium). Alle stukken varkenslever die in de opfokdoos achterbleven, werden uit de doos verwijderd. Alleen poppen werden in de opfokdoos bewaard en goed afgesloten totdat de volwassen exemplaren werden gevonden. Daarna werd de doos in een opfokkooi geplaatst en geopend om de volwassen dieren uit de doos te bevrijden om in de opfokkooi te leven. Nieuwe vlieggeneratie werd continu gekweekt zoals hierboven vermeld.
2.2. Morfologie
ei
In deze studie werden eispecimens van H. ligurriën verkregen uit de laboratoriumkolonie om verschillende kenmerken te onderzoeken door gebruik te maken van de kaliumpermanganaatkleuringstechniek, volgens een eerdere beschrijving van Sukontason et al. . De belangrijkste kenmerken, zoals de morfologie van het mediane gebied rond de micropyle, en chorionische sculpturen, werden waargenomen en gefotografeerd onder een lichtmicroscoop (Olympus, Japan), die verbonden was met een digitale camera (Samsung S700, Korea). Verder werden de breedtes en lengtes van 30 vliegeitjes ook gemeten onder de gekalibreerde lichtmicroscoop. Gemiddelde en standaardafwijking van breedte en lengte werden geanalyseerd met behulp van het Excel-programma (Microsoft office Enterprise 2007).
larve
Deze studie bepaalde de morfologie en ontwikkelingssnelheid in alle larvestadia (1e, 2e en 3e Stadium). De morfologie van alle stadia werd onderzocht met behulp van de hydroxide clearing methode. In het kort werden 30 larven van elk stadium uit de laboratoriumkolonie gehaald en geslacht door ze gedurende 30 sec in een bekerglas met heet water (80°C) te plaatsen om te voorkomen dat ze krimpen . Daarna werden ze bewaard in een klein glazen flesje met 70% ethanol. De bewaard gebleven larven werden afzonderlijk op twee plaatsen ontleed om drie lichaamsdelen te verkrijgen met behulp van een scherp mes onder een stereomicroscoop (Olympus, Japan), volgens de methode beschreven door Sukontason et al. . De eerste snede werd geplaatst over het midden van het tweede thoracale segment voor het bekijken van het interne cephalofaryngeale skelet en externe voorspirakel. De tweede snede werd gepositioneerd over het 11e lichaamssegment om de kenmerken van de achterste spiracle te observeren. Als klaringsmethode werd elk paar voorste en achterste delen achtergelaten in een glasplaat met 10% (g/v) kaliumhydroxideoplossing gedurende 1 dag (voor het 1e Stadium) of 2 dagen (voor het 2e en 3e Stadium). Vervolgens werden de monsters tweemaal gewassen met gedestilleerd water en geneutraliseerd door ze gedurende 30 minuten op een glasplaat te plaatsen met een mengsel van 35% ethanol en 1% ijsazijn. Daarna werden de specimens in serie uitgedroogd in 50%, 70%, 80%, 95%, en absolute ethanol (RCI LABSCAN, Thailand) voor 30 min per alcoholconcentratie. Gedehydrateerde monsters werden overgebracht op een glasplaat met xyleen (Prolab, Frankrijk) en gedurende 1 min achtergelaten voordat ze op een glasplaat werden gemonteerd met 2-3 druppels montagemiddel (Permount). Over elk exemplaar werd een deksel gelegd. De permanente dia ‘ s werden 2 dagen op kamertemperatuur gelaten voordat ze onder een lichtmicroscoop werden geobserveerd. Het cephalofaryngeale skelet en de achterspiracula van elk stadium werden gefotografeerd onder de lichtmicroscoop, die verbonden was met de digitale camera. Bovendien werden de lichaamslengte en-breedte van alle stadia onderzocht. Dertig van de eerste larven werden gemeten met behulp van een gekalibreerde microscoop, terwijl het tweede en derde stadium (n = 30 larven/ elk stadium) werden gemeten met schuifmaten onder een ontleedmicroscoop. Gemiddelde en standaardafwijking van hun lichaamsbreedte en lengte werden geanalyseerd met behulp van het Excel-programma.
pop
In dit stadium werden morfologie van de voorste en achterste delen en kleurverandering bestudeerd. De anterieure en posterieure delen van puparia werden bepaald met behulp van de kaliumhydroxide clearing techniek, eerder beschreven door Sukontason et al. . De voorste delen van puparia waren de overblijfselen van de samengetrokken kop naar het vierde segment van puparia nadat de vliegen waren opgedoken. Ze werden gerekruteerd uit de opfokkast die al was opgedoken. Voor elk posterieure deel, werd het caudale segment van puparium gesneden met een scherp mes onder de stereomicroscoop en vervolgens overgebracht met behulp van een tang in dezelfde glasplaat als die gebruikt voor het voorste deel. Daarna werden ze gedrenkt in 1% (v/v) afwasmiddel om oppervlakartefacten en/of varkensleverweefsels te verwijderen. Als clearingmethode werden de voorste en achterste delen achtergelaten in een reageerbuis met 10% (g/v) kaliumhydroxideoplossing en werd de reageerbuis overgebracht in een waterbad dat gedurende 1 uur bij een temperatuur van 80°C was ingesteld. Vervolgens werd het specimenproces uitgevoerd volgens dat beschreven voor het larvestadium. De belangrijke eigenschappen van voorste en achterste delen werden waargenomen en gefotografeerd onder de lichtmicroscoop, verbonden met de digitale camera. Het aantal papillen in elke achterspiracle van 30 voorste delen werd geteld en berekend voor het bereik. Daarnaast werden dertig puparia gemeten voor hun breedte en lengte met behulp van schuifmaten. Gemiddelde en standaardafwijking van hun breedte en lengte werden geanalyseerd met behulp van het Excel-programma. Ter observatie van de kleurverandering werd slechts één puparium geselecteerd en gefotografeerd dat de kleur van de puparia in de opfokdoos weergeeft. 0, 3, 6, 9, 12, 15, 18, 21, en 24 uur met behulp van de digitale camera. Voor het maken van foto ‘ s, werd puparium gewassen in gedestilleerd water om oppervlakte-artefacten te verwijderen.
volwassen
De jongvolwassenen, 5-7 dagen oud, werden met behulp van een reageerbuis uit de kooi gehaald. Ze werden geofferd door ze 2 uur in een koelkast (-4°C) te plaatsen. daarna werden ze voorzichtig vastgezet met een goede anatomische opstelling. De belangrijke kenmerken voor identificatie werden onderzocht en gefotografeerd onder de stereomicroscoop, verbonden met de digitale camera. Daarnaast werden dertig volwassenen gemeten voor lichaamsbreedte en-lengte met behulp van schuifmaten. In deze studie, lichaamsbreedte betekent de breedte van de 2e thoracale segment, en lichaamslengte is de gehele lengte van het lichaam, variërend van de middelste verbinding oog tot het laatste segment van de buik. Gemiddelde en standaardafwijking van hun lichaamsbreedte en lengte werden geanalyseerd met behulp van het Excel-programma.
2.3. Evaluatie van de ontwikkelingssnelheid
voor de beoordeling van de ontwikkelingssnelheid werden de experimenten uitgevoerd in de open opfokruimte onder de natuurlijke omgevingstemperatuur van de provincie Phitsanulok, Noord-Thailand. Temperatuur en relatieve vochtigheid werden dagelijks geregistreerd met behulp van een thermometer en hygrometer (Thermo-Hygro TM870, China). Het bereik (gemiddelde ± SD) van de geregistreerde temperatuur en relatieve vochtigheid dat werd gebruikt om de ontwikkelingssnelheid van deze vlieg te bepalen, was respectievelijk 26,7 ± 0,61°C en 74 ± 3%. Voor elk experiment begon de ontwikkeling bij het vinden van pas uitgekomen larven (of het 1e stadium); het prepupale Stadium betekende het eindpunt. De pas uitgekomen larven werden herkend als 0 uur oude larven. De evaluatie van de ontwikkelingssnelheid in deze studie werd bestudeerd door de pas uitgekomen larven van dezelfde volwassen vliegkolonie te scheiden in 3 groepen. Elke groep bestond uit 150-200 pas uitgekomen larven. Met een natte kwast (nummer 4) werden ze voorzichtig van de opfokbox naar de nieuwe overgebracht. Verse varkenslever (≈50 g) werd dagelijks geleverd als voedselbron voor de larven in elke opfokdoos. De vijf grootste larven werden om de 3 uur uit de opfokdoos gehaald. ze werden gedood door 30 seconden in heet water (≈80°C) te plaatsen om krimp van de larven te voorkomen en werden bewaard in een klein glazen flesje met 70% ethanol. Alle bewaard gebleven larven werden gemeten lichaamslengten met behulp van een gekalibreerde microscoop of vernier schuifmaten onder een dissecting microscoop, afhankelijk van hun grootte. De relatie tussen larvale lichaamslengtes en ontwikkelingstijd werd geanalyseerd met behulp van het Excel programma. Daarnaast werden de levensduur in andere fasen vastgelegd en geanalyseerd met behulp van het Excel-programma.
3. Resultaten
3.1. Morfologie
ei
Het Ei van H. ligurriens was langgerekt en taps toelopend aan zowel de voorste als de achterste uiteinden (figuur 1(a)). Het meet 1,44 ± 0,11 mm in lengte en 0,47 ± 0,04 mm in breedte (Tabel 1). In deze fase duurde het 10,3 ± 0,30 uur voordat de rui larve werd (Tabel 1). Het ongekleurde ei was romig wit, terwijl de eieren na het kleuren met 1% kaliumpermanganaat lichtbruin van kleur waren. Het mediane gebied werd dorsaal geplaatst, positionerend een Y-vorm die zich uitstrekte van het voorste uiteinde tot bijna het achterste uiteinde(figuur 1 (b)). De lijn van het uitkomen was rechtop, waardoor donkere verdikking langs het mediane gebied werd weergegeven(figuur 1 (a)). De chorionische sculptuur verscheen als een zeshoekig patroon, met zijn reticulaire grens licht verheffend als een net(figuur 1 (c)).
|
||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
larve
onder observatie met de stereomicroscoop vertoonden alle larvestadia van H. ligurriën typische muscoïdvormige vermiforme larve die naar voren en naar achteren gericht was. Het caudale segment had één paar achterspiracles. Het eerste stadium was relatief klein, meet 2,62 ± 0,70 mm in lengte en 0,75 ± 0,35 mm in breedte, met de ontwikkelingstijd in dit stadium voor 12 ± 0,1 uur (Tabel 1). Het cephalofaryngeale skelet was niet goed ontwikkeld(Figuur 2 (a)), terwijl de achterspiracula 2 spiraculaire spleten had die ventraal fuseerden(Figuur 2 (e)). Het tweede stadium was 6,24 ± 1,67 mm lang en 1,37 ± 0,19 mm breed, met een duur van 12 ± 3 uur in dit stadium (Tabel 1). Het cephalofaryngeale skelet was bijna compleet (Figuur 2(b)), terwijl de achterste spiracula twee gescheiden spiracula spleten had met zwak gepigmenteerde onvolledige peritreme (Figuur 2(f)). De grootte van het 3e stadium was het grootst, met een lengte van 12,18 ± 1,31 mm en een breedte van 2,32 ± 0,19 mm. De ontwikkelingstijd was ook de langste in dit stadium, zijnde 84 ± 3 uur (Tabel 1). De kephalofaryngeale skeletten van het vroege en late 3e stadium waren vergelijkbaar(figuur 2(c) en 2 (d) resp.). De achterspiracles van het vroege (Figuur 2(g)) en het late 3e Stadium (Figuur 2(h)) waren vergelijkbaar, met 3 gescheiden spiraculaire spleten en volledige peritreme met een interslitprojectie, behalve voor de laatste met een sterk gepigmenteerde peritreme (Figuur 2(h)). De onderscheidende kenmerken van de drie stadia werden samengevat in Tabel 2.
|
||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Cephalofaryngeale skeletten en achterspiraculen van hemipyrellia ligurriens larven. Cephalofaryngeale skeletten van a) 1e Stadium, b) 2e Stadium, c) vroege 3e Stadium. en (D) laat 3e Stadium. Achterspiracles van (e) 1e Stadium, (f) 2e Stadium, (g) vroege 3e Stadium, en (h) late 3e Stadium. Staven = 100 m m voor alle cijfers.
Pop
Het puparium van H. ligurriën was van typische coarctaatvorm( Figuur 3), die 6,82 ± 0 meet.27 mm lang en 2,76 ± 0,11 mm breed (Tabel 1). Waargenomen kleurveranderingen bleek dat het vroege puparium was romig wit van kleur( 0 h), met het achterste uiteinde nog steeds afgekapt (Figuur 3(a)). Echter, de kleur van het puparium geleidelijk veranderd in lichtgeel bruin binnen 3 uur na pupariatie (Figuur 3 (b)) en vervolgens bruin na ongeveer 15 uur (Figuur 3(f)). De kleur van het puparium veranderde in donkerbruin na ongeveer 18 uur observatie(Figuur 3 (g)). Na 24 uur was het puparium donkerbruin van kleur (figuur 3 (i)). De duur van het hele poppenstadium was 152,5 ± 30,7 uur (Tabel 1).
(a)
(b)
(c)
(d)
(e)
(f)
(g)
(h)
(i)
(a)
(b)
(c)
(d)
(e)
(f)
(g)
(h)
(i)
Color changes in puparia of Hemipyrellia ligurriens up to 24 h after pupariation. Puparium (a)–(i) at 0, 3, 6, 9, 12, 15, 18, 21, and 24 h, respectively. Bars = 100 𝜇m for all figures.
waarneming van de voorste en achterste delen van puparia verscheen als een lichtgeelbruine kleur na behandeling met 10% kaliumhydroxide. De voorste plaat, geperst met een deksel slip, was trapeziumvormig met 2 voorste spiracles gelegen aan beide top uiteinden (Figuur 4(A)). Elke voorspirakel bestond uit 5 tot 7 papillen(Figuur 4 (b)). De wervelkolom waargenomen in het derde segment weergegeven rijen van enkele puntige tips(Figuur 4 (c)). Elk achterspiracle verscheen drie sterk gepigmenteerde donkerbruine spiracula spleten, met sterk gepigmenteerde knop en zwak gepigmenteerde peritreme(Figuur 4 (d)).
(a)
(b)
(c)
(d)
(a)
(b)
(c)
(d)
Puparium of Hemipyrellia ligurriens after treating with 10% KOH. (a) Anterior plate with trapezoid shape. (b) Anterior spiracle with 6 papillae. (c) wervelkolom patroon op het 3e segment met één punt tip. d) achterspiracles. Staven = 100 m m voor alle cijfers.
volwassen
De volwassen H. ligurrienen waren 12,23 ± 0,61 mm lang, 2,85 ± 0,25 mm breed (Tabel 1), en metallisch kopergroen van uiterlijk, met grijswitte pollinose op het voorste deel van de thorax(Figuur 5(A) en 5 (b)). De kop van het vrouwtje was dichoptisch, maar die van het mannetje was subholoptisch(figuren 5(c) en 5 (d)). Grijsachtige bestuiving in het gezicht werd gevonden bij beide geslachten(figuren 5(c) en 5 (d)), en het gehele derde antennesegment was donkerbruin of oranje ventraal(figuren 5(c) en 5 (d)). Squama was Wittig(Figuur 5 (e)). Gena was bedekt met zwarte haren (Figuur 5(f)). Stengelader was zonder setulae(Figuur 5 (g)). Twee postsuturale acrostichale setae werden gevonden op de thorax (Figuur 5(h)). Supraconvexiteit werd gevonden pilose haar(figuur 5 (i)). Alle bovenstaande kenmerken waren belangrijk voor de identificatie van deze vlieg adult.
(a)
(b)
(c)
(d)
(e)
(f)
(g)
(h)
(i)
(a)
(b)
(c)
(d)
(e)
(f)
(g)
(h)
(i)
Adults and important characteristics for identification of Hemipyrellialigurrien. (a) Dorsal view of the female. (b) Dorsal view of the male. (c) Frons of the female showing dichoptic eyes. (d) Frons of the male showing subholoptic eyes. e) zijaanzicht van de volwassene met witachtige squamae (pijl). (F) hogere vergroting van de kop met zwarte haren op de gena (pijl). g) vleugel met de stengelnerf zonder setulae (pijl). h) dorsale thorax. (I) Pilose haar op de supraconvexity (pijl). Staven = 200 𝜇m voor alle cijfers.
3.2. Beoordeling van het ontwikkelingspercentage
beoordeling van het ontwikkelingspercentage van H. ligurrienen werd tijdens het onderzoektijdvak bepaald op basis van de natuurlijke omgevingsconditie van de provincie Phitsanulok. De groeicurve van het larve Stadium toonde sigmoïde vorm (figuur 6). Gegevens over het ontwikkelingstempo van het opfokken toonden aan dat de ontwikkelingstijd van pas uitgekomen larven tot het begin van de puparatie snel groeit in een totale periode van 108 uur. larven bereikten hun maximale mediane lengte bij ≈42 uur, en puparatie vond plaats bij 108h. de levensduur van alle stadia werd ook samengevat in Tabel 1.
relatie tussen ontwikkelingstijd en de larvale lengte van Hemipyrellia ligurriën onder natuurlijke omgevingsomstandigheden (26,7 ± 0,61°C; 74 ± 3% RH) van de provincie Phitsanulok, Noord-Thailand.
4. Discussie
gegevens met betrekking tot belangrijke insectenkenmerken voor een snelle en betrouwbare identificatie en ontwikkeling in het laboratorium zijn cruciale voorwaarden voor een juiste toepassing in forensisch onderzoek. H. ligurriens is een forensisch belangrijke blaasvliegsoort die is geregistreerd in forensische gevallen in Maleisië en Thailand . Deze studie richtte zich op de belangrijke kenmerken voor het identificeren van alle stadia van H. ligurrienen, gebaseerd op observatie onder de lichtmicroscoop en ontwikkelingstijd van elk stadium in natuurlijke omgevingsconditie met gemiddelde temperaturen en relatieve vochtigheid, die respectievelijk 26,7 ± 0,61°C en 74 ± 3% waren. Hoewel de morfologie in sommige stadia van H. ligurriens eerder is bestudeerd gebruikend de scanning elektronenmicroscoop en de lichte microscoop , verstrekte deze studie meer gedetailleerde informatie over onderscheidende eigenschappen en nieuwe aanwijzingen voor identificatie door eenvoudige technieken te gebruiken om nauwkeurigheid en precisie van gerechtelijke toepassing in de toekomst te verhogen. Bovendien leverde deze studie ontwikkelingsgegevens van H. ligurriens, die kunnen worden gebruikt bij het schatten van de PMI van lijken waarop deze vliegensoort is gekoloniseerd.
Chorionsculptuur en breedte en lengte van het mediane gebied werden eerder gemeld als een belangrijk kenmerk bij het identificeren van het vliegei . De morfologie van het ei van H. ligurriens, waargenomen in deze studie door kleuring met 1% kaliumpermanganaat en observatie onder de lichtmicroscoop, was vergelijkbaar met die in eerdere studies, die werden onderzocht met behulp van de scanning elektronenmicroscoop . Daarom, de resultaten van deze studie bevestigde de effectiviteit van kleuring methode, geïnitieerd door Sukontason et al. , ter identificatie van vliegeieren. De bevlekte eieren konden duidelijk worden waargenomen onder de lichtmicroscoop. Bij vergelijking van gegevens met eerdere studies was de grootte van het ei van H. ligurriens in deze studie groter dan die van andere blaasvliegen, zoals Lucilia cuprina, Ceylonomyia (= Chrysomya) nigripes, en Aldrichina grahami; de grootte was echter niet anders dan die van Chrysomya Megacephala en Achoetandrus (= Chrysomya) rufifacies . Volgens informatie van Erzinclioglu, die meldde dat de grootte van het vliegei afhankelijk was van het voedingsniveau , kan de grootte van het vliegei echter niet als primaire identificatiekenmerken worden gebruikt. Daarom moeten bij de identificatie van vliegei de kenmerken van de breedte van het plastron, de morfologie van het plastrongebied rond de micropyle als belangrijkste criteria worden gebruikt en moet de grootte als aanvullende eigenschap voor de identificatie van het ei worden gebruikt .
Op basis van onze referenties was dit onderzoek de eerste studie, waarbij de morfologie van het cephalofaryngeale skelet en de achterspiracula in alle larven van het stadium werd aangetoond door observatie onder de lichtmicroscoop. Kephalofaryngeale skeletten en achterspiraculen van larven werden duidelijk als verschillend in elk stadium gezien. De resultaten van deze studie stemmen overeen met de vorige verslagen . Bovendien toonde deze studie mate van pigmentatie van peritreme in elk stadium. Het kan een nieuwe aanwijzing zijn voor het differentiëren van de leeftijd van larven, vooral tussen vroeg en laat stadium. Aangezien elk ontwikkelingsstadium duidelijk verschillend is evenals de mate van pigmentatie, kunnen de gegevens van deze studie nuttig zijn bij het identificeren van de larvestadia en leeftijd van de larven van deze slagvlieg in detail zoals hierboven vermeld.
studie naar de morfologie van het popstadium leverde de resultaten op die vergelijkbaar waren met de vorige rapporten . De resultaten van observatie in kleurveranderingen per tijd van H. ligurriens puparia werden eerst gerapporteerd in deze studie en kunnen een ander nieuw ondersteunend bewijs zijn om ten minste de geschatte leeftijd van puparia te bepalen voor het verhogen van de nauwkeurigheid van de PMI-waarde.
Deze studie toonde enkele foto ‘ s aan van onderscheidende kenmerken voor het gebruik bij de identificatie van volwassen H. ligurriën. Deze foto ‘ s van bijzondere kenmerken uit deze studie kunnen nuttig zijn voor mensen die niet bekend zijn met de terminologie in de taxonomische sleutels. De huidige taxonomische sleutel voor de identificatie van blaasvliegsoorten in Thailand werd gegeven door Kurahashi en Bunchu . Door de blote ogen van een nonentomoloog lijkt volwassen H. ligurriens qua uiterlijk op A. rufifacies te lijken. Daarom kan de kans op verkeerde identificatie bij beide soorten voorkomen, vooral in Thailand omdat A. rufifacies was de op een na meest overheersende blaasvliegsoort van Thailand, en in sommige provincies in dit land werd het samenvallen van beide soorten gevonden .
Dit onderzoek was het eerste rapport dat de ontwikkelingstijd van H. ligurriens in alle stadia opleverde. De resultaten toonden aan dat de ontwikkelingstijd van H. ligurriens onder natuurlijke omstandigheden in deze studie (een gemiddelde temperatuur van 26,7 ± 0,61°C en relatieve vochtigheid van 74 ± 3%) sneller was dan die van C. megacephala en A. rufifacies, die werden bestudeerd bij een gemiddelde temperatuur van 27,4°C . Verder was de ontwikkelingstijd van elk stadium van H. ligurriens verschillend van die van C. megacephala en A. rufifacies. De ontwikkelingssnelheid van elke soort werd gespecificeerd, hoewel ze groeiden in dezelfde of verwante omstandigheden . Bovendien, variatie van ontwikkelingstijden binnen een blaasvlieg soort werd gevonden in geografisch verschillende populaties . De lokale populatie-specifieke ontwikkelingsgegevens zijn nodig voor het schatten van de leeftijd van de larve om PMI te bepalen. Daarom zijn de gegevens uit deze studie zeer belangrijk voor verdere toepassing, met name in de provincie Phitsanulok.
gegevens, verkregen uit zowel de morfologische kenmerken als de ontwikkelingstijd, voldoen aan de voorgaande informatie en leveren nieuwe ondersteunende bewijzen voor de identificatie van deze blaasvliegsoort en toepassing in forensisch onderzoek, in het bijzonder wanneer H. ligurriens aanwezig is in menselijke kadavers. Bovendien kunnen ze in de toekomst nuttig zijn als basisgegevens in de biologiestudie.
bevestigingen
Deze studie werd voornamelijk ondersteund door een subsidie die werd verstrekt aan N. Bunchu van de Faculteit Medische Wetenschappen, Naresuan University, en een ander van het Thailand Research Fund (MRG5280194). De auteurs danken ook het Centre of Excellence in Medical Biotechnology, Faculteit Medische Wetenschappen, Naresuan University, en de afdeling van Research Administration, Naresuan University, voor ondersteuning en het bekostigen van de publicatie kosten.