BASIC AND TRANSLATIONAL UROLOGY

Experimental model of human corpus cavernosum smooth muscle relaxation

Rommel P. RegadasI; Maria E. A. MoraesII; Francisco J. C. MesquitaI; Joao B. G. CerqueiraI; Lucio F. Gonzaga-SilvaI

IDepartment of Surgery, School Of Medicine, Federal University of Ceara, Fortaleza, Ceara, Brazilië
iidepartment of Pharmacology, School Of Medicine, Federal University of Ceara, Fortaleza, Ceara, Brazilië

correspondentie

Abstract

doel: Om een techniek te beschrijven voor het en bloc oogsten van het corpus cavernosum, caverneuze slagader en urethra van transplantatieorgaandonoren en contractie-ontspanning experimenten met corpus cavernosum gladde spieren. materialen en methoden: het corpus cavernosum werd ontleed tot het punt van gehechtheid met de crus penis. Een segment van 3 cm (corpus cavernosum en urethra) werd geïsoleerd en in ijskoude steriele transportbuffer geplaatst. Onder vergroting werd de holle ader ontleed. Zo werden 2 cm fragmenten van caverneuze slagader en corpus cavernosum verkregen. Strips van 3 x 3 x 8 mm3 werden vervolgens verticaal gemonteerd in een geïsoleerd orgaanbad. Samentrekkingen werden isometrisch gemeten met een Narco-Biosystems force displacement transducer (model F-60, Narco-Biosystems, Houston, TX, USA) en geregistreerd op een 4-kanaals Narco-Biosystems desk model polygraaf.
resultaten: fenylefrine (1µM) werd gebruikt om tonische contracties te induceren in het corpus cavernosum (3-5 g spanning) en de caverneuze slagader (0,5 – 1 g spanning) tot het bereiken van een plateau. Na precontractatie werden relaxantia voor gladde spieren gebruikt om relaxatie-responscurves (10-12M tot 10-4 M) te produceren. Natriumnitroprusside werd gebruikt als ontspanningscontrole. conclusie: de oogsttechniek en het relaxatiemodel voor gladde spiercontractie zoals beschreven in deze studie bleken nuttige instrumenten te zijn bij het zoeken naar nieuwe geneesmiddelen voor de behandeling van erectiestoornissen bij de mens.

sleutelwoorden: penis; holle slagader; erectie van de penis; experimenteel; erectiestoornis

inleiding

erectiestoornis (ED) treft ongeveer 150 miljoen mensen wereldwijd. De prevalentie van ED in Brazilië is hoog: meer dan 40% van de Braziliaanse mannen tussen 40 en 70 jaar lijdt aan ED en meer dan een miljoen nieuwe gevallen worden jaarlijks 1,2 geregistreerd.

hoewel fosfodiësterase type-5 (PDE-5) remmers een revolutie hebben teweeggebracht in de behandeling van erectiestoornissen, hebben veel patiënten, meestal patiënten met endotheliale dysfunctie (56% van de gevallen), geen baat bij deze vorm van therapie 3.

momenteel worden veel studies uitgevoerd met stikstofmonoxide (NO) donoren, guanylylcyclase activatoren (zowel oplosbare intracellulaire als membraangebonden isovormen), ionenkanaalagonisten en RhoA-kinaseremmers om nieuwe geneesmiddelen met verschillende werkingsmechanismen te formuleren voor de behandeling van deze patiëntenpopulatie 4,5.in de overgrote meerderheid van deze studies wordt gebruik gemaakt van corpus cavernosum van ratten en konijnen, omdat het moeilijk is monsters van menselijk weefsel te verkrijgen 5-7. Echter, bij onze Urologie dienst, experimentele studies op ED zijn in uitvoering sinds 2004 met behulp van menselijk corpus cavernosum weefsel van orgaandonoren.het doel van deze studie was een gedetailleerde beschrijving te geven van de techniek die wordt gebruikt voor het en bloc oogsten van het corpus cavernosum, de caverneuze slagader en de urethra van donororganen en de methoden die worden gebruikt bij experimenten met samentrekking-ontspanning met gladde spieren van het corpus cavernosum.

materialen en methoden

alle studieprotocollen werden eerder goedgekeurd door de Human Subjects Research Ethics Committee van de Federale Universiteit van Ceará en door de National Research Ethics Committee van het Braziliaanse Ministerie van Volksgezondheid.

na toestemming van de familie werd humaan corpus cavernosum verkregen van kadaverdonoren (< 40 jaar) tijdens een operatie voor orgaantransplantatie.

na verwijdering van het hart, de lever en de nieren en via dezelfde incisie (xiphoid pubic), bevond het corpus cavernosum zich boven de schaambeensymfyse door digitale hypodermische benadering. Het corpus cavernosum werd ontleed tot het punt van gehechtheid met de ischiopubische ramus (Crus penis) (figuur-1).

Een segment van 3 cm inclusief het corpus cavernosum en urethra werd en bloc geïsoleerd (Figuur-2). Aan het einde van de procedure werd geen extra externe incisie gemaakt. Vervolgens werden de weefsels in ijskoude steriele transportbuffer (Collins-oplossing) geplaatst en binnen 1 uur na verzameling verwerkt.

de monsters werden verwerkt onder stereoscopische vergroting. De gehele caverneuze slagader in het centrum van het corpus cavernosum werd ontleed en geïsoleerd van de omliggende caverneuze weefsels (Figuur-3). Vervolgens werden holle weefsels gescheiden van bindweefsels en de tunica albuginea. Zo werden 2 cm fragmenten van elke caverneuze slagader en corpus cavernosum verkregen.

de fragmenten van het corpus cavernosum werden in strips van ongeveer 3 x 3 x 8 mm3 gesneden en verticaal gemonteerd onder 1g rustspanning. De holle slagader werd in ringen van 5 mm gesneden en horizontaal gemonteerd onder 0,2 g rustspanning. De weefsels werden bewaard in 5 mL orgaankamers die Krebs-henseleit-medium bevatten dat bestaat uit 114,6 mM NaCl, 4,96 mM KCl, 1,3 mM MgSO4, 2,0 mM CaCl2, 1,23 mM NaH2PO4, 25 mM NaHCO3 en 3,6 mM glucose, verrijkt met 10 µM guanethidine en 10 µM indomethacine (pH 7,4, 37ºC, vergast met 5% CO2 en 95% O2).

de weefsels werden 90 minuten in evenwicht gebracht met een wash met tussenpozen van 15 minuten. De spanning werd gemeten door een isometrische transducer (F-60 Narco-Biosystems aangesloten op een 4-kanaals desk model polygraaf) (Figuur-4).

Eén micromol fenylefrine werd aan de baden toegevoegd om 60-70% submaximale samentrekkingen van gladde spieren te verkrijgen. Vervolgens werden concentratie-responscurves (10-8M tot 10-2 M) op relaxantia van gladde spieren of natriumnitroprusside (SNP), een donor van stikstofmonoxide, uitgezet om te controleren op endotheliale functionele integriteit.

resultaten

fenylefrine (1µM) werd gebruikt om tonische samentrekkingen te induceren in het corpus cavernosum (3 – 5g spanning) en de caverneuze slagader (0,5 – 1g spanning) tot het bereiken van een plateau. Na precontractatie werden relaxantia voor gladde spieren gebruikt om relaxatie-responscurves (10-12M tot 10-4 M) te produceren. SNP werd gebruikt als ontspanningscontrole.

in ons laboratorium zijn een aantal chemische stoffen gebruikt om de gladde spieren te ontspannen, waaronder RuC13, een donor van stikstofmonoxide. Het ontspant het menselijke corpus cavernosum en de caverneuze slagader volledig en bereikt een Emax van 100% en een EC50 van 6,4 ± 0,14 (Figuur-5).

gebruikmakend van preparaten van corpus cavernosum met intact endotheel van menselijke donoren jonger dan 40 jaar zonder voorgeschiedenis van erectiestoornissen of cardiovasculaire risicofactoren (bijv. diabetes, hypertensie en dyslipidemieën), bleek dit fysiofarmacologisch model een aantrekkelijk instrument in de zoektocht naar nieuwe geneesmiddelen voor de behandeling van humane erectiestoornissen.

PDE-5 remmers hebben een revolutie teweeggebracht in de behandeling van erectiestoornissen. Nochtans, lijden veel patiënten met ED ook aan endothelial dysfunctie (56%) en reageren daarom niet op deze klasse van drugs 3.

endotheliale dysfunctie wordt vaak waargenomen bij patiënten met comorbiditeiten zoals arteriële hypertensie en diabetes mellitus. Het wordt gekenmerkt door een tekort in de endogene productie van nr. 8.

bij echte ED worden diabetes, hypertensie en dyslipidemie (componenten van het metabool syndroom) meestal geassocieerd met endotheliale dysfunctie. Er is ook gemeld dat er een marker is voor cardiovasculaire arteriële aandoeningen 9.

het zoeken naar nieuwe geneesmiddelen die de beschikbaarheid van endogeen NO kunnen verhogen, is een grote uitdaging geweest. Verschillende experimentele modellen zijn gebruikt in de afgelopen decennia op basis van rat, Konijn en menselijk corpus cavernosum 6,7,10,11.

gebruikmakend van corpus cavernosum in vivo en andere weefsels (bijv. bloedplaatjes) van soorten zoals ratten, konijnen en mensen, Peng Wang et al. 12 concludeerden dat, ondanks vergelijkbare kinetiek en enzymatische kenmerken, Verschillende PDE ‘ s verschillende gevoeligheden hebben voor remmers. Hiermee moet rekening worden gehouden bij het werken met experimentele modellen van dit type.

ons experimentele model gebruikte gezonde corpus cavernosum weefsels van jonge kadavers gedood door trauma of beroerte om de bezorgdheid over vervorming van de resultaten veroorzaakt door monsterweefsels met een slechte conditie te minimaliseren.

in een studie met een vergelijkbaar humaan corpus cavernosum-model voor de evaluatie van het effect van sildenafil op enzymatische PDE-remming en de daaropvolgende relaxatie van de gladde spieren werden daarentegen monsters genomen van patiënten met ED tijdens een operatie voor implantatie van de penisprothese, dus het lijkt waarschijnlijk dat in dit geval de meeste proefpersonen endotheliaal letsel vertoonden tot op zekere hoogte 6.

een ander probleem op dit gebied van onderzoek is de beschikbaarheid van weefsels om de experimenten uit te voeren. In Ceará worden elke maand acht orgaantransplantaties uitgevoerd, waardoor studies zonder grote onderbrekingen kunnen worden afgerond.

Seidler et al. 4 werkte aan een vergelijkbaar model met behulp van corpus cavernosum gedoneerd door patiënten die een geslachtsverandering ondergaan als behandeling voor transseksualiteit en genderidentiteitsstoornis. Ondanks de goede conditie van de weefsels beperkt het kleine aantal mannen dat zich aan dit type procedure onderwerpt de mogelijkheid om voldoende weefsel te verzamelen voor experimenteel werk.

dit document presenteert een uitgebreid model voor het verzamelen van menselijke Corpus cavernosumweefsels en voor het uitvoeren van relaxatie-experimenten met gladde spieren in vivo. Gezonde menselijke corpus cavernosum wordt verwijderd uit kadaverdonoren en onderworpen aan experimenten in geïsoleerde baden. De techniek maakt het mogelijk om het corpus cavernosum, de caverneuze slagader en de urethra te ontleden en te isoleren.

het belang van deze techniek ligt in het feit dat het mogelijk is een reeks nieuwe geneesmiddelen, waaronder stabiele no-donoren, guanylylcyclase-activatoren en Rhoakinaseremmers, te testen op gladde spiercorpus cavernosum, penisslagaders en urethra 7,12-15.

conclusie

dit experimentele model omvat de dissectie, het oogsten, de isolatie en het behoud van het menselijk corpus cavernosum, de caverneuze slagader en de urethra onder ideale omstandigheden, samen met de begeleidende Fysio-farmacologische studies. De haalbaarheid en reproduceerbaarheid van het model maakt het een aantrekkelijk instrument in de zoektocht naar nieuwe geneesmiddelen voor de behandeling van menselijke erectiestoornissen.

belangenconflict

geen aangegeven.

1. Moreira ED Jr, Bestane WJ, Bartolo EB, Fittipaldi JA: Prevalence and determinants of erectile dysfunction in Santos, southeastern Brazil. Sao Paulo Med J. 2002; 120: 49-54.

2. Moreira ED Jr, Lisboa Lôbo CF, Villa M, Nicolosi A, Glasser DB: Prevalence and correlates of erectile dysfunction in Salvador, northeastern Brazil: a population-based study. Int J Impot Res.2002; 14(Suppl 2): S3-9.

3. Feldman HA, Goldstein I, Hatzichristou DG, Krane RJ, McKinlay JB: Impotence and its medical and psychosocial correlates: results of the Massachusetts Male Aging Study. J Urol. 1994; 151: 54-61.

4. Seidler M, Uckert S, Waldkirch E, Stief CG, Oelke M, Tsikas D, et al.: In vitro effecten van een nieuwe klasse stikstofmonoxide (NO) donerende verbindingen op geïsoleerd menselijk erectiel weefsel. Eur Urol. 2002; 42: 523-8.

5. Lopes LFG, Wieraszko AY, El-Sherif, Clarke MJ: D-translabilisatie van stikstofmonoxide in Ru-II-complexen door C-gebonden imidazolen. Inorg-Chim Acta 2001; 312: 15-22.

6. Ballard SA, Gingell CJ, Tang K, Turner LA, Price me, Naylor AM: Effects of sildenafil on the relaxation of human corpus cavernosum tissue in vitro and on the activities of cyclic nucleotide phosphodiesterase isozymes. J Urol. 1998; 159: 2164-71.

7. Prieto D, Rivera L, Recio P, Rubio JL, Hernández M, García-Sacristán a: rol van stikstofmonoxide in de ontspanning opgewekt door sildenafil in penile resistance slagaders. J Urol. 2006; 175: 1164-70.

8. Rendell MS, Rajfer J, Wicker PA, Smith MD: Sildenafil for treatment of erectile dysfunction in men with diabetes: a randomized controlled trial. Sildenafil Diabetes Studiegroep. JAMA. 1999; 281: 421-6.

9. Palumbo PJ: metabole risicofactoren, endotheliale dysfunctie en erectiestoornissen bij mannen met diabetes. Am J Med Sci. 2007; 334: 466-80.

10. Thompson CS, Mumtaz FH, Khan MA, Wallis RM, Mikhailidis DP, Morgan RJ, et al.: Het effect van sildenafil op relaxatie van de gladde spieren van het corpus cavernosal en cyclische GMP-vorming bij het diabetische konijn. EUR J Pharmacol. 2001; 425: 57-64.

11. Angulo J, Cuevas P, Moncada I, Martín-Morales A, Allona A, Fernández A, et al.: Motivering voor de combinatie van PGE (1) en S-nitroso-glutathion om ontspanning van de gladde spieren van de menselijke penis te induceren. J Pharmacol Exp Ther. 2000; 295: 586-93.

12. Wang P, Wu P, Myers JG, Stamford A, Egan RW, Billah MM: Characterization of human, dog and rabbit corpus cavernosum type 5 phosphodiesterases. Life Sci. 2001; 68: 1977-87.

13. Martinez AC, García-Sacristán A, Rivera L, Benedito S: bifasische reactie op histamine in rabbit penile dorsal slagader. J Cardiovasc Pharmacol. 2000; 36: 737-43.

14. Matsumoto a, Morita T, Kondo S: alfa-adrenoceptor-gemedieerde erectie van de penis bij honden: in vivo en in vitro observaties. J Smooth Muscle Res. 2000; 36: 169-79.

15. Andersson KE, Gratzke C: Pharmacology of alpha1-adrenoceptor antagonisten in the lower urinary tract and central nervous system. Nat Clin Pract Urol. 2007; 4: 368-78.

correspondentie met
Dr. Rommel Prata Regadas
Dr. Ratisbona, 208, Fatima
Fortaleza, Ceará, 60411-220, Brazilië
Fax: + 55 85 3366-8064
E-mail: [email protected]

aanvaard na herziening: 20 januari 2010

redactioneel commentaar

erectie van de penis is een complexe neurovasculaire gebeurtenis die berust op vasodilatatie van erectiele weefsels als gevolg van neuronale en endotheliaal afgeleide stikstofmonoxide (NO) die vrijkomt door activering van parasympathische zenuwen op seksuele stimulatie van de caverneus endotheliale voering 1.

deze seksuele prikkel zorgt voor bloedtoevoer naar het corpus cavernosum en de daaruit voortvloeiende stijfheid van de penis wordt gehandhaafd door middel van een veno-occlusief mechanisme.

Dit wordt mogelijk gemaakt door de specifieke microarchitectuur van het corpus cavernosum, dat instaat voor een geavanceerd hemodynamisch systeem.

anders speelt de tunica albuginea een sleutelrol in de erectiele functie.

omdat het rijk is aan elastische vezels, is het bestand tegen overstrekken van het corpus bij verhoogde intracaverneuze druk, waardoor de Trans-albugineale effluentaderen worden gecomprimeerd en de arteriole en de intracaverneuze zenuwen onhoudbaar worden beschermd.

deze functie is mogelijk vanwege zijn structuur gemaakt van collageen vezels verbonden door elastische vezelbruggen 2,3

daarom is het zeer belangrijk om zijn integriteit te behouden om zijn fundamentele rol in het erectiele mechanisme te behouden.

de aanwezigheid van structurele stoornissen zoals een overmatige collageenafzetting geeft aanleiding tot de vorming van een plaque, eerst fibrotisch en daarna verkalkt, zoals kan worden gevonden bij de ziekte van Peyronie.

bovendien is er ook een significante afname van de elastische vezelconcentratie bij deze patiënten met induratie penis plastica 4.

soortgelijke veranderingen werden waargenomen bij patiënten die radicale prostatectomie ondergingen, waarbij de trabeculaire elastische vezels en de gladde spiervezels waren afgenomen en het collageengehalte significant was verhoogd 5.

naarmate de leeftijd vordert, neemt de productie van testosteron af 6, vertraagt de zenuwgeleiding en vermindert de efficiëntie van de vasculaire microcirculatie van de penis.

androgenen zijn essentieel voor de ontwikkeling, groei en rijping van erectiele weefsels, die inwerken op de hemostatis in de corpora cavernosum en de groei van gladde spieren en eiwitsynthese van het bindweefsel reguleren.

daarom kan een afname van hun productie leiden tot de overschakeling van elastische vezels naar collageenvezels, die de basis vormen van cavernosale fibrose 7,8.

recente studies hebben aangetoond dat testosteron ook de expressie van fosfodiësterase type 5 (PDE5) reguleert 9.

het is bekend dat erectiestoornissen (ED) wereldwijd 150 miljoen mensen treffen.tot enkele jaren geleden werd aangenomen dat 90% van de ED een psychogenetische etiologie had.bovendien hebben verdere neurofysiologische, hemodynamische en farmacologische studies ons geholpen om het complexe biochemische en micro-anatomische mechanisme van de erectiele functie beter te begrijpen, waaruit blijkt dat 50% van ED een organische etiologie heeft 10.

aan de andere kant zou zelfs psychogenetische ED het gevolg kunnen zijn van een toename van adrenerge stimulatie en zelf een organische oorsprong hebben 11.

de afgelopen 20 jaar zijn opmerkelijke veranderingen in de behandeling van ED waargenomen.

het ontstaan en het succes van PDE5-remmers als effectieve therapie voor erectiestoornissen is opmerkelijk gezien de intentie achter de ontwikkeling van de oorspronkelijke verbinding: aanvankelijk ontworpen als een anti-anginal middel, werd het al snel duidelijk dat de eerste PDE5-remmer op de markt, sildenafil, erectogenese vertoonde als bijwerking, en het geneesmiddel werd al snel erkend als een potentiële revolutionaire behandeling voor ED.

verder is aangetoond dat sildenafil de progressie van fibrose van het corpus cavernosum voorkomt bij patiënten met prostatectomie. De werkzaamheid ervan lijkt het gevolg te zijn van een anti-proliferatief effect dat wordt uitgeoefend op fibroblasten 12.

Het is bekend dat PDE-5-remmers een revolutie teweeg hebben gebracht in de behandeling van erectiestoornissen en het leven van miljoenen mensen wereldwijd hebben veranderd.

Er is echter nog steeds een hoog percentage patiënten met ED die ook last hebben van endotheliale dysfunctie (56%) en vervolgens niet reageren op deze klasse van geneesmiddelen 13.

hoewel reeds uitgebreid bestudeerd, blijven geen donoren een belangrijk onderwerp met betrekking tot ED.

vele studies zijn uitgevoerd om nieuwe Geen donoren of nieuwe guanylylcyclase activatoren te vinden om te proberen nieuwe geneesmiddelen te vinden voor de behandeling van deze patiënten die niet reageren op PDE-5-remmers 14.het huidige werk toont ons een model voor het verzamelen van menselijke corpus cavernosum weefsels en voor het maken van gladde spierontspanning experimenten in vivo.

Het Gezonde corpus cavernosum, afkomstig van jonge kadavers die gedood zijn door een trauma of een beroerte, biedt weefsels in goede conditie.

in de literatuur hebben we geen soortgelijke aanpak gevonden vanwege de moeilijkheid om monsters van menselijke weefsels te verkrijgen.

Met deze techniek is het mogelijk om nieuwe geneesmiddelen, zoals geen donoren, guanylylcyclase activatoren en Roha-Kinaseremmers, in vivo te testen op humane gladde spierweefsels in plaats van corpus cavernosum in vivo te gebruiken bij dieren zoals ratten of konijnen, zoals het is uitgevoerd door Pen Wang et al. 15.

ten slotte zou deze oogsttechniek en het relaxatiemodel voor gladde spiercontractie een zeer nuttig instrument kunnen zijn om ons te helpen nieuwe geneesmiddelen te vinden om ED te behandelen.

1. Andersson KE, Wagner G: fysiologie van de erectie van de penis. Physiol Rev. 1995; 75: 191-236.

2. Iacono F, Barra S, De Rosa G, Boscaino A, Lotti T: Microstructural disorders of tunica albuginea in patients affected by impotence. Eur Urol. 1994; 26: 233-9.

3. Iacono F, Barra S, Lotti T: elastische vezelconcentratie in de tunica albuginea van corpora cavernosa en nachtelijke tumescentiemonitoring. Int J Impot Res. 1995; 7: 63-70.

4. Iacono F, Barra S, De Rosa G, Boscaino A, Lotti T: Microstructurele aandoeningen van tunica albuginea bij patiënten met de ziekte van Peyronie met of zonder erectiestoornissen. J Urol. 1993; 150: 1806-9.

5. Iacono F, Giannella R, Somma P, Manno G, Fusco F, Mirone V: Histological changes in cavernous tissue after radical prostatectomy. J Urol. 2005; 173: 1673-6.

6. Traish A, Kim N: de fysiologische rol van androgenen in erectie van de penis: regulatie van corpus cavernosum structuur en functie. J Sex Med. 2005; 2: 759-70.

7. Traish AM, Guay AT: zijn androgenen cruciaal voor erecties van de penis bij mensen? Onderzoek van de klinische en preklinische gegevens. J Sex Med. 2006; 3: 382-404; discussie 404-7.

8. Park K, Seo JJ, Kang HK, Ryu SB, Kim HJ, Jeong GW: a new potential of blood oxygenation level dependent (BOLD) functional MRI for evaluating cerebral centers of penile erection. Int J Impot Res. 2001; 13: 73-81.

9. Morelli A, Filippi S, Mancina R, Luconi M, Vignozzi L, Marini M, et al.: Androgenen regelen phosphodiesterase type 5 expressie en functionele activiteit in corpora cavernosa. Endocrinologie. 2004; 145: 2253-63. Erratum in: endocrinologie. 2004; 145: 3152.

10. Kaiser FE: erectiestoornissen bij de verouderende man. Med Clin North Am. 1999; 83: 1267-78.

11. Iacono F, Barra S, Lotti T: evaluatie van penile diepe slagaders in psychogene impotentie door middel van duplex echografie. J Urol. 1993; 149: 1262-4.

12. Iacono F, Prezioso D, Somma P, Chierchia S, Galasso R, Micheli P: Histopathologically proven prevention of post-prostatectomy cavernosal fibrosis with sildenafil. Urol Int. 2008; 80: 249-52.

13. Feldman HA, Goldstein I, Hatzichristou DG, Krane RJ, McKinlay JB: Impotence and its medical and psychosocial correlates: resultaten van de Massachusetts mannelijke veroudering studie. J Urol. 1994; 151: 54-61.

14. Seidler M, Uckert S, Waldkirch E, Stief CG, Oelke M, Tsikas D, et al.: In vitro effecten van een nieuwe klasse stikstofmonoxide (NO) donerende verbindingen op geïsoleerd menselijk erectiel weefsel. Eur Urol. 2002; 42: 523-8.

15. Wang P, Wu P, Myers JG, Stamford A, Egan RW, Billah MM: Characterization of human, dog and rabbit corpus cavernosum type 5 phosphodiesterases. Life Sci. 2001; 68: 1977-87.