et polyklonal antistoff er en samling av mangeimmunoglobuliner, hver generert fra en annen b-celle klon. Disse antistoffene mål forskjellige epitoper, eller bindingssteder, på et enkelt antigen. Derivasjon fra flere b-celle kloner og påfølgende målretting av flere epitoper er det som skiller polyklonale antistoffer framonoklonale antistoffer.

hvordan lage polyklonale antistoffer

all antistoffgenerering, polyklonale eller monoklonale, begynner med å fremkalle en immunrespons, kalt immunisering. De tiltenkte målene injiseres i verten, anerkjent av immunsystemet som fremmed, og målrettet av antistoffer for immunblokkering eller klaring. Unnlatelse av å montere en immunrespons vil kreve bruk av adjuvanser, immunogene stoffer som Freunds adjuvans eller keyhole limpet hemocyanin (KLH), for ytterligere å drive immunrekruttering. Immunisering omfatter det meste av det som kreves for å lage polyklonale antistoffer. En typisk immunrespons er beskrevet nedenfor.

Å Lage Antistoffer Begynner med Immunisering

Initial Eksponering For Prime Immunrespons

Initial host eksponering for antigen med passende adjuvanser, eksponering kalles «Prime» immunisering. Typiske eksponeringsmetoder inkluderer injeksjon i huden, peritoneum, subkutant lag eller muskel. Mindre vanlige alternativer er oral og intranasal administrasjon.DNA immunisering ER også en ny teknologi for giftige eller på annen måte vanskelig å produsere antigener. Enhver påfølgende eksponering for antigen kalles en» boost » immunisering.

Antigenbehandling ved Antigenpresenterende Celler

Makrofager, DENDRITTISKE Celler (DC) og i mindre grad B-Celler, alle antigenpresenterende celler (Apc), internaliserer antigen ved endocytose eller fagocytose. Antigen behandling bryter antigenet i mindre biter som deretter flyttes til OVERFLATEN AV APC.

Stimulering av B-Celler

Anerkjennelse av antigen presentert på Overflaten av Apc induserer frigjøring av stimulerende signalmolekyler, cytokiner, Fra Hjelper T-Celler. Disse cytokinene aktiverer B-Celler som også gjenkjente antigen gjennom DERES b-Cellereseptor (BCR). Noen b-celler krever Ikke Hjelper T – celle aktivering etter BCR-antigen interaksjon, vanligvis produsere en raskere immunrespons med lavere affinitet antistoffer. Involvering Av Hjelper T-Celler er kritisk i en fylt immunrespons, så vel som regulatingselvtoleranse.

Proliferasjon av B-Celler og Antistoffsekresjon

Aktiverte B-Celler deler seg for å skape både minne B-celle-og plasmacellepopulasjoner. Begge typer celler gjenkjenner samme epitop. Plasmaceller utskiller antistoffer i serum for immungjenkjenning mens minne B-Celler vedvarer i lengre perioder, noe som gir rask respons på sekundær eksponering av det samme antigenet.

Måling Av Immunresponsen

Måling av antistoffnivåene under immuniseringsprosessen er nødvendig for å evaluere fremgang. AnELISA mot målantigen sammenligner immuniserte serumprøver med pre-immuniserte serumprøver som avslører graden av immunrespons drevet av immunisering. Serielle fortynninger av prøver bestemmer titer av antistoffet. Typisk 1:64 000 titer regnes som en robust immunrespons og er tilstrekkelig for å fortsette til serumhøsting eller lymfocyttfusjon. Lavere titere kan kreve påfølgende boostimmuniseringer, alternative administrasjonsveier eller ytterligere adjuvanser.Polyklonal antistoffproduksjon krever bare gjenvinning av blod fra vertsdyret og separasjon av den cellulære fraksjonen fra serumfraksjonen som inneholder utskillede antistoffer. Siden mange antigen – spesifikke antistoffer utskilles av flere aktiverte B-Celler, inneholder blodserum de mange produktene av forskjellige antistoffkloner, derav begrepet polyklonal antistoff. Spesielt er opprettelsen av flere klonale antistoffer mot ett antigen oppnådd ved både behandling av antigen i fragmenter, så vel som hvert fragment som har mindre regioner, betegnet epitoper. Hver Kan hver gjenkjennes av spesifikke Bcr. Forskjellige b-Cellepopulasjoner utskiller spesifikke, men likevel forskjellige antistoffer mot det samme antigenet. Videre inneholder serum ikke bare antistoffer rettet mot det tiltenkte målet antigen, men alle andre immunglobuliner mot andre mål, narkotika, hormoner, etc. det er i serumet. Serum kan brukes direkte som en molekylærbiologisk sonde, men krever ofte ytterligere rensing for å øke følsomheten og spesifisiteten til en bestemt analyse. Affinitetsrensing oppnår antistoffgjenvinning i varierende grad avhengig av teknikken som vist nedenfor, men ingen når epitopnivåspesifikiteten til et monoklonalt antistoff.

Polyclonal Antibody Applications

Polyklonale Antistoffrelaterte Tjenester

Vårpolyexpress™ – tjeneste er en kostnadseffektiv og rask måte å lage tilpassede molekylære prober på. Fra antigensekvens til leverte antistoffer i 45 dager garantert. Leter du etter enda mer kontroll over antistoffutvikling? TA en titt på NOEN av våre andre antistofftjenester:

• DNA Immuniseringer, vår spesialitet. For starten av et antistoffutviklingsprosjekt. Omgår in vitro protein antigen produksjon og avtaler med vanskelige mål.
• MonoExpress™ Antistoff Service service bærer bransjeledende applikasjonsgarantier, noe som sikrer suksess i analysene dine.
• Anti-idiotype Antistoffer gjør PK eller PD testing av terapeutiske antistoff narkotika lett. DE oppdager BARE CDR av målet antistoff.

med 12 års erfaring med å utvikle tilpassede antistoffer, er prosjektet i eksperthender. Få et tilbud i dag!

Sitater og Bestilling

våre kundeservicerepresentanter er tilgjengelige 24 timer i døgnet, mandag til fredag for å hjelpe deg.