| mag vs resolution | working distance | monocular parts | care of the microscopes |
| monocular focusing | oil immersion | measuring field diameter | binocular parts | binocular focusing | PDF version| Microscopy Exercises |

A. Introduksjon

det typiske sammensatte lysmikroskopet (Fig.1) er i stand til å øke vår evne til å se detaljer med 1000 ganger, slik at objekter så små som 0,1 mikrometer (um) eller 100 nanometer (nm) kan ses. Elektronmikroskop utvider dette området ytterligere, slik at vi kan se objekter så små som 0, 5 nm i diameter eller omtrent 1/200 000 den størrelsen vi kan se med blotte øyne. Unødvendig å si, utvikling og bruk av mikroskoper har vesentlig forbedret vår forståelse av celler og deres struktur og funksjon.

Figur 1. Binokulært sammensatt mikroskop.

B. Forstørrelse, Oppløsning og Arbeidsavstand

Forstørrelse er ganske enkelt en funksjon av å få et objekt til å virke større, for eksempel når vi bruker en håndlinse for å forstørre det trykte ordet. Bare forstørre et objekt uten en samtidig økning i mengden av detaljer sett vil ikke gi betrakteren med et godt bilde. Evnen til et mikroskop (eller øye) for å se detaljer er en funksjon av oppløsningskraften. Oppløsningskraft er definert som minimumsavstanden mellom to objekter hvor objektene bare kan skilles som separate og er en funksjon av bølgelengden til lys som brukes og kvaliteten på optikken. Generelt, jo kortere bølgelengden til lyskilden, desto høyere oppløsning av mikroskopet.

arbeidsavstand er avstanden mellom objektivlinsen og prøven. Ved lav forstørrelse er arbeidsavstanden relativt lang. Når du øker forstørrelsen, reduseres arbeidsavstanden dramatisk. Olje nedsenking linser pactically berøre prøven. Vær oppmerksom på denne endringen i arbeidsavstand med økende forstørrelse for å forhindre skade på prøvene dine.

Til toppen av siden

C. Deler Av Monocular Sammensatte Lysmikroskop:

ta deg tid til å bli kjent med mikroskop og riktig bruk. Kontrollene av de to gjør av mikroskoper vi bruker i våre kurs er vist nedenfor (Fig. 2).

Figur 2. Kontroller På Leica og Olympus binokulære sammensatte mikroskoper.

1. Okulær linse eller okular: vår er 10x forstørrelse. Scopes vi vil bruke er monocular (bare ett okular.)

2. Kroppsrør: inneholder speil og prismer som leder bildet til øyelinsen.

3. Nosepiece: holder objektivlinsene, roterer, merk de positive stoppene for hver linse.

4. Objektivlinser: vanligvis 3-4 på våre scopes, 4x, 10x, 43x, 100x olje nedsenking (rød banding). Total forstørrelse = okulær effekt x objektiv effekt.

5. Stage: plattform som lysbilder er montert for visning; noen omfang har mekaniske stadier. Lær hvordan du klipper lysbildet på riktig måte.

6. Membran: membranen styrer mengden lys som passerer til prøven og kan drastisk påvirke fokuset på bildet. LÆR Å BRUKE MEMBRANEN SÅ RASKT SOM MULIG. DE FLESTE PROBLEMER DU VIL HA FOKUS VIL SKYLDES FEIL JUSTERING AV LYS.

vi har to typer:

• iris membran: Se etter en spak like under scenen nær forsiden.
• dial type: Like under scenen er en roterende urskive med forskjellige størrelsesåpninger (hull); denne typen er nyttig for å skape en pseudo mørk felt effekt.

7. Fokusering knotter: Ligger på siden av mikroskop; ytterste er den fine fokus og innerste er grov fokus.
8. Lyskilde: våre områder har innebygd lyskilder. Trykkbryteren er plassert (oftest) bak lyslinsen på basen.

Til toppen av siden

D. Stell og Håndtering av Sammensatte Mikroskop

Det er bare NOEN FÅ ABSOLUTTE regler å observere i omsorg for mikroskop du vil bruke. Tatt vare på, disse instrumentene vil vare mange tiår og fortsette å fungere godt. Vennligst rapporter eventuelle feil umiddelbart til din instruktør.

1. Bruk alltid to hender til å bære omfanget-en på armen og en under basen-INGEN UNNTAK! Aldri bære omfanget opp ned, for okulær kan og vil falle ut.

2. Bruk linsepapir til å rengjøre alle linser før hver laboratorieøkt og etter bruk av oljedypingslinsen. IKKE NOEN GANG, IKKE NÅ, IKKE NOEN GANG, BRUK NOE ANNET ENN LINSEPAPIR FOR Å RENGJØRE LINSENE. Andre papirer er for urene og vil skrape det optiske belegget på linsene. Bruk heller ikke væsker når du rengjør linsene-KUN LINSEPAPIR!

3. Bruk alltid riktig fokuseringsteknikk for å unngå å ramme objektivlinsen inn i et lysbilde-dette kan ødelegge objektivlinsen og / eller ødelegge et dyrt lysbilde.

4. Slå alltid av lyset når du ikke bruker omfanget.

5. Plasser alltid ledningen forsiktig ut av skade. Ledninger loopet i beinet mellomrom invitere en stor mikroskop katastrofe. Prøv å skyve ledningen ned gjennom skuffen håndterer bside din benk plass.

6. Skift alltid dekselet på mikroskopet når du legger det bort

Til toppen av siden

E. Fokuseringsprosedyre: Monokulære Sammensatte Mikroskoper

1. Slå på lyskilden.

2. Bytt til 10x objektivlinsen.

3. Tilbake på grov fokus for å heve nesen stykke.

4. Plasser prøveskruen på scenen og fest den i riktig posisjon. Se på lysbildet og plasser det slik at prøven er over lysåpningen i scenen.

5. Nedre objektiv til nedre grense (nær lysbilde). Løft linsen med grov fokusknappen til du ser bildet komme i fokus og deretter gå ut igjen, og fokus tilbake til du finner senterfokus. Juster fint fokus på samme måte.

6. Senter bildet og juster lyset ved hjelp av membranen.

7. Recenter og juster fokus, først grov, deretter fin fokus som i trinn 5.

8. Juster membranen etter behov.

9. Bytt nå mål til 43x hvis en høyere forstørrelse er nødvendig. Juster fokus og lys (membran) etter behov.

våre omfang er parfokale, noe Som betyr at når du bytter fra lav (100x) til høy (430x) effekt, vil et fokusert bilde med lav effekt forbli mer eller mindre i fokus ved høyere effekt. Sannsynligvis må du justere det fine fokuset og membranen litt.

Til toppen av siden

F. Oil Immersion Procedure

på noen av våre monokulære, og alle de binokulære sammensatte mikroskoper, har vi 100x olje immersion linser. Disse kan identifiseres med et rødt bånd rundt linsehuset. Ved forstørrelser større enn omtrent 500x brytes lyset for mye når det passerer gjennom luft for å gi god oppløsningsevne. Dermed er optikk for disse høyere forstørrelsene laget for bruk med en høyverdig mineralolje som medium for overføring av lys. Det er viktig at du bare bruker nedsenkningsolje og at du rengjør linsen grundig med linsepapir etter hver bruk.

1. Finn området av interesse på lysbildet og senter det på 430x.

2. Hev objektivlinsen til grensen (dvs ., maksimere avstanden mellom scene og mål) og sving linsen ut av veien omtrent halvveis til neste posisjon.

3. Legg forsiktig en liten dråpe nedsenkningsolje direkte på lysbildet over midten av regionen av interesse.

4. Roter oljedypemålet på plass, og forsiktig, mens du ser fra siden, senk det med grovfokusknappen til linsen bare kommer i kontakt med oljedråpet. Du vil se drop spranget opp i en kolonne som kontakten er gjort.

5. Senk linsen en smidgen mer og deretter, ved hjelp av den fine fokus og ser gjennom okulær linse, fokusere på prøven.

6. Når du er ferdig, rengjør linsen med linsepapir til det ikke kommer mer olje av og rengjør lysbildet hvis det skal lagres.

Til Toppen av siden

G. Bestemme Synsfeltdiameter

du kan ønske å estimere størrelsen på prøvene (f. eks. celler) du vil se i lab. Den beste måten å gjøre dette på er med en okulær mikrometer, en presisjons okulær linseinnsats som har en linjal etset i glass. Monocular omfang vi bruker i introduksjonskurs er ikke så utstyrt, så vi vil bruke en alternativ metode basert på å vite field-of-view diameter for din bestemt mikroskop. For å gjøre dette må du bestemme:

• den omtrentlige diameteren av ditt lave forstørrelsesfelt for ditt spesielle mikroskop.
• den totale forstørrelsen for hvert av dine andre objektivlinser.

Å Vite dette for hvert objektiv, kan du sammenligne størrelsen på prøven mot den kjente feltdiameteren og gjøre et rimelig esimat av størrelse. Denne teknikken fungerer for ethvert mikroskop.

1. Få en lysbildeskala og plasser den på omfanget ditt. En gjennomsiktig metrisk linjal vil også fungere.

2. Ta det i fokus ved hjelp av 10x-målet(100x totalt). Skalaen barer er trinn på 1mm som vist i figuren nedenfor. Dermed er en svart bar = 0,5 mm som gjør et mellomrom.

3. Flytt lysbildet slik at kanten på en utvendig svart bar bare tangerer det opplyste feltet(se punkt » A » ovenfor).

4. Start på den kanten, anslå hvor mange stolper og mellomrom det tar å krysse synsfeltet. Du må sannsynligvis estimere den siste brøkdelen av et mellomrom eller en bar. For de fleste av våre mikroskoper er den ca. 1,8 -2,0 mm bred. Du må sjekke dette på et mikroskop du bruker som ikke har en okulær mikrometer.

5. Ta opp omfanget ID-nummer og feltdiameter på 100x i lab bærbare for fremtidig referanse.

6. Deretter beregner du feltbredden ved 430x total forstørrelse ved hjelp av følgende formel (vi refererer til 100x mag som «lav effekt» og 430x som «høy effekt»):

(lav effekt mag/ høy effekt mag) x lav effekt feltdiameter (i mm)

anta for eksempel at du bestemmer at 100x feltdiameteren er 1,8 mm, ved 430x vil feltdiameteren være:

(100 / 430) x 1,8 mm = 0,418 mm = 418 um (mikrometer)

merk at feltdiameteren ved høy effekt Er Proporsjonal med forholdet mellom lav til høy effektmål. Det vil si at når du øker forstørrelsen, blir det faktiske synsfeltet proporsjonalt mindre.

Til toppen av siden

H. Kikkert Sammensatte Lysmikroskop
Deler av lysmikroskop

1. Okulær linse eller okular: vår er 10x forstørrelse. Omfanget vi skal bruke er kikkert (to okularer).

2. Kroppsrør: inneholder speil og prismer som leder bildet til de okulære linsene.

3. Nosepiece: holder objektivlinsene, roterer

4. Objektivlinser: vanligvis 3-4 på våre scopes, 4x, 10x, 43x, 100x olje nedsenking (rød banding). Total forstørrelse = okulær effekt x objektiv effekt. De fleste av våre binocs har faste posisjonslinser-scenen beveger seg opp og ned i stedet for linsen.

5. Scene: Bevegelig plattform som lysbilder er montert for visning; alle våre scopes har mekaniske trinn Med X, Y vernier skalaer. Fokus knotter flytte scenen opp og ned.

6. Kondensor: en substage linse som fokuserer lyset på prøven. Binoc-ene våre har kondensatorer som beveger seg opp og ned for å fokusere lysstrålen.

7. Iris Membran: membranen ligger like under scenen og styrer mengden lys som passerer til prøven og kan drastisk påvirke fokuset på bildet.

8. Fokusering knotter: ytterste er den fine fokus og innerste er grov fokus. På binocs styrer disse knottene opp / ned bevegelse av scenen.

9. Lyskilde: våre områder har innebygd lyskilder. Rheostat på / AV-bryteren er plassert enten på omfanget eller på den eksterne strømforsyningen og brukes til å regulere lysintensiteten.

Til toppen av siden

I. Fokuseringsprosedyre: Binokulære Sammensatte Mikroskoper

1. Slå på lyskilden. Binoc scopes har enten en innebygd enhet eller en ekstern strømforsyning.

2. Bytt til 10x objektivlinsen.

3. Juster det grove fokuset for å heve nesestykket (eller senke scenen).

4. Fest lysbildet på scenen i riktig posisjon.

5. Se på de okulære linsene i ditt omfang. En linse er fast og den andre har en fokusering (som et par kikkert). Ta linsen så nær lysbildet som mulig, og se bare gjennom den faste okulære linse, tilbake til prøven bare kommer i fokus. Juster fint fokus på samme måte for det faste objektivet.

6. Nå ser du bare gjennom den justerbare okularen, juster fokuset ved hjelp av fokusringen rundt linsen. Se med begge øynene (juster for interpupillær avstand for å se et enkelt rundt opplyst felt) og gjør noen mindre justeringer for å fokusere.

7. Senter bildet og juster lyset ved hjelp av kondensorlinsen, irismembranen og lyskildens rheostat.

8. Recenter og juster fokus, først grov, deretter fin fokus som i 5.

9. Juster membranen etter behov.

10.Nå bytter mål til en høyere makt. Juster fokus og lys (membran) etter behov.

våre områder er parfokale, noe Som betyr at når du bytter fra lav til høy effekt, vil et fokusert bilde med lav effekt forbli mer eller mindre i fokus ved høyere effekt. Sannsynligvis må du justere det fine fokuset og membranen litt (øk lyset ved høyere krefter.

Modified 11-6-15 gja

Department of Biology, Bates College, Lewiston, ME 04240