Resumen

Hemipyrellia ligurriens (Diptera: Calliphoridae) es una especie de mosca del soplo de importancia forense que se presenta en muchos países. En este estudio, se determinó la morfología de todas las etapas y la tasa de desarrollo de H. ligurriens criados en condiciones ambientales naturales en la provincia de Phitsanulok, al norte de Tailandia. Se describieron y demostraron las características morfológicas de todas las etapas basadas en la observación bajo un microscopio de luz para su uso con fines de identificación. Además, se dio tiempo de desarrollo en cada etapa. El tiempo de desarrollo de H. ligurriens para completar la metamorfosis; de huevo, larva, pupa a adulto, tomó 270.71 h para 1 ciclo de desarrollo. Los resultados de este estudio pueden ser útiles no solo para su aplicación en la investigación forense, sino también para el estudio de su biología en el futuro.

1. Introducción

Especímenes de moscas sopladoras (Diptera: Calliphoridae), especialmente larvas de moscas encontradas en cadáveres y/o en escenas de muerte, se pueden utilizar como evidencia entomológica en investigaciones forenses, es decir, estimar el intervalo postmortem (PMI) y determinar sustancias tóxicas, trauma antes de la muerte y si se han reubicado los restos , como ya se ha documentado . La identificación morfológica precisa de especímenes de insectos es uno de los factores muy importantes desde un punto de vista aplicado, ya que proporcionan pruebas relevantes para las investigaciones forenses . La Hemipyrellia ligurriens (Wiedemann) es una especie de mosca soplada de importancia forense, como se informó anteriormente en casos en Tailandia y Malasia . Esta especie de mosca se distribuye ampliamente, cubriendo Corea, Taiwán, Laos, Singapur, Papúa Nueva Guinea, Australia, India, China, Filipinas, Sri Lanka, Malasia, Indonesia y Tailandia . Además de su importancia forense, H. ligurriens puede ser una molestia en mercados y jardines, y los adultos también son vectores mecánicos de patógenos, debido a su atracción por los excrementos humanos cerca de ambientes ocupados por humanos . Anteriormente, la morfología de algunas etapas inmaduras (huevo, larvas de tercer estadio y pupario) de H. ligurriens solo se ha estudiado mediante la observación bajo un microscopio electrónico de barrido y un microscopio de luz . Por esa razón, la información disponible de H. ligurriens es incompleta para identificar todas las evidencias inmaduras que se pueden encontrar en las escenas de muerte. Además, la tasa de desarrollo de esta especie, que es un dato importante para estimar el PMI, no se ha encontrado en las literaturas citadas. Además, los datos de desarrollo específicos de la población local son muy importantes para estimar la edad de las larvas y determinar el PMI . Para aumentar la exactitud y precisión al aplicar esta información en investigaciones forenses, el estudio de todas sus etapas inmaduras y tasa de desarrollo es de gran interés, ya que la morfología de cada una podría proporcionar características específicas que serán importantes para una identificación adecuada, y los datos de crecimiento en condiciones particulares podrían proporcionar datos esenciales para la estimación del PMI. Por lo tanto, este estudio tuvo como objetivo investigar las características distintivas de todas sus etapas inmaduras mediante la observación bajo el microscopio de luz, para dar algunos detalles importantes para la identificación y determinar su tasa de desarrollo, particularmente en condiciones en la provincia de Phitsanulok, al norte de Tailandia.

2. Materiales y Métodos

2.1. Mantenimiento de H. ligurriens en el Laboratorio

La colonia de H. las ligurias utilizadas en este estudio se obtuvieron originalmente recolectando moscas adultas con una red de barrido en áreas de la aldea de Sao Hin, distrito de Muang Phitsanulok, provincia de Phitsanulok, Tailandia (16°44’18N; 100°13’44E). Todos los adultos de H. ligurriens fueron recolectados en el campo e identificados en base a su morfología, utilizando la clave taxonómica de Tumrasvin et al. , antes de ser criado en el laboratorio. Las moscas se criaron en condiciones ambientales naturales en la sala de cría de sistema abierto, de acuerdo con el método de Sukontason et al. . Brevemente, los adultos fueron mantenidos en una jaula de cría (30 × 30 × 30 cm) y alimentados con 2 tipos de alimentos: (i) una mezcla de solución de azúcar al 10% (p/v) y solución de jarabe multivitamínico al 1,5% (v/v) (SEVEN SEA, Inglaterra) y (ii) hígado de cerdo fresco. Se proporcionó hígado de cerdo fresco como alimento para larvas y lugar de oviposición. Se observó diariamente la presencia de huevos en el hígado de cerdo. Cuando se encontraron huevos, el hígado de cerdo con huevos de mosca se transfirió suavemente a una caja de cría de larvas mediante fórceps, y luego, se agregaron 2 o 3 piezas (≈50 g/día) de hígado de cerdo fresco a la caja como alimento para las larvas. Algunos trozos de hígado de cerdo fresco se agregaron diariamente hasta que las larvas en la caja dejaron de alimentarse y moverse o se convirtieron en la etapa prepupal (tercer estadio tardío). Todos los trozos de hígado de cerdo que quedaron en la caja de cría se retiraron de la caja. Solo las pupas se mantuvieron en la caja de cría y se sellaron herméticamente hasta que se encontró la emergencia del adulto. Después de eso, la caja se colocó y abrió en una jaula de cría para liberar a los adultos de la caja y vivir en la jaula de cría. La nueva generación de moscas se crió continuamente como se mencionó anteriormente.

2.2. Morfología

Huevo
En este estudio, se obtuvieron especímenes de huevos de H. ligurriens de la colonia de laboratorio para investigar características distintas mediante la técnica de tinción de permanganato de potasio, de acuerdo con la descripción previa de Sukontason et al. . Las características principales, como la morfología del área mediana que rodea el micropilo y la escultura coriónica, se observaron y fotografiaron bajo un microscopio de luz (Olympus, Japón), que se conectó a una cámara digital (Samsung S700, Corea). Además, los anchos y longitudes de 30 huevos de mosca también se midieron bajo el microscopio de luz calibrado. La media y la desviación estándar de anchura y longitud se analizaron utilizando el programa Excel (Microsoft office Enterprise 2007).

Larva
Este estudio determinó la morfología y la tasa de desarrollo en todos los estadios larvarios (1º, 2º y 3º estadios). Se investigó la morfología de todos los estadios utilizando el método de limpieza de hidróxido. Brevemente, se obtuvieron 30 larvas de cada estadio de la colonia de laboratorio y se sacrificaron colocándolas en un vaso de precipitados que contenía agua caliente (80°C) durante 30 segundos para evitar que se encogieran . Después de eso, se conservaron en una pequeña botella de vidrio que contenía un 70% de etanol. Las larvas preservadas se diseccionaron individualmente en dos sitios para obtener tres porciones corporales utilizando una cuchilla afilada bajo un microscopio estereoscópico (Olympus, Japón), de acuerdo con el método descrito por Sukontason et al. . El primer corte se colocó a través de la mitad del segundo segmento torácico para observar el esqueleto cefalofaríngeo interno y el espiráculo anterior externo. El segundo corte se colocó a través del segmento 11 del cuerpo para observar las características del espiráculo posterior. Como método de limpieza, cada par de partes anterior y posterior se dejó en una placa de vidrio que contenía una solución de hidróxido de potasio al 10% (p/v) durante 1 día (para el 1er estadio) o 2 días (para el 2do y el 3er estadio). Posteriormente, las muestras se lavaron dos veces con agua destilada y se neutralizaron colocándolas en una placa de vidrio que contenía una mezcla de etanol al 35% y ácido acético glacial al 1% durante 30 min. Después de eso, las muestras se deshidrataron en serie en 50%, 70%, 80%, 95%, y etanol absoluto (RCI LABSCAN, Tailandia) durante 30 minutos por concentración de alcohol. Las muestras deshidratadas se transfirieron a una placa de vidrio que contenía xileno (PROLAB, Francia) y se dejaron durante 1 minuto antes de montarlas en un portaobjetos de vidrio con 2-3 gotas de medio de montaje (Permount). Se colocó una tapa sobre cada espécimen. Los portaobjetos permanentes se dejaron a temperatura ambiente durante 2 días antes de observarlos bajo un microscopio de luz. El esqueleto cefalofaríngeo y el espiráculo posterior de cada estadio se fotografiaron bajo el microscopio de luz, que se conectó a la cámara digital. Además, se examinó la longitud y el ancho del cuerpo de todos los estadios. Treinta de las larvas del primer estadio se midieron utilizando un microscopio calibrado, mientras que el segundo y tercer estadio (n = 30 larvas/ cada estadio) se midieron con calibradores vernier bajo un microscopio de disección. La media y la desviación estándar de su ancho y longitud corporal se analizaron mediante el programa Excel.

Pupa
En esta etapa se estudió la morfología de las partes anterior y posterior y el cambio de coloración. Las partes anterior y posterior de puparia se determinaron mediante la técnica de limpieza de hidróxido de potasio, descrita previamente por Sukontason et al. . Las partes anteriores de puparia eran los restos de la cabeza contraída hasta el cuarto segmento de puparia después de que las moscas habían emergido. Fueron reclutados de la caja de cría que las moscas ya habían emergido. Para cada parte posterior, el segmento caudal del pupario se cortó con una cuchilla afilada bajo el microscopio estereoscópico y luego se transfirió mediante fórceps a la misma placa de vidrio que la utilizada para la parte anterior. Después de eso, se empaparon en detergente para lavar platos al 1% (v/v) para eliminar los artefactos de la superficie y/o los tejidos del hígado de cerdo. Como método de limpieza, las partes anterior y posterior se dejaron en un tubo de ensayo que contenía una solución de hidróxido de potasio al 10% (p/v), y el tubo de ensayo se transfirió a un baño de agua a una temperatura de 80°C durante 1 h. Luego, el proceso de la muestra se realizó siguiendo el descrito para la etapa de larva. Las características importantes de las partes anterior y posterior se observaron y fotografiaron bajo el microscopio de luz, conectado a la cámara digital. Se contó y calculó el número de papilas en cada espiráculo posterior de 30 partes anteriores para su rango. Además, se midieron treinta puparias por su anchura y longitud utilizando calibradores vernier. La media y la desviación estándar de su anchura y longitud se analizaron mediante el programa Excel. Para observar el cambio de coloración, solo se seleccionó y fotografió un pupario que representaba el color de la puparia en la caja de cría 0, 3, 6, 9, 12, 15, 18, 21, y 24 horas usando la cámara digital. Antes de tomar fotografías, el pupario se lavaba en agua destilada para eliminar los artefactos de la superficie.

Adulto
Los adultos jóvenes, de 5 a 7 días de edad, se obtuvieron de la cría enjaulada utilizando un tubo de ensayo. Se sacrificaron colocándolos en un refrigerador (-4°C) durante 2 h. Después de eso, se fijaron suavemente con una buena disposición anatómica. Las características importantes para la identificación se examinaron y fotografiaron bajo el microscopio estereoscópico, conectado a la cámara digital. Además, se midió el ancho y la longitud del cuerpo de treinta adultos utilizando calibradores vernier. En este estudio, la anchura corporal significa la anchura del 2do segmento torácico, y la longitud corporal es toda la longitud del cuerpo, que va desde el ojo compuesto medio hasta el último segmento del abdomen. La media y la desviación estándar de su ancho y longitud corporal se analizaron mediante el programa Excel.

2.3. Evaluación de la Tasa de Desarrollo

Para la evaluación de la tasa de desarrollo, los experimentos se realizaron en la sala de cría de sistema abierto a temperatura ambiente natural de la provincia de Phitsanulok, en el norte de Tailandia. La temperatura y la humedad relativa se registraron diariamente utilizando un termómetro e higrómetro (Termo-Higro TM870, China). Los rangos (Media ± DE) de temperatura y humedad relativa registrados utilizados para determinar la tasa de desarrollo de esta mosca fueron de 26,7 ± 0,61°C y 74 ± 3%, respectivamente. Para cada experimento, la tasa de desarrollo comenzó al encontrar larvas recién nacidas (o el 1er estadio); la etapa prepupal significó el punto final. Las larvas recién nacidas fueron reconocidas como larvas de 0 h de edad. La evaluación de la tasa de desarrollo en este estudio se estudió separando las larvas recién nacidas de la misma colonia de moscas adultas en 3 grupos. Cada grupo consistía de 150-200 larvas recién nacidas. Se transfirieron suavemente de la caja de cría a la nueva utilizando un pincel húmedo (número 4). Hígado de cerdo fresco (≈50 g) se proporcionó diariamente como fuente de alimento para las larvas en cada caja de cría. Las cinco larvas más grandes se retiraron de la caja de cría cada 3 h. Se sacrificaron colocándolas en agua caliente (≈80 ° C) durante 30 segundos para evitar la contracción larvaria y se conservaron en una pequeña botella de vidrio que contenía etanol al 70%. Se midieron las longitudes corporales de todas las larvas conservadas utilizando un microscopio calibrado o calibradores vernier bajo un microscopio de disección, dependiendo de sus tamaños. La relación entre la longitud del cuerpo larvario y el tiempo de desarrollo se analizó con el programa Excel. Además, se registraron y analizaron los períodos de vida en otras etapas mediante el programa Excel.

3. Resultados

3.1. Morfología

Huevo
El huevo de H. ligurriens era alargado y cónico en los extremos anterior y posterior (Figura 1 (a)). Medía 1,44 ± 0,11 mm de longitud y 0,47 ± 0,04 mm de ancho (Tabla 1). Se tardó un tiempo en esta etapa de 10,3 ± 0,30 h antes de que la muda se convirtiera en la etapa larvaria (Tabla 1). El huevo sin teñir era de color blanco cremoso, mientras que los que se mancharon con permanganato de potasio al 1% eran de color marrón claro. El área mediana se localizó dorsalmente, posicionando una forma de Y que se extendía desde el extremo anterior hasta casi el extremo posterior (Figura 1 (b)). La línea de eclosión estaba erguida, mostrando así un engrosamiento oscuro a lo largo del área mediana (Figura 1(a)). La escultura coriónica apareció como un patrón hexagonal, con su límite reticular ligeramente elevado como una red(Figura 1 (c)).

Figura 1.

el Huevo de Hemipyrellia ligurriens teñidos con 1% de permanganato de potasio. a) Huevo entero; MA: área mediana. b) Extremo anterior del huevo con plastrón bifurcado y micropilo; M: micropilo. (c) Escultura coriónica externa que muestra un patrón hexagonal, con su límite reticular ligeramente elevado como una red. Barras = 100 m m para todas las figuras.

Larva
Bajo observación con microscopio estereoscópico, todos los estadios larvarios de H. ligurriens mostraron larva vermiforme de forma muscoide típica que fue puntiaguda en la parte anterior y roma en la posterior. El segmento caudal tenía un solo par de espiráculos posteriores. El primer estadio fue relativamente pequeño, midiendo 2,62 ± 0,70 mm de largo y 0,75 ± 0,35 mm de ancho, con un tiempo de desarrollo en esta etapa de 12 ± 0,1 h (Tabla 1). El esqueleto cefalofaríngeo no estaba bien desarrollado (Figura 2 (a)), mientras que el espiráculo posterior tenía 2 ranuras espiraculares que se fusionaban ventralmente (Figura 2(e)). El segundo estadio fue de 6,24 ± 1,67 mm de largo y 1,37 ± 0,19 mm de ancho, con una duración de 12 ± 3 h en esta etapa (Tabla 1). El esqueleto cefalofaríngeo estaba casi completo (Figura 2 (b)), mientras que el espiráculo posterior tenía 2 hendiduras espiraculares separadas con peritremo incompleto débilmente pigmentado(Figura 2 (f)). El tamaño del 3er estadio fue el más grande, midiendo 12,18 ± 1,31 mm de largo y 2,32 ± 0,19 mm de ancho. El tiempo de desarrollo también fue el más largo en esta etapa, siendo 84 ± 3 h (Tabla 1). Los esqueletos cefalofaríngeos del tercer estadio temprano y tardío eran similares (Figuras 2 (c) y 2(d), respectivamente.). Los espiráculos posteriores del 3er estadio temprano (Figura 2(g)) y tardío (Figura 2(h)) fueron similares, con 3 ranuras espiraculares separadas y peritremo completo con una proyección interlitada, a excepción de este último que muestra un peritremo altamente pigmentado (Figura 2(h)). Las características distintivas de los tres estadios se resumen en el cuadro 2.

Figura 2

Cephalopharyngeal esqueletos y posterior espiráculos de Hemipyrellia ligurriens de las larvas. Esqueletos cefalofaríngeos de (a) 1er estadio, (b) 2do estadio, (c) 3er estadio temprano,. y (d) 3er estadio tardío. Espiráculos posteriores de (e) 1er estadio, (f) 2do estadio, (g) 3er estadio temprano, y (h) 3er estadio tardío. Barras = 100 m m para todas las figuras.

Pupa
El pupario de H. ligurriens fue de forma típica de coarctato (Figura 3), que midió 6,82 ± 0.27 mm de largo y 2,76 ± 0,11 mm de ancho (Tabla 1). Los cambios de color observados revelaron que el pupario temprano era de color blanco cremoso (0 h), con el extremo posterior aún truncado (Figura 3(a)). Sin embargo, el color del pupario cambió gradualmente a marrón amarillo claro dentro de las 3 h después de la puparización (Figura 3(b)) y luego a marrón después de alrededor de 15 h (Figura 3(f)). El color del pupario cambió a marrón oscuro después de aproximadamente 18 h de observación(Figura 3 (g)). A las 24 h, el pupario mostró el color marrón más oscuro(Figura 3 (i)). La duración de todo el estadio de pupa fue de 152,5 ± 30,7 h (Tabla 1).

(a)

(b)

(c)

(d)

(e)

(f)

(g)

(h)

(i)

(a)
(b)
(c)
(d)
(e)
(f)
(g)
(h)
(i)

Figure 3

Color changes in puparia of Hemipyrellia ligurriens up to 24 h after pupariation. Puparium (a)–(i) at 0, 3, 6, 9, 12, 15, 18, 21, and 24 h, respectively. Bars = 100 𝜇m for all figures.

La observación de las partes anterior y posterior de puparia apareció de color amarillo-marrón pálido después de ser tratada con hidróxido de potasio al 10%. La placa anterior, presionada con un deslizamiento de cubierta, tenía forma trapezoidal con 2 espiráculos anteriores ubicados en ambos extremos superiores(Figura 4 (a)). Cada espiráculo anterior consistía de 5 a 7 papilas (Figura 4 (b)). La columna vertebral observada en el tercer segmento mostraba filas de puntas de una sola punta(Figura 4 (c)). Cada espiráculo posterior presentaba tres hendiduras espiraculares de color marrón oscuro muy pigmentadas, con un botón muy pigmentado y un peritremo débilmente pigmentado (Figura 4(d)).

(a)

(b)

(c)

(d)

(a)
(b)
(c)
(d)

Figure 4

Puparium of Hemipyrellia ligurriens after treating with 10% KOH. (a) Anterior plate with trapezoid shape. (b) Anterior spiracle with 6 papillae. (c) Patrón de columna vertebral en el 3er segmento que muestra la punta de un solo punto. d) Espiráculos posteriores. Barras = 100 m m para todas las figuras.

Adulto
El H. ligurriens adulto era de 12,23 ± 0,61 mm de largo, 2,85 ± 0,25 mm de ancho (Tabla 1) y de aspecto verde cobre metálico, con polinosa blanca grisácea en la parte anterior del tórax (Figuras 5(a) y 5(b)). La cabeza de la hembra era dicóptica, pero la del macho era subholóptica(Figuras 5(c) y 5 (d)). Se encontró polinosidad facial grisácea en ambos sexos (Figuras 5 (c) y 5 (d)), y todo el tercer segmento antenal era de color marrón oscuro o naranja ventralmente(Figuras 5(c) y 5 (d)). El escama era blanquecino(Figura 5 e)). Gena estaba cubierto de pelos negros (Figura 5(f)). La vena del tallo no tenía setulas (Figura 5(g)). Se encontraron dos setos acrósticos postsuturales en el tórax (Figura 5 (h)). Se encontró supraconvexidad de pelo piloso (Figura 5 (i)). Todas las características anteriores fueron importantes para la identificación de esta mosca adulta.

(a)

(b)

(c)

(d)

(e)

(f)

(g)

(h)

(i)

(a)
(b)
(c)
(d)
(e)
(f)
(g)
(h)
(i)

Figure 5

Adults and important characteristics for identification of Hemipyrellialigurrien. (a) Dorsal view of the female. (b) Dorsal view of the male. (c) Frons of the female showing dichoptic eyes. (d) Frons of the male showing subholoptic eyes. e) Vista lateral del adulto con escamas blanquecinas (flecha). f) Aumento mayor de la cabeza que muestra pelos negros en la gena (flecha). g) Ala que muestra la vena del tallo sin setulas (flecha). h) Tórax dorsal. (i) Pelo piloso en la supraconvexidad (flecha). Barras = 200 m m para todas las figuras.

3.2. Evaluación de la tasa de desarrollo

Durante el período de investigación se determinaron las evaluaciones de la tasa de desarrollo de H. ligurriens, sobre la base de las condiciones ambientales naturales de la provincia de Phitsanulok. La curva de crecimiento del estadio larvario mostró forma sigmoide (Figura 6). Los datos sobre la tasa de desarrollo de la crianza revelaron que el tiempo de desarrollo desde la eclosión de las larvas hasta el inicio de la puparización crece rápidamente en un período total de 108 h. Las larvas alcanzaron su longitud media máxima a ≈42 h, y la puparización ocurrió a las 108 h. Los períodos de vida de todas las etapas también se resumieron en la Tabla 1.

Figura 6

Relación entre el tiempo de desarrollo y las larvas de la longitud de Hemipyrellia ligurriens bajo condiciones ambientales naturales (26.7 ± 0.61°C; 74 ± 3% HR) de la provincia de Phitsanulok, al norte de Tailandia.

4. Discusión

Los datos relacionados con las características importantes de los insectos para una identificación y desarrollo rápidos y confiables en el laboratorio son requisitos previos cruciales para una aplicación adecuada en investigaciones forenses. H. ligurriens es una especie de mosca voladora de importancia forense que se ha registrado en casos forenses en Malasia y Tailandia . Este estudio se centró en las características importantes para identificar todos los estadios de H. liguriens, basado en la observación bajo microscopio de luz y el tiempo de desarrollo de cada etapa en condiciones ambientales naturales con temperaturas medias y humedad relativa, que fueron de 26,7 ± 0,61°C y 74 ± 3%, respectivamente. Aunque la morfología en algunas etapas de H. ligurriens se ha estudiado previamente utilizando el microscopio electrónico de barrido y el microscopio de luz , este estudio proporcionó información más detallada sobre características distintivas y nuevas pistas para la identificación mediante el uso de técnicas simples para aumentar la precisión y la precisión de la aplicación forense en el futuro. Además, este estudio proporcionó datos de desarrollo de H. ligurriens, que pueden ser utilizados para estimar el PMI de los cadáveres en los que esta especie de mosca ha colonizado.

La escultura coriónica, así como el ancho y la longitud del área mediana, fueron reportados previamente como una característica importante en la identificación del huevo de mosca . La morfología del óvulo de H. ligurriens, observada en este estudio mediante tinción con permanganato de potasio al 1% y observación bajo el microscopio de luz, fue similar a la del trabajo anterior, que investigó utilizando el microscopio electrónico de barrido . Por lo tanto, los resultados de este estudio confirmaron la eficacia del método de tinción, iniciado por Sukontason et al. , a efectos de identificación de los huevos de mosca. Los huevos manchados se podían observar claramente bajo el microscopio de luz. Al comparar los datos con estudios anteriores, el tamaño del huevo de H. ligurriens en este estudio fue mayor que el de otras moscas voladoras, como Lucilia cuprina, Ceylonomyia (= Chrysomya) nigripes y Aldrichina grahami; sin embargo, su tamaño no fue diferente de los tamaños de Chrysomya megacephala y Achoetandrus (= Chrysomya) rufifacies . Sin embargo, el tamaño del huevo de mosca no se puede utilizar como las características principales para la identificación , según la información de Erzinclioglu, que informó que el tamaño del huevo de mosca dependía de los niveles dietéticos. Por lo tanto, la identificación del huevo de mosca debe utilizar las características de la anchura del plastrón, la morfología del área de plastrón que rodea el micropilo como criterio principal y el tamaño como característica complementaria para la identificación del huevo .

Con base en nuestras referencias, este estudio fue el primero, mostrando la morfología del esqueleto cefalofaríngeo y el espiráculo posterior en todas las larvas de estadios mediante la observación bajo el microscopio de luz. Los esqueletos cefalofaríngeos y espiráculos posteriores de larvas se vieron claramente diferentes en cada estadio. Los resultados de este estudio coincidieron con los informes anteriores . Además, este estudio mostró el grado de pigmentación del peritremo en cada estadio. Puede ser una nueva pista para diferenciar la edad de las larvas, especialmente entre estadios tempranos y tardíos. Dado que cada fase de desarrollo es definitivamente diferente, así como el grado de pigmentación, los datos de este estudio pueden ser útiles para identificar en detalle las etapas larvarias y la edad de las larvas de esta mosca sopladora, como se mencionó anteriormente.

El estudio de morfología del estadio pupal arrojó resultados similares a los de los informes anteriores . Los resultados de la observación de los cambios de coloración por tiempo de la puparia de H. ligurriens se notificaron en primer lugar en este estudio y pueden ser otra nueva evidencia de apoyo para determinar al menos la edad aproximada de la puparia para aumentar la precisión del valor del PMI.

Este estudio demostró algunas fotografías de características distintivas para su uso en la identificación de H. ligurriens adultos. Estas fotografías de características peculiares de este estudio pueden ser útiles para personas que no están familiarizadas con la terminología de las claves taxonómicas. La clave taxonómica actual para la identificación de especies de moscas voladoras en Tailandia fue dada por Kurahashi y Bunchu . A simple vista de un no-médico, H. ligurriens adulto parece similar a A. rufifacies en apariencia. Por lo tanto, la posibilidad de identificación errónea puede ocurrir en ambas especies, especialmente en Tailandia debido a A. rufifacies fue la segunda especie de mosca soplada más predominante de Tailandia, y se encontró coincidencia de ambas especies en algunas provincias de este país .

Este estudio fue el primer reporte que proporcionó tiempo de desarrollo de H. ligurriens en todas las etapas. Los resultados mostraron que el tiempo de desarrollo de H. ligurriens en condiciones naturales en este estudio (una temperatura promedio de 26,7 ± 0,61°C y una humedad relativa de 74 ± 3%) fue más rápido que el de C. megacephala y A. rufifacies, que se estudiaron a una temperatura promedio de 27,4°C. Además, el tiempo de desarrollo de cada etapa de H. ligurriens fue diferente al de C. megacephala y A. rufifacies. Se especificó la tasa de desarrollo de cada especie, aunque crecieron en las mismas condiciones o en condiciones relacionadas . Además, la variación de los tiempos de desarrollo dentro de una especie de mosca sopladora se encontró en poblaciones geográficamente diferentes . Se necesitan datos de desarrollo específicos de la población local para estimar la edad de las larvas y determinar el PMI. Por lo tanto, los datos de este estudio son muy importantes para su aplicación posterior, particularmente en la provincia de Phitsanulok.

Los datos, obtenidos tanto de las características morfológicas como del tiempo de desarrollo, cumplen con la información anterior y proporcionan nuevas evidencias de apoyo para la identificación de esta especie de mosca sopladora y su aplicación en la investigación forense, particularmente cuando H. ligurriens está presente en cadáveres humanos. Además, pueden ser útiles como datos de referencia en su estudio biológico en el futuro.

Agradecimientos

Este estudio fue apoyado principalmente por una beca otorgada a N. Bunchu de la Facultad de Ciencias Médicas de la Universidad de Naresuan y otro del Fondo de Investigación de Tailandia (MRG5280194). Los autores también agradecen al Centro de Excelencia en Biotecnología Médica de la Facultad de Ciencias Médicas de la Universidad de Naresuan y a la División de Administración de Investigaciones de la Universidad de Naresuan el apoyo y los gastos de publicación.