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A. はじめに

典型的な化合物光学顕微鏡（図。1)は0.1マイクロメートル(um)または100ナノメートル(nm)小さい目的が見ることができるように1000回細部を見る私達の機能を高めることができる。 電子顕微鏡はこの範囲をさらに広げ、直径0.5nmの小さな物体、または肉眼で見ることができるサイズの約1/200,000番目の物体を見ることができます。 言うまでもなく、顕微鏡の開発と使用は、細胞とその構造と機能の理解を大幅に向上させました。

図1。 双眼複合顕微鏡。

B.倍率、解像度、および作動距離

倍率は、単に我々は印刷された単語を拡大するために手のレンズを使 見られる細部の量の同時増加なしで目的を単に拡大してもよいイメージを視聴者に与えない。 顕微鏡（または目）が詳細を見る能力は、その分解能の関数です。 分解能は、2つの物体間の最小距離として定義され、物体を別々に区別することができ、使用される光の波長と光学系の品質の関数である。 一般に、光源の波長が短いほど、顕微鏡の分解能は高くなる。

作動距離は、対物レンズと試験片との間の距離である。 低い拡大で作動距離は比較的長いです。 拡大を高めると同時に作動距離は劇的に減ります。 オイルの液浸レンズはpactically標本に触れます。 あなたの標本への損傷を防ぐために増加する拡大の作動距離のこの変更に気づいていて下さい。

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C.単眼複合光学顕微鏡の部品：

あなたの顕微鏡とその適切な使用に慣れるのに時間がかかります。 私たちのコースで使用する顕微鏡の二つのメーカーのコントロールを以下に示します（図。 2).

図2。 ライカおよびオリンパスの双眼混合の顕微鏡の制御。

1. 眼レンズまたは接眼レンズ：私たちは10倍の倍率です。 私達が使用する規模はmonocularです（1つの接眼レンズだけ。)

2. ボディ管:目レンズにイメージを指示するプリズムおよびミラーを含んでいます。

3. Nosepiece:対物レンズを握りましたり、回りましたり、各レンズのための肯定的な停止に注意します。

4. 対物レンズ:私達の規模の通常3-4、4x、10x、43xの100xオイルの液浸（赤いバンディング）。 総倍率=眼力x対物力。

5. 段階:スライドが観覧のために取付けられるプラットホーム;ある規模に機械段階があります。 スライドを適切な位置にクリップする方法について説明します。

6. ダイヤフラム:ダイヤフラムは標本に渡り、徹底的にイメージの焦点に影響を与えることができるライトの量を制御します。 できるだけ早くダイヤフラムを使用する方法を学びます。 あなたが焦点を合わせることを有するほとんどの問題はライトの不正確な調節が原因である。

私たちは二つのタイプがあります：

• アイリスダイヤフラム：正面の近くのステージのすぐ下のレバーを探してください。
• ダイヤルタイプ：ステージのすぐ下には、異なるサイズの開口部（穴）を有する回転ダイヤルがあり、このタイプは、擬似暗視野効果を作成するのに有用で

7. 焦点のノブ:顕微鏡の側面に置かれる;最も外側は良い焦点であり、最も内側は粗い焦点です。
8. 光源:私達の規模は光源で造りました。 プッシュボタンスイッチは、ベース上のライトレンズの後ろに（ほとんどの場合）配置されています。

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D. 複合顕微鏡のケアと取り扱い

あなたが使用する顕微鏡の世話をする際に観察する唯一のいくつかの絶対的なルールがあります。 大事にされて、これらの器械は多くの十年を持続させ、よく働き続けます。 不具合があった場合は、すぐに講師に報告してください。

1. 常にスコープを運ぶために両手を使用してください-腕の上に一つとベースの下に一つ-例外はありません！ 眼の缶と落ちるために、スコープを逆さまにしないでください。

2. 各実験室の会議の前にそしてオイルの液浸レンズを使用した後すべてのレンズをきれいにするのにレンズのペーパーを使用して下さい。 今までではなく、今までではなく、レンズをきれいにするためにレンズ紙以外のものを使用しないでください。 他の紙はあまりにも不純であり、レンズ上の光学コーティングを傷つけるでしょう。 また、レンズを清掃するときは液体を使用しないでください-レンズ紙のみ！

3. スライドに対物レンズを衝突させることを避けるのに適切な集中の技術を常に使用しなさい-これは対物レンズを壊すことができたりおよび/また

4. スコープを使用しないときは、常にライトをオフにしてください。

5. 常に慎重に害の方法のうち、ワイヤを配置します。 足のスペースでループされたワイヤーは主要な顕微鏡の災害を誘う。 あなたのベンチスペースの引き出しハンドルを通ってワイヤーを滑らせてみてください。

6. あなたがそれを片付けたときに常に顕微鏡のカバーを交換してください

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E.フォーカス手順：単眼複合顕微鏡

1。 光源をオンにします。

2. 10倍対物レンズに切り替えます。

3. 鼻の部分を上げるために粗い焦点で戻って下さい。

4. 標本のスライドを段階に置き、適切な位置でしっかり止めて下さい。 スライドを見て、試料がステージの光の開口部の上にあるように配置します。

5. 下限（スライドに近い）に対物レンズを下げます。 粗いフォーカスノブを使用してレンズを上げ、画像が焦点に入ってくるのを見てから再び外に出て、中央のフォーカスが見つかるまで焦点を合わせます。 同様に細かい焦点を調整します。

6. 画像を中央に配置し、絞りを使用して光を調整します。

7. フォーカスを再調整して調整し、最初に粗い、次にステップ5のように細かいフォーカスを調整します。

8. 必要に応じてダイヤフラムを再調整します。

9. 今度はより高い拡大が必要なら43xに目的を転換して下さい。 必要に応じて、ファインフォーカスとライト（絞り）を再調整します。つまり、低（100x）から高（430x）の電力に切り替えると、低電力でフォーカスされた画像は、より高い電力で多かれ少なかれフォーカスされたままになります。 ほとんどの場合、細かい焦点と絞りをわずかに再調整する必要があります。

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F.オイル浸漬手順

私たちの単眼のいくつか、およびすべての双眼複合顕微鏡では、100xオイル浸漬レンズがあります。 これらはレンズハウジングのまわりの赤いバンドによって識別することができます。 約500倍以上の倍率では、光が空気を通過するときに屈折しすぎて良好な分解能が得られます。 従って、これらのより高い拡大のための光学はライトを送信するために媒体として高い等級の鉱油と使用するためになされる。 液浸オイルだけを使用し、各使用の後でレンズのペーパーとレンズを完全にきれいにすることは命令的です。p>

1. スライド上の関心領域を見つけて、430xの中央に配置します。

2. 対物レンズをその限界まで上げる（すなわち、段階と目的間の間隔を最大にして下さい）および次の位置に半分の方法についての方法からレンズを振ります。

3. 慎重に関心のある領域の中心の上にスライド上に直接浸漬油の小さなドロップを配置します。

4. オイルの液浸の目的を位置に回し、側面から見ている間、レンズがちょうどオイルの低下が付いている接触をするまで粗い焦点のノブを使用して 連絡先が作成されると、ドロップが列に跳躍するのがわかります。

5. レンズをsmidgenもっと下げ、次に、良い焦点を使用して目レンズを通して見て、標本に焦点を合わせて下さい。

6. されたとき、レンズのペーパーが付いているきれいなレンズはこれ以上のオイルが離れて来ないし、救われるべきならスライドをきれいにします。

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G.視野の直径を決定する

ラボで表示される標本（細胞など）のサイズを推定することができます。 これを行うための最良の方法は、目のマイクロメータ、ガラスにエッチング定規を持っている精密な眼レンズインサートです。 入門コースで使用する単眼スコープはそれほど装備されていないので、特定の顕微鏡の視野径を知ることに基づいて別の方法を使用します。 これを行うには、次を決定する必要があります。

• 特定の顕微鏡の低倍率の視野のおおよその直径。
  • 特定の顕微鏡の低倍率の視野のおおよその直径。
    • 他の対物レンズのそれぞれの合計倍率。

    各対物レンズについてこれを知っていれば、標本のサイズを既知の視野直径と比較し、合理的なサイズの大きさを作ることができます。 この技術は、任意の顕微鏡のために働きます。p>

    1. スライドスケールを取得し、スコープ上に配置します。 透明なメトリック定規も同様に動作します。

    2. 10倍の目的（合計100倍）を使用して焦点にそれを持って来なさい。 スケールバーは、下の図に示すように1mmの増分です。 したがって、スペースと同様に黒いバー=0.5mmです。

    3. 外側の黒いバーの端が点灯したフィールドにちょうど接するようにスライドを移動します（上の点”A”を参照）。

    4. その端から始めて、視野を横切るのに必要なバーとスペースの数を推定します。 おそらく、スペースまたはバーの最後の部分を推定する必要があります。 私達の顕微鏡のほとんどのためにそれは幅およそ1.8-2.0mmである。 あなたは目のマイクロメータを持っていないあなたが使用する任意の顕微鏡でこれを確認する必要があります。

    5. 将来の参考のために、スコープのID番号とフィールド直径をラボノートに100xで記録します。

    6. 次に、次の式を使用して合計倍率430xでフィールド幅を計算します（100x magを”低電力”、430xを”高電力”と呼びます）:

    (低電力mag/高電力mag)x低電力フィールド直径(mm単位)

    たとえば、100xフィールド直径が1.8mmであり、430xではフィールド直径は次のようになるとします。

    (100/430)x1.8mm=0.418mm=418um(マイクロメートル)
    

    高出力でのフィールド直径は、高出力対物レンズと低出力対物レンズの比に比例 つまり、倍率を上げると、実際の視野は比例して小さくなります。H.双眼複合光顕微鏡
    光学顕微鏡の部品

    1。 眼レンズまたは接眼レンズ：私たちは10倍の倍率です。 私達が使用する規模は双眼（2つの接眼レンズ）である。

    2. ボディ管:目レンズにイメージを指示するプリズムおよびミラーを含んでいます。

    3. Nosepiece：対物レンズを保持し、回転します

    4。 対物レンズ:私達の規模の通常3-4、4x、10x、43xの100xオイルの液浸（赤いバンディング）。 総倍率=眼力x対物力。 私たちの双眼鏡のほとんどは固定位置レンズを持っています-ステージは、レンズではなく上下に移動します。

    5. 段階:スライドが観覧のために取付けられる移動可能なプラットホーム;私達の規模すべてにXのyのバーニアのスケールが付いている機械段階があ フォーカスノブは、ステージを上下に移動します。

    6. Condensor:標本にライトを焦点を合わせるsubstageレンズ。 私達の双眼鏡に光ビームを集中するために上下に動くcondensorsがある。

    7. 虹彩絞り: ダイヤフラムは段階のすぐ下にあり、標本に渡り、徹底的にイメージの焦点に影響を与えることができるライトの量を制御する。

    8. フォーカシングノブ：一番外側は細かいフォーカスで、一番外側は粗いフォーカスです。 双眼鏡では、これらのノブは、ステージの上下の動きを制御します。

    9. 光源:私達の規模は光源で造りました。 レオスタットのオン/オフスイッチは規模または外部電源にあり、輝度を調整するのに使用されている。

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    I.フォーカス手順: 双眼複合顕微鏡

    1。 光源をオンにします。 Binocの規模に単位か外部電源で造られるのがある。

    2. 10倍対物レンズに切り替えます。

    3. ノーズピースを上げる（またはステージを下げる）ために粗い焦点を調整します。

    4. 適切な位置の段階の標本のスライドを切って下さい。

    5. あなたのスコープの眼のレンズを見てください。 一つのレンズは固定されており、もう一つは（双眼鏡のペアのような）焦点リングを持っています。 標本がちょうど焦点に入って来るまでレンズをできるだけスライドの近くで持って来て下さい、そして、固定目レンズを通してだけ見て、戻って下さい。 固定レンズの場合も同様に微焦点を調整します。

    6. 今度は、調節可能な目を通してだけ見て、レンズのまわりで焦点リングを使用して焦点を調節して下さい。 両方の目で見て（単一の丸い照明フィールドを見るために瞳孔間距離を調整する）、焦点を合わせるためにマイナーな調整を行います。

    7. イメージを中心にし、condensorレンズ、アイリスダイヤフラムおよび光源のレオスタットを使用してライトを調節して下さい。

    8. 焦点を再調整して調整し、最初に粗い、次に細かい焦点を5のように調整します。

    9. 必要に応じてダイヤフラムを再調整します。

    10.今度はより高い発電に目的を転換しなさい。 必要に応じて、ファインフォーカスとライト（絞り）を再調整します。

    私たちのスコープはparfocalなので、低電力から高電力に切り替えると、低電力で焦点を当てた画像は、より高い電力で多かれ少 ほとんどの場合、細かい焦点と絞りをわずかに再調整する必要があります（より高い電力で光を増加させます。

Modified 11-6-15 gja

Department of Biology, Bates College, Lewiston, ME 04240