ポリクローナル抗体とは何ですか？
ポリクローナル抗体の作り方
ポリクローナル抗体は、多くの免疫グロブリンのコレクションであり、それぞれが異なるb細胞クローンから生成されます。 これらの抗体は、単一の抗原上の異なるエピトープまたは結合部位を標的とする。 複数のB細胞クローンからの派生と複数のエピトープのその後のターゲティングは、モノクローナル抗体からポリクローナル抗体を区別するものです。
ポリクローナル抗体を作る方法
ポリクローナルまたはモノクローナルのすべての抗体の生成は、免疫と呼ばれる免疫応答を誘発するこ 意図された標的は、宿主中に注入され、免疫系によって外来として認識され、免疫閉塞またはクリアランスのための抗体によって標的化される。 免疫応答をマウントする失敗は、さらに免疫募集を駆動するために、アジュバント、フロイントのアジュバントや鍵穴limpetヘモシアニン（KLH）などの免疫原性物質 免疫は、ポリクローナル抗体を作製するために必要なものの大部分を含む。 典型的な免疫応答を以下に概説する。
抗体を作ることは、免疫で始まります
プライム免疫応答のための初期暴露
適切なアジュバントを用いた抗原への初期宿主暴露は、暴露は”プライム”免疫と呼ばれます。 露出の典型的な方法は皮、腹膜、subcutaneous層、または筋肉への注入を含んでいます。 あまり一般的ではない選択肢は、経口および鼻腔内投与である。DNA免疫はまた、毒性または抗原を産生することが困難であるための新たな技術でもある。 抗原への任意のその後の曝露は、「増強」免疫化と呼ばれる。
抗原提示細胞による抗原処理
マクロファージ、樹状細胞（DC）、およびより少ない程度のB細胞、すべての抗原提示細胞（APCs）は、エンドサイトーシスまたは食 抗原処理は、抗原をより小さな断片に分割し、それを次にＡＰＣの表面に移動させる。
B細胞の刺激
APCsの表面に提示された抗原の認識は、ヘルパー T細胞からの刺激シグナル伝達分子、サイトカインの放出を誘導する。 これらのサイトカインは，ｂ細胞受容体（ＢＣＲ）を介して抗原を認識するＢ細胞を活性化する。 いくつかのＢ細胞は、ＢＣＲ−抗原相互作用の後にヘルパー Ｔ細胞活性化を必要とせず、通常、より低い親和性抗体でより迅速な免疫応答を産生する。 ヘルパー T細胞の関与は、十分な免疫応答だけでなく、自己寛容を調節する上で重要です。
B細胞の増殖と抗体分泌
活性化されたB細胞は分裂して記憶B細胞と形質細胞集団の両方を作成します。
B細胞の増殖と抗体分泌
活性化されたB細胞 細胞の両方のタイプは、同じエピトープを認識します。 形質細胞は免疫認識のために血清中に抗体を分泌し、記憶B細胞はより長い期間持続し、同じ抗原の二次暴露に対する迅速な応答を提供する。
免疫応答を測定する
免疫プロセス中の抗体レベルを測定することは、進行を評価するために必要である。 標的抗原に対するＡｎｅｌｉｓａは、免疫化された血清試料を、免疫化によって駆動される免疫応答の程度を明らかにする前免疫化された血清試料と比較する。 試料の連続希釈は、抗体の力価を決定する。 通常は1:64,000力価は、堅牢な免疫応答と考えられており、血清収穫またはリンパ球融合に進むのに十分である。 より低い力価は、その後のブースト免疫、投与の代替経路、または追加のアジュバントを必要とし得る。
ポリクローナル抗体血清収穫
ポリクローナル抗体の生産は、宿主動物からの血液の回収および分泌された抗体を含む血清画分からの細胞画 多くの抗原特異的抗体が複数の活性化されたB細胞によって分泌されるので、血清は異なる抗体クローンの多くの生成物を含み、したがってポリクローナル抗体という用語が含まれる。 具体的には、一つの抗原に対する複数のクローン抗体の作成は、抗原の断片への処理と、エピトープと呼ばれるより小さな領域を有する各断片の両方によ それぞれは、特定のBcrによって認識され得る。 異なるB細胞集団は、同じ抗原に対して特異的でありながら異なる抗体を分泌する。 さらに、血清は、意図された標的抗原に対する抗体だけでなく、他の標的、薬物、ホルモンなどに対する他のすべての免疫グロブリンを含む。 それは血清中にあります。 血清は分子生物学の調査として直接使用することができますが頻繁に特定の試金の感受性そして特定性を高めるためにそれ以上の浄化を要求し 親和性精製は、以下に示すような技術に応じて様々な程度の抗体回収を達成するが、モノクローナル抗体のエピトープレベルの特異性には達しない。
| Affinity Purification Technique | Pro | Con |
|---|---|---|
| Protein A/G | Simple, Cost effective | Recovers all immunoglobulin. |
| Antigen Specific | Recovers only antigen specific antibody. | 抗原の自明でない量を必要とします。 |
Polyclonal Antibody Applications
| Application | Polyclonal AntibodyUse Rationale |
|---|---|
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ELISA Detection Antibody
(direct, indirect, sandwich, and capture ELISA formats) |
Binds multiple epitopes to deliver many detection molecules.
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ELISA Capture Antibody
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Polyreactivity can maximally recover antigen from samples.
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Western Blot
Detection Antibody |
Multiple epitope recognition can allow for antigen changes (denaturing/linearizing).
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Target recognized by many Ab for maximal drug delivery, immune recruitment, blocking, or activation.
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臨床試験
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潜在的に検出能力が増加しました。
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