Agglutinazione

L’agglutinazione si riferisce al fenomeno in cui i globuli rossi si uniscono in gruppi tridimensionali. L’agglutinazione è dovuta al legame degli anticorpi ai globuli rossi. Quando singoli anticorpi si legano a più di una cellula del sangue, si formano agglutinati. L’agglutinazione è di solito una scoperta patologica e di supporto di una diagnosi di anemia emolitica immuno-mediata (gli anticorpi IgM, che sono multivalenti, hanno maggiori probabilità di formare agglutinati), tuttavia ci sono alcune cause non patologiche di agglutinazione. Le cause sono:

• Anemia emolitica immuno-mediata (IMHA): l’agglutinazione è sospettata a causa di anticorpi IgM multivalenti, o raramente IgA bivalenti. Gli anticorpi anti-RBC IgG di solito non causano agglutinazione.
• Pseudo-agglutinazione EDTA: EDTA può smascherare epitopi nascosti in RBC. Gli animali che hanno anticorpi naturali a questi epitopi possono legarsi al RBC causando agglutinazione. Questo può erroneamente portare a una diagnosi di IMHA, tuttavia gli animali affetti non sono di solito anemici (a differenza di IMHA). Questo è stato riportato in un gatto (Schaefer et al., 2009).
• Farmaci: L’eparina può indurre l’agglutinazione del cavallo RBC.

Formazione Rouleaux

Agglutinazione contro rouleaux

La formazione Rouleaux è un termine che descrive gruppi di globuli rossi che formano pile, come pile di monete. Questo è un risultato normale nel sangue di cavalli sani e in misura minore gatti, ma non è normalmente visto in cani o bovini (in salute o malattia). Si pensa che i globuli rossi del cavallo formino rouleaux perché hanno diminuito la carica negativa (potenziale zeta alterato) sui loro globuli rossi. Rouleaux può anche essere un marker della malattia di base, anche nel cavallo e nel gatto (la formazione di rouleaux può essere eccessiva, cioè maggiore del previsto, in queste specie). L’eccessiva formazione di rouleaux in qualsiasi specie indica iperglobulinemia. Si noti che una bassa albumina promuoverà la formazione di rouleaux (ma non la causerà). L’aumento di due tipi di globuline provoca la formazione di rouleaux:

• Fibrinogeno: Questa è una globulina β-2 e un reagente di fase acuta, cioè i valori aumentano con l’infiammazione. L’alto fibrinogeno è anche una caratteristica della malattia renale nel cavallo e nel gatto.
• Immunoglobuline: Queste proteine, che migrano nelle regioni β o γ di un elettroforetogramma, possono aumentare in condizioni reattive o neoplastiche
  • Reattivo: infiammazione o stimolazione antigenica. Si prevede una gammopatia policlonale.
  • Neoplastica: Neoplasie dei linfociti B o delle plasmacellule, ad es. Linfoma a cellule B, leucemia linfocitica cronica a cellule B, plasmocitoma extramidollare, tumore solitario delle plasmacellule ossee, mieloma multiplo. Una gammopatia monoclonale può essere osservata con queste neoplasie.

Agglutinazione contro formazione di rouleaux

Gli agglutinati possono talvolta essere distinti da rouleaux per il loro aspetto caratteristico sugli strisci di sangue (l’agglutinazione forma cluster tridimensionali, mentre rouleaux forma pile), tuttavia questo può essere difficile con rouleaux gravi. Analogamente, una prova di agglutinazione su vetrini non può distinguere in modo affidabile tra agglutinazione e grave formazione di rouleaux. Il modo migliore per distinguere tra questi due fenomeni (con conseguenze importanti per la diagnosi e la cura del paziente) è eseguire un test di diluizione salina, che è anche chiamato test di dispersione salina. Questo viene fatto posizionando una goccia di sangue a 4 gocce o fino a 10 gocce di soluzione salina isotonica (0,9% NaCl), cioè una diluizione 1:4 o 1:10 del sangue in soluzione salina) e quindi esaminando la diluizione come un supporto bagnato (simile a quello fatto per i sedimenti di urina, cioè posizionare una goccia della diluizione su un vetrino, aggiungere un coprioggetto e quindi esaminarlo con il diaframma dell’iride del microscopio chiuso o il condensatore del microscopio verso il basso per aumentare il contrasto). La diluizione salina disperderà i rouleaux ma non l’agglutinazione (a meno che l’agglutinazione non sia causata da anticorpi a bassa avidità, in particolare se la diluizione viene lasciata seduta troppo a lungo prima dell’esame o se i globuli rossi vengono lavati prima dell’esame).