In: Recent Advances in Small Animal Reproduction, P. W. Concannon, G. England and J. Verstegen (Eds.) Kiadó: International Veterinary Information Service (www.ivis.org), Ithaca, New York, USA.

Intra-uterus Insemination in the Dog Using the Scandinavian Trans-cervicalis katéter and a Comparison with other Methods ( 2-Feb-2001)

C. Linde-Forsberg

Állatorvosi Kar, Tanszék a Szülészet-nőgyógyászat, svéd University of Agricultural Sciences, Uppsala, Svédország

Bevezető

A kamat a kutya sperma megőrzése, valamint a mesterséges megtermékenyítés (AI) folyamatosan növekszik világszerte, mégis viszonylag kevés vizsgálat minden évben közzéteszik, e mezőn belül pedig különösen nehéz adatokat találni a mesterséges inseminations használata, friss sperma vagy sperma tartósított szerint a különböző módszerek hűtés, vagy fagyás, illetve olvadás, valamint az is, összehasonlítva az eredményeket, amikor különböző a megtermékenyítés végrehajtására szolgáló technikákat alkalmazzák. Az adatok szűkösségének egyik oka az, hogy drága a kutyákon végzett kísérleti tanulmányok elvégzése, és kevés Kutatóközpont képes elég nagy kutyatelepeket tartani az ilyen típusú vizsgálatokhoz. Egy másik ok az, hogy a kutyatenyésztők számára kutyaspermát feldolgozó és forgalmazó nagyvállalatok többsége tisztán kereskedelmi alapon dolgozik, és bár némelyikük úgy tűnik, hogy nyilvántartást vezet eredményeiről, sem ezeket az eredményeket, sem a hosszabbítók összetételét vagy a sperma megőrzésének módszereit nem teszik közzé. Az így megszerzett tudás tehát a különböző vállalatoknál marad, és nem lesz előnyös a tudományos világ számára, így általában sem a kutyatenyésztők számára. Az egyetlen tanulmány a kutya mesterséges megtermékenyítés jelentési termékenységi eredmények nagyszámú megtermékenyítés azok által Seager et al., 156, vaginális lerakódást alkalmazó, fagyasztott felolvasztott spermán AIS, Linde-Forsberg & Forsberg 470, illetve 527 AIs, friss, hűtött, kiterjesztett és fagyasztott felolvasztott sperma, valamint vaginális, valamint méhen belüli AI, Linde-Forsberg et al. a 327 fagyasztott-felolvasztott sperma AIs, összehasonlítva a hüvelyi belüli-méh-AI, Linde-Forsberg jelentés 2041 AIs friss, hűtött kiterjesztett, fagyasztott-felolvasztott sperma használata mind a hüvelyi belüli-méh-AI, valamint Thomassen et al., 312 fagyasztott-felolvasztott főleg méhen belüli AIs. Számos tényező fontos a kutyák mesterséges megtermékenyítésének sikerességi arányának meghatározásában, mint például a szuka ivarzási ciklusa alatt az AI végrehajtása, a sperma minősége és kezelése, valamint a megtermékenyítés technikája. További információ ezekről a szempontokról az idézett hivatkozásokban található. Ez a tanulmány csak a megtermékenyítési technikákkal és a sperma lerakódás helyének hatásával foglalkozik. A legújabb klinikai vizsgálatok rámutattak, hogy fontos a méhen belüli szemben intravaginális mesterséges megtermékenyítés a kutya, és az első, hogy bizonyítani szignifikánsan jobb eredményeket, ha Sperma rakódott a méhbe, nem pedig a hüvelyben. A Linde-Forsberg et al., a fagyott felolvasztott Sperma méhen belüli lerakódásával történő whelping aránya 84,4% volt az 58-hoz képest.9 % a hüvelyi lerakódás, de alom mérete volt 5.4 + 3.0 képest 4.0

+2.7 kölykök/alom (P<0.001). Termékenységi adatok 2041 mesterséges megtermékenyítés kutyák, végzett svéd szukák között 1990 és 1998 jelentett a Kennel Club belül 2 hét, (azaz. mielőtt a terhességi teszt lehetett volna tenni, hogy elkerüljék elfogultság az eredmények), azt mutatta, hogy szignifikánsan magasabb whelping aránya és alom mérete kaptunk nem csak a fagyasztott felolvasztott sperma, hanem a friss, valamint a hűtött, kiterjesztett Sperma, amikor a sperma már letétbe a méhben, nem pedig a hüvelyben (1.táblázat).

az 1.táblázatban bemutatott friss spermát használó eredmények kissé túl magasak, mivel ezeknek a szukáknak 11% – a különböző okokból nemcsak mesterségesen megtermékenyített, hanem párzott is volt. A leggyakoribb oka az volt, hogy a tenyésztők megpróbálta társ a szukák is korán párzás során, illetve amikor a kutyák nem haver, a tulajdonosok kérte az AI. A szintén párosított csoportban a bálnavadászat aránya 84,5% volt, az átlagos alomméret 6,0 + 2,8 kölyök volt, szemben a csak mesterségesen megtermékenyített szukák esetében mért 48,9% – os és az átlagos alomméret 5,8 + 2,8 kölyökkel. Ezért úgy tűnik, hogy a friss spermával végzett AIs-k száma valójában nem optimális időben történik az extrudálás során, általában a tenyésztő tapasztalatlansága miatt, de a viszonylag rossz eredmény valószínűleg annak is köszönhető, hogy az AI-t a kutyák különböző problémái miatt kérik. A svéd adatok azonban egyértelműen azt mutatják, hogy a kutyában az intra-uterin AI jelentősen javítja az alvadási sebességet és az alom méretét. Az intra-uterin AI-vel történő whelping arány a friss sperma esetében 36%-ról 50% – ra nőtt a fagyasztott felolvasztott Sperma esetében, szemben a hüvelyi AI-vel. Az intra-uterin AI – vel az átlagos alomméret 0,3 kölyökkutyával nőtt a fagyasztott felolvasztott Sperma esetében, valamint 0,6 és 0,7 / alom a friss és hűtött kiterjesztett Sperma esetében. Ebben az összefüggésben is érdekes megjegyezni, hogy a kutyát olyan fajnak tekintik, amelynek természetes párosodáskor a sperma méhen belüli lerakódása van, mert mire a kopulációs nyakkendő véget ér, a spermiumok elérték a petefészkeket . A sperma gazdag frakció élvezett a intromission, valamint a korai szakaszában a párzási szándék nyakkendő, majd követi a nagy mennyiségű prosztata folyadék, amely azonnal lehúzás az ondósejt a keskeny koponya vagina át a méhnyak a méh teste pedig szarvak. Úgy tűnik, hogy a hüvely kedvezőtlen környezetet kínál a kutya spermiumok számára, mivel a koponyahüvelyben való lerakódás után néhány percen belül nagy arányban lazítják a farkukat . Azt is kimutatták, hogy mintegy 10-szer annyi sperma szükséges ahhoz, hogy hasonló eredményeket hüvelyi AI, mint az intra-méh-AI, friss sperma , valamint fagyasztott-felolvasztott sperma . Így számos olyan tényező van, amely hozzájárul az intravaginális Sperma lerakódásával kapott gyengébb eredményekhez, mint a méhen belüli lerakódás.

módszerek a méhen belüli AI elvégzésére a kutyában.

az intra-uterus AI a kutyában transzkervikusan elvégezhető a skandináv (vagy Norvég) katéter segítségével, vagy merev fiberoptikus hüvelyi endoszkóp segítségével a méhnyak és a kutya vizelet katéterének keresztirányú megjelenítéséhez. A méhen belüli AI invazív módszerekkel, például laparoszkópiával vagy teljes hasi műtéttel is elvégezhető. Egyes országokban az utóbbi módszerek illegálisak lehetnek, vagy etikailag nem tekinthetők elfogadhatónak.

a méhnyak tapintása

feltétlenül szükséges, hogy az a személy, aki a kutya AI-t kívánja végrehajtani, megtanulja, hogyan kell a méhnyakot hasi tapintással megtalálni annak érdekében, hogy a spermát a megfelelő helyre helyezze, és elkerülje a szuka sérülését. A szukának üres gyomornak és hólyagnak kell lennie, hogy megkönnyítse az eljárást. Képzési célokra ajánlott az egyszer használatos műanyag kutya hüvelyi AI-katéterek használata (Minitüb GmbH, Tiefenbach, Németország) (ábra. 1).

1.ábra. A skandináv mesterséges megtermékenyítő katéter három mérete kutyáknak, valamint a műanyag egyszer használatos hüvelyi mesterséges megtermékenyítő katéter.

mivel a szuka ureterális nyílása a medence peremén helyezkedik el, meglepően könnyű az AI katéter vagy egy vékony merev endoszkóp véletlenül bejuttatni a húgyhólyagba. Eltekintve attól a veszélytől, hogy a húgyhólyagot a katéterrel perforálják, nyilvánvaló, hogy az AI után nem következik be terhesség. Így a katéter helyes helyzetét mindig tapintással kell ellenőrizni, mielőtt a sperma dózisát behelyezné. Ha a katéter a húgyhólyagban van, akkor a hüvely és a méhnyak koponya része a katéter felett tapintható. A húgyhólyag falai általában vékonyabbak, mint a hüvelyé, a katéter csúcsa jobban kiemelkedik, mint ha a hüvelyben lenne. A méhnyak tapintásához AI katétert vezetnek be a szuka hüvelyébe. A katéter bevezetését megkönnyíti, ha a vulva felemelkedik, amíg éppen az anus alatt van (mint amikor a szuka a férfi kutyát jelenti). Amikor a katéter csúcsát a kismedencei karimához azonnal be kell vezetni, meg kell tapintani. A hüvely a legtöbb szukában kissé lefelé hajlik. Egyes fajtákban azonban, különösen a nagyon ívelt karajos kutyák látványában, a hüvelynek hátsó iránya van. A katéter koponyavégét most közelebb kell engedni a hasfalhoz, hogy hozzáférhetőbbé váljon a tapintáshoz. Amikor a katéter csúcsa tapintható, így ellenőrizve a hüvelyben lévő helyes helyzetét, gondosan be kell vezetni, folyamatos palpatory kontroll alatt, amíg el nem éri a paracervikális területet. Ez a keskeny, koponya része a hüvely által létrehozott háti, medián utáni nyaki fold és tapintható, mint egy 1-2 cm hosszú, szilárd szerkezet. A méhnyakon végződik, amely az ösztrusban lévő szukában 0,5-1,5 cm kemény, lekerekített, ovális, szabadon mozgatható szerkezet. Általában nem lehet a 10 mm átmérőjű skandináv katéter külső védőburkolatát a paracervikális területre átadni. A vékonyabb műanyag AI katéter, amelynek átmérője 5 mm, túl széles lehet ahhoz, hogy egyes szukák, különösen a kisebb fajták paracervikális területére kerüljön, vagy azok, amelyek nem szültek kölyökkutyát. A méhnyak azonosítása után a corpus uteri és a méh szarvak tapinthatók e szerkezet előtt. Engedje le a katéter hegyét, majd zárja le a hüvelykujj hegyét a mutatóujjával szemben a katéter felett, majd emelje fel a katéter koponyavégét oly módon, hogy a méhnyak és a méh szarvait felfelé húzzák az ujjak között. Méretük és következetességük ezután nyilvánvalóvá válik. (Ez a módszer a tapintás a méh is nagyon hasznos a terhesség korai felismerése, valamint, hogy vizsgálja szukák feltételezett pyometra).

méhen belüli megtermékenyítés a skandináv katéter segítségével

a skandináv katéter 1-2 mm széles acél katéterből áll, 0-val.75 mm-1 mm átmérőjű csúcs, három különböző hosszúságban érkezik: 20, 30 vagy 40 cm. Ezt együtt használják egy 10 mm átmérőjű külső védő nylon köpeny (ábra. 1 és Fig. 2). A közepes méretű katéter illeszkedik a legtöbb kis-és közepes méretű szuka. A felszerelés a norvég szőrme tenyésztők Szövetségétől, a P. O. Box 136, Økern, N-0509 Oslo 5, Norvégia.

2.ábra. A skandináv AI katéter két méretű csúcsának közelítése kutyák számára.

az intra-uterin AI-t a skandináv katéterrel a padlón vagy az asztalon álló szukával végezzük. A szedációra nagyon ritkán van szükség, éppen ellenkezőleg, a legtöbb szuka az estrusban szabadon elfogadja az ilyen típusú kezelést. Abban az esetben, ha könnyű szedációra van szükség, például egy nagyon nagy, elhízott vagy ideges szuka esetén, 1 – 3 mg/kg xilazin IM vagy IV alkalmazható. A belső acél katétert, amelynek csúcsát a nejlon hüvely védi, a hüvelybe vezetik. A nylon köpeny koponyavégét a medence szélén tapintják, amint azt korábban leírtuk. Ha a katéterhüvely csúcsát a hasfalhoz közelebb leeresztették, akkor a méhnyak általában néhány cm-rel előtte vagy felett található. Ezután az acél katétert a hüvelyen keresztül vezetik be, amíg a csúcsa el nem éri a ventrális fornixot. A méhnyak a hüvelykujj és a mutatóujj között van rögzítve, és a corpus uteri kissé lefelé irányuló húzásával úgy dönt, hogy a nyaki csatorna szöge vízszintesebbé válik (ábra. 3).

3.ábra. Egy vázlatos rajz a kutya paracervicalis régió és a nyaki csatorna, a skandináv katéter helyzetben a koponya hüvely. A méhnyak és a corpus uteri manipulálásával a méhnyak szöge megváltozik, hogy a nyaki csatorna jobban illeszkedjen a katéter csúcsához, hogy megkönnyítse a katéterezést.

a katéter csúcsát ezután óvatosan visszavonják, miközben ismételten a méhnyak felszínére nyomják a nyaki csatorna megnyitását keresve. Az érzés, amikor ez a nyílás megtalálható, a legtöbb esetben a porc megérintésének érzése, azaz “ropogós”. Miután megtalálta a nyílást, rögzítse a katétert, és kezdje el a méhnyak működését a katéter ellen. A nyaki csatorna 5-10 mm hosszú, nem mindig teljesen egyenes. Így enyhe nyomást kell alkalmazni, miközben a katétert forgatja,hogy megkönnyítse. A legtöbb szukában a katéter csúcsa könnyen érezhető a méhnyak előtt a corpus uteri-ben. Egyes szukáknál azonban az érzés nem olyan különálló. A spermát tartalmazó fecskendő a katéterhez csatlakozik, a sperma pedig lassan a méhbe kerül. Néha ellenáll az infúziónak attól függően, hogy a katéter megnyitása az endometrium nyálkahártyájára nyomódik-e. A corpus uteri vagy a méhnyak enyhe lefelé irányuló tapadása általában enyhíti a helyzetet, és lehetővé teszi a sperma infúzióját. Annak ellenőrzésére,hogy a katéter valóban a szuka méhében van-e, 1-2 ml fiziológiás sóoldatot lehet beadni. Ha a katéter a méh testében megfelelő helyzetben van, a folyadék könnyen beadható. Ha viszont a katéter a paracervikális régióban van, akkor a katéter és a nylon köpeny között szinte azonnal visszaáramlik a sóoldat. A katétert eltávolítják, és a szuka hátsó negyedei megemelkednek, a szuka pedig az AI után 5-10 percig ebben a helyzetben marad, hogy minimalizálja a sperma visszaáramlását, valamint megkönnyítse a spermiumok méhszállítását a petefészkek felé . A szukának a perineális régió körül is tollasnak kell lennie, mivel úgy gondolják, hogy ez stimulálja a méhösszehúzódásokat. Ennek a technikának a megtanulásához bizonyos gyakorlatra van szükség, de miután megtanulta, ez egy gyors módszer, amelyet általában perceken belül el kell végezni. Ajánlott kezdetben szervmintákat szerezni képzési célokra és anatómiai vizsgálatokra. Előnye az is, ha különösen az első kísérleteket olyan szukákban hajtják végre, amelyek egy vagy több almot szültek, mivel általában sokkal könnyebben katéterezhetők. Perforációk fordulhatnak elő, ha a katétert vakon vagy erővel vezetik be. Feltéve, hogy a katéterezést gondos palpatorikus kontroll alatt végezzük, azonban a technika teljesen biztonságos a szuka számára. Egyes szukákat nehezebb katéterezni, különösen azokat, amelyek néhány óriás fajtához tartoznak, valamint elhízott vagy ideges állatokat. A skandináv katéter használata csak a méhen belüli katéterezés kísérleteinek 2-3, 5%-a volt sikertelen . A fagyasztott felolvasztott spermával történő kiolvasztási arányt 84-nek jelentették.5% , illetve 71% – át, amikor által végzett képzett inseminators, átlagosan 65% – os, friss, hűtött sperma 52% – fagyasztott-felolvasztott sperma, egy nagyobb területen vizsgálatban is kevésbé tapasztalt inseminators (Fig. 1). Ezt a technikát a kontrasztanyag intra-uterus infúziójára is fel lehet használni a szuka hisztográfiás vizsgálatához .

méhen belüli megtermékenyítés a méhnyak endoszkópos vizualizációjával

A transzkervikális intra-uterus megtermékenyítés merev fiberoptikus endoszkóppal és vizelet-vagy angiográfiai katéterrel is elvégezhető az álló szukán, szedáció nélkül (ábra). 4 és Fig. 5).

méhen belüli megtermékenyítés laparoszkópiával

a hasi laparoszkópiának valamivel elfogadhatóbb alternatívát kell kínálnia az AI teljes műtétére a kutyában. A technikát Wildt és Silva et al. . Az AI laparoszkópiával 60-73% – os terhességi arányt jelentett, de ezekben a vizsgálatokban a szukák száma kevés volt.

Belüli Méh Megtermékenyítés segítségével Műtét

a Műtét elvégzésére belüli méh megtermékenyítés számoltak be . Különböző sebészeti eljárásokat alkalmaztak, a szuka általános érzéstelenítés alatt, valamint a hátsó fekvő helyzetben. A ventrális hasat levágják, a rutin műtéti előkészítés után 4-6 cm-es bemetszést végeznek a pubis és a köldök között, a linea alba-n keresztül. A méh a bemetszésen keresztül emelkedik, a spermát tartalmazó fecskendő tűjét pedig a méh testének lumenébe helyezzük 45o-os szögben, a tű kúpjával felfelé. A spermát lassan injektálják a méhbe. A méh szarvak nyilvánvaló eltolódásával könnyen áramlik, különben a tűt újra kell helyezni. A tű visszavonása után sóoldattal nedvesített gézt tartanak az injekció beadásának helyén. 1 perc elteltével a géz eltávolításra kerül, a méh a hasba kerül, a seb pedig rutin módszerrel zárva van. A sperma visszaáramlásának elkerülése érdekében a szukát hátsó emelkedésével kell elhelyezni, amikor az érzéstelenítésből felépül . Körülbelül 60% – os terhességi arányt jelentettek a kutya műtéti AI-je után, de mint a laparoszkópos AI-eredmények korlátozott kísérleti vizsgálatokon alapulnak, és egyik módszerrel sem állnak rendelkezésre terepi adatok értékelésre. Vitatható, hogy etikailag elfogadható-e a műtét alkalmazása a terhesség elérése érdekében. A módszert, bár egyesek támogatják, sokan etikátlannak és elfogadhatatlanul stresszesnek tartják a szuka számára. A fertőzés kockázata stb. kapcsolódó műtét általában, valamint a korlátozott számú sebészeti AI, hogy lehet végezni egy adott szuka két nyilvánvaló hátránya. A módszer költséges és időigényes is.

1. Seager SWJ, Platz CC, Fletcher WS. Fogamzási arányok és kapcsolódó adatok fagyasztott kutya spermával. Jorge Fertil 1975;45: 189-192.

2. Linde-Forsberg C, Forsberg M. termékenység kutyáknál a sperma minőségével, valamint a megtermékenyítés idejével és helyszínével kapcsolatban. Jrod Fertil 1989;39 (Suppl): 299-310. – PubMed –

3. Linde-Forsberg C, Forsberg M. 527 ellenőrzött mesterséges megtermékenyítés eredménye kutyákban. Jorge Fertil 1993;47 (Suppl): 313-323. – PubMed –

4. Linde-Forsberg C, Ström Holst B, Govette G. a fagyasztott felolvasztott kutya spermájának hüvelyi vs intrauterin megtermékenyítéséből származó termékenységi adatok összehasonlítása: retrospektív tanulmány. Teriogenológia 1999; 52: 11-23. – PubMed –

5. Linde-Forsberg C. fertilitási adatok 2041-ből kontrollált mesterséges megtermékenyítés kutyákban. In: Proceeding of the 4th Int Symp Canine Feline Reprod, Oslo, 2000, 120 p. (abstr.)

6. Thomassen R, Farstad W, Krogenaes, A, Fougner, J. A. és Andersen Berg K. Mesterséges megtermékenyítés fagyasztott spermával a kutyában. Retrospektív tanulmány. Jorge Fertil 2001, a sajtóban.

7. Tsutsui T, Kawakami E, Murao I, et al. Spermiumok szállítása a szuka reproduktív traktusában: megfigyelések a méh fisztulákon keresztül. Jpn J Vet Sci 1989; 51: 560-565. – PubMed –

8. Linde-Forsberg C. mesterséges megtermékenyítés friss, hűtött és fagyasztott felolvasztott spermával a kutyában. Szemináriumok Vet Med Surg (kis állat) 1995;10: 48-58.

9. Tsutsui T, Tezuka T, Shimizu T, Murao I, Kawakami E, Ogasa A. Mesterséges megtermékenyítés friss spermával Beagle szukákban. Jpn J Vet Sci 1988; 50: 193-198.

10. Andersen K. megtermékenyítés fagyasztott kutya spermával egy új megtermékenyítési technika alapján. Zuchthyg 1975;10: 1-4.

11. Linde C. radiopátiás folyadék szállítása a méhbe a hüvely lerakódása után az oestrous szukában. Acta vet scand 1978;19: 463-465.

12. Funkquist B, Lagerstedt A-S,Linde C, Obel N. Vettel 1985;26:12-18.

13. Wilson M. nem sebészeti intrauterin mesterséges megtermékenyítés szukákban fagyasztott spermát használva. Jorge Fertil 1993; 47 (Suppl): 307-311. – PubMed –

14. Battista M, Parks J, Concannon PW. Kutya Sperma felolvasztás utáni túlélés után fagyasztás szalmában vagy pellet segítségével csövek, laktóz,tris vagy teszt extenders. In: Proceedings of the 11th Int Congr Anim Reprod and AI, Dublin 1988;3: 229-231.

15. Wildt DE. Laparoszkópia. In: Burke TJ, ed. Kis állati szaporodás és meddőség. Philadelphia: Lea & Febiger, 1986;121-140.

16. Silva LDM, Onclin K, pattan F, Verstegen JP. Laparoszkópos intrauterin megtermékenyítés a szukában. Theriogenológia 1995;43: 615-623.

17. Silva LDM, Verstegen JP. Összehasonlítások a kutya intrauterin megtermékenyítésének három különböző kiterjesztője között fagyasztott felolvasztott spermiumokkal. Theriogenológia 1995;44: 571-579.

18. Silva, Onclin K, Lejeune B, Verstegen JP. A szukák intravaginális és intrauterin megtermékenyítésének összehasonlítása friss vagy fagyasztott spermával. Vettel Rec 1996;138: 154-157. – PubMed –

19. Smith FO, Graham EF: a kutya spermájának krioprezervációja: technika és teljesítmény. In: Proceedings of the Xth Int Congr Anim Reprod and AI, Champaign-Urbana 1984;2: 216.

20. Hutchison RV. Vaginális & a sperma műtéti intra-uterus lerakódása. In: Proceedings of the Canine Theriogenology Short Course 1993; 33-37.

21. Hutchison RV. A koncepció arányának maximalizálása friss hűtött vagy fagyasztott kutya spermával. In: Proceedings of the Canine Male Reprod Symp 1997; 61-70.