| mag vs resolution | working distance | monocular parts | care of the microscopes |
| monocular focusing | oil immersion | measuring field diameter | binocular parts | binocular focusing | PDF version| Microscopy Exercises |

A. Bevezetés

a tipikus összetett fénymikroszkóp (ábra.1) képes 1000-szeresére növelni a részletek látásának képességét, hogy 0,1 mikrométer (um) vagy 100 nanométer (nm) méretű tárgyak láthatók legyenek. Az elektronmikroszkópok tovább növelik ezt a tartományt,lehetővé téve számunkra, hogy olyan tárgyakat látjunk, amelyek átmérője 0, 5 nm, vagy nagyjából 1 / 200 000 th, mint a szabad szemmel látható méret. Mondanom sem kell, hogy a mikroszkópok kifejlesztése és használata jelentősen javította a sejtek megértését, szerkezetét és funkcióját.

1.ábra. Binokuláris összetett mikroszkóp.

b Pusztán egy objektum nagyítása a látott részletek mennyiségének egyidejű növekedése nélkül nem nyújt jó képet a nézőnek. A mikroszkóp (vagy a szem) képessége a részletek megismerésére a felbontóképesség függvénye. A felbontóképességet úgy definiáljuk, mint a két objektum közötti minimális távolságot, amelynél az objektumokat csak külön lehet megkülönböztetni, és az alkalmazott fény hullámhosszának és az optika minőségének függvénye. Általában minél rövidebb a fényforrás hullámhossza, annál nagyobb a mikroszkóp felbontása.

a munkatávolság az objektív és a minta közötti távolság. Alacsony nagyítás esetén a munkatávolság viszonylag hosszú. Ahogy növeli a nagyítás a munkatávolság drámaian csökken. Az olajmerülő lencsék nyugalmasan érintik a mintát. Legyen tudatában a munkatávolság változásának a növekvő nagyítással, hogy megakadályozza a példányok károsodását.

az oldal teteje

C. A monokuláris összetett fénymikroszkóp részei:

kérjük, szánjon időt arra, hogy megismerkedjen a mikroszkóppal és annak megfelelő használatával. A kurzusainkban használt két mikroszkóp vezérlését az alábbiakban mutatjuk be (ábra. 2).

2.ábra. A Leica és az Olympus binokuláris összetett mikroszkópok ellenőrzése.

1. Szemlencse vagy szemlencse: a miénk 10x nagyítás. Az általunk használt távcsövek monokuláris (csak egy szemlencse.)

2. Testcső: tükröket és prizmákat tartalmaz, amelyek a képet a szemlencsére irányítják.

3. Nosepiece: tartja az objektív lencséket, forog, vegye figyelembe az egyes lencsék pozitív leállítását.

4. Objektív lencsék: általában 3-4 a hatókörünkön, 4x, 10x, 43x, 100x olajmerítés (piros sávozás). Teljes nagyítás = szem teljesítmény x objektív teljesítmény.

5. Színpad: olyan platform, amelyen a diák megtekintésre vannak felszerelve; egyes hatókörök mechanikus szakaszokkal rendelkeznek. Ismerje meg, hogyan kell megfelelően rögzíteni a diát.

6. Diafragma: a membrán szabályozza a fény mennyiségét, amely áthalad a mintán, és drasztikusan befolyásolhatja a kép fókuszát. TANULJA MEG A MEMBRÁNT A LEHETŐ LEGGYORSABBAN HASZNÁLNI. A LEGTÖBB PROBLÉMA, AMELYRE FÓKUSZÁLNI FOG, A FÉNY HELYTELEN BEÁLLÍTÁSA MIATT KÖVETKEZIK BE.

két típusunk van:

• iris membrán: keressen egy kart közvetlenül a színpad alatt az elülső rész közelében.
• tárcsatípus: közvetlenül a színpad alatt van egy forgó tárcsa, amelynek különböző méretű nyílások( lyukak); ez a típus hasznos pszeudo sötét mező effektus létrehozásához.

7. Fókuszáló gombok: a mikroszkóp oldalán helyezkedik el; a legkülső a finom fókusz, a legbelső pedig a durva fókusz.
8. Fényforrás: a hatókörök beépített fényforrások. A nyomógomb-kapcsoló (leggyakrabban) a fénylencse mögött található az alapon.

az oldal teteje

D. Az összetett Mikroszkóp gondozása és kezelése

csak néhány abszolút szabályt kell betartani az Ön által használt mikroszkópok gondozásában. Gondoskodva arról, hogy ezek az eszközök sok évtizedig tartsanak, és továbbra is jól működjenek. Kérjük, azonnal jelezze a hibákat az oktatónak.

1. Mindig két kézzel vigye a hatókört-egyet a karon, egyet az alap alatt-nincs kivétel! Soha ne vigye fejjel lefelé a hatókört, mert a szemkonzerv kiesik.

2. A lencsepapír segítségével tisztítsa meg az összes lencsét minden laboratóriumi ülés előtt, majd az olajmerülő lencse használata után. SOHA, NE MOST, SOHA, NE HASZNÁLJON SEMMIT, CSAK LENCSEPAPÍRT A LENCSÉK TISZTÍTÁSÁHOZ. Más papírok túl tisztátalanok, és megkarcolják a lencsék optikai bevonatát. Ne használjon folyadékot a lencsék tisztításakor-csak LENCSEPAPÍRRAL!

3. Mindig használja a megfelelő fókuszálási technikát, hogy elkerülje a tárgylencse csúszdába ütközését – ez megtörheti az objektív lencsét és / vagy tönkreteheti a drága diát.

4. Mindig kapcsolja ki a fényt, ha nem használja a hatókört.

5. Mindig óvatosan helyezze el a vezetéket a kár útjából. A lábtérbe hurkolt vezetékek nagy mikroszkóp katasztrófát idéznek elő. Próbálja csúszó a vezetéket le a fiók fogantyúk bside a pad helyet.

6. Mindig cserélje ki a fedelet a mikroszkópra, amikor elteszi

az oldal teteje

E. fókuszálási eljárás: monokuláris összetett mikroszkópok

1. Kapcsolja be a fényforrást.

2. Váltson a 10x objektívlencsére.

3. Vissza a durva fókusz, hogy emelje fel az orr darab.

4. Helyezze a mintadarabot a színpadra, majd rögzítse a megfelelő helyzetbe. Nézze meg a csúszdát, és helyezze el úgy, hogy a minta a színpad fénynyílása felett legyen.

5. Alsó objektív alsó határig (közel a csúszáshoz). Emelje fel a lencsét a durva fókusz gomb segítségével, amíg meg nem látja, hogy a kép fókuszba kerül, majd menjen ki újra, majd fókuszáljon vissza, amíg meg nem találja a középpontot. Állítsa be a finom fókuszt hasonlóan.

6. Állítsa be a képet a rekeszizom segítségével.

7. Helyezze vissza és állítsa be a fókuszt, először durva, majd finom fókuszt, mint az 5. lépésben.

8. Szükség szerint állítsa be a membránt.

9. Most váltson célkitűzéseket az 43x-ra, ha nagyobb nagyításra van szükség. Szükség szerint állítsa be a finom fókuszt és a fényt (diafragma).

a hatókörünk parfokális, ami azt jelenti, hogy ha alacsony (100x) teljesítményről magas (430x) teljesítményre váltunk, az alacsony teljesítményű fókuszált kép többé-kevésbé fókuszban marad a nagyobb teljesítménynél. A legvalószínűbb, hogy a finom fókuszt és a rekeszizmot kissé vissza kell állítani.

az oldal teteje

F. Olajmerülő eljárás

néhány monokuláris, valamint az összes binokuláris összetett mikroszkópon 100x olajmerülő lencsénk van. Ezeket a lencse ház körül piros sávval lehet azonosítani. Az 500X-nál nagyobb nagyításoknál a fény túlságosan megtörik, mivel áthalad a levegőn, hogy jó felbontóképességet biztosítson. Így ezeknek a nagyobb nagyításoknak az optikáját kiváló minőségű ásványi olajjal használják fényáteresztő közegként. Fontos, hogy csak merülő olajat használjon, és minden használat után alaposan tisztítsa meg a lencsét lencsepapírral.

1. Keresse meg az érdeklődő régiót a dián, majd állítsa 430x-re.

2. Emelje fel az objektív lencsét a határára (azaz, maximalizálja a távolságot a színpad és a célok), és swing a lencse az útból körülbelül félúton a következő pozícióba.

3. Óvatosan helyezzen egy kis csepp merülő olajat közvetlenül a csúszdára az érdeklődési terület közepén.

4. Forgassa az olaj bemerítésének célját a helyzetbe, és óvatosan, miközben oldalról néz, engedje le a durva fókuszgombbal, amíg a lencse csak nem érintkezik az olajcseppel. Látni fogja, hogy a csepp ugrik fel egy oszlopba, amikor a kapcsolat megtörténik.

5. Engedje le a lencsét egy smidgen tovább, majd a finom fókusz segítségével a szemlencsén keresztül nézzen a mintára.

6. Ha kész, tisztítsa meg a lencsét lencsepapírral, amíg nem jön ki több olaj, majd tisztítsa meg a csúszkát, ha meg akarja menteni.

az oldal teteje

G. a látómező átmérőjének meghatározása

lehet, hogy meg szeretné becsülni a minták méretét (pl. cellák), amelyeket a laborban lát. Ennek legjobb módja egy szem mikrométer, egy precíziós szemlencse betét, amelynek vonalzója üvegbe van gravírozva. A bevezető kurzusokon használt monokuláris hatókörök nem annyira felszereltek, ezért egy alternatív módszert fogunk használni, amely az adott mikroszkóp látómezőjének átmérőjén alapul. Ehhez meg kell határoznia:

• az alacsony nagyítási látómező hozzávetőleges átmérőjét az adott mikroszkóphoz.
• az összes többi objektív nagyítása.

ismerve ezt minden objektívlencse esetében, összehasonlíthatja a minta méretét az ismert mezőátmérővel, és megfelelő méretű esimátumot készíthet. Ez a technika minden mikroszkóp számára működik.

1. Szerezz be egy csúszásméretet, és helyezd a hatókörödre. Egy átlátszó metrikus vonalzó is működni fog.

2. Hozd fókuszba a 10x objektív (100x összesen). A skála rudak 1 mm-es lépésekben vannak, az alábbi ábrán látható módon. Így egy fekete sáv = 0,5 mm, mint egy hely.

3. Mozgassa úgy a diát, hogy egy külső fekete sáv széle csak érintsen a megvilágított mezőhöz (lásd a fenti “a” pontot).

4. A széltől kezdve becsülje meg, hogy hány sáv és szóköz kell ahhoz, hogy átlépje a látómezőt. Valószínűleg meg kell becsülnie egy szóköz vagy sáv utolsó töredékét. A legtöbb Mikroszkóp esetében körülbelül 1,8 -2,0 mm széles. Ezt minden olyan mikroszkópon ellenőriznie kell, amely nem rendelkezik szem mikrométerrel.

5. Jegyezze fel a hatókör azonosító számát és a mező átmérőjét 100x-en a laboratóriumi jegyzetfüzetben a jövőbeli referencia érdekében.

6. Ezután számítsa ki a mező szélességét 430x teljes nagyítással a következő képlet segítségével (a 100x mag-ot “alacsony teljesítménynek”, a 430x-et “nagy teljesítménynek”nevezzük):

(energiatakarékos mag/ high power mag) x alacsony energia mező átmérő (mm-ben)

tegyük fel például, hogy meghatározzák, hogy a 100x mező átmérője 1,8 mm, a 430x, a mező átmérőjű lenne:

(100 / 430) x 1,8 mm = 0.418 mm = 418 um (mikrométer)

Megjegyezzük, hogy a mező átmérőjű, magas teljesítmény arányos az arány az alacsony magas energia célkitűzéseket. Vagyis a nagyítás növelésével a tényleges látómező arányosan kisebb lesz.

az oldal teteje

H. binokuláris összetett fénymikroszkóp
a fénymikroszkóp részei

1. Szemlencse vagy szemlencse: a miénk 10x nagyítás. Az általunk használt távcsövek binokuláris (két szemlencse).

2. Testcső: tükröket és prizmákat tartalmaz, amelyek a képet a szemlencsékre irányítják.

3. Nosepiece: tartja az objektív lencséket, forog

4. Objektív lencsék: általában 3-4 a hatókörünkön, 4x, 10x, 43x, 100x olajmerítés (piros sávozás). Teljes nagyítás = szem teljesítmény x objektív teljesítmény. A binoc-ok többsége rögzített helyzetben lévő lencsével rendelkezik-a színpad felfelé és lefelé mozog, majd a lencse.

5. Színpad: mozgatható platform, amelyen a diákat megtekintésre szerelik fel; minden hatókörünk mechanikus szakaszokkal rendelkezik X, Y vernier mérlegekkel. A fókuszgombok felfelé és lefelé mozgatják a színpadot.

6. Kondenzátor: egy alállomás lencséje, amely a fényt a mintára fókuszálja. A binoc-oknak kondenzátorai vannak, amelyek felfelé és lefelé mozognak, hogy a fénysugarat fókuszálják.

7. Iris Membrán: a rekeszizom közvetlenül a színpad alatt helyezkedik el, és szabályozza a fény mennyiségét, amely áthalad a mintán, és drasztikusan befolyásolhatja a kép fókuszát.

8. Fókuszáló gombok: a legkülső a finom fókusz, a legbelső pedig a durva fókusz. A binocson ezek a gombok szabályozzák a színpad fel-le mozgását.

9. Fényforrás: a hatókörök beépített fényforrások. A reosztát be / ki kapcsolója a hatókörön vagy a külső tápegységen található, és a fény intenzitásának szabályozására szolgál.

az oldal teteje

I. fókuszálási eljárás: Binokuláris összetett mikroszkópok

1. Kapcsolja be a fényforrást. A Binoc távcsövek beépített egységgel vagy külső tápegységgel rendelkeznek.

2. Váltson a 10x objektívlencsére.

3. Állítsa be a durva fókuszt az orrdarab felemeléséhez (vagy csökkentse a színpadot).

4. Rögzítse a mintát a színpadon a megfelelő helyzetben.

5. Nézd meg a szemüveg lencséit. Az egyik lencse rögzített, a másik fókuszáló gyűrűvel rendelkezik (mint egy távcső). Hozza a lencsét a lehető legközelebb a csúszdához, majd csak a rögzített szemlencsén keresztül nézzen vissza, amíg a minta csak fókuszba nem kerül. Állítsa be a finom fókuszt hasonlóan a rögzített lencséhez.

6. Most, csak az állítható szemen keresztül nézve, állítsa be a fókuszt a lencse körüli fókuszgyűrűvel. Nézze meg mindkét szemét (állítsa be az interpupilláris távolságot, hogy egyetlen kerek megvilágított mezőt láthasson), és végezzen kisebb módosításokat a fókuszáláshoz.

7. Állítsa be a képet, majd állítsa be a fényt a kondenzor lencsével, az írisz membránnal és a fényforrás reosztáttal.

8. Helyezze vissza és állítsa be a fókuszt, először durva, majd finom fókuszt, mint az 5-ben.

9. Szükség szerint állítsa be a membránt.

10.Most váltson célkitűzéseket egy nagyobb teljesítményre. Szükség szerint állítsa be a finom fókuszt és a fényt (diafragma).

a hatókörünk parfokális, ami azt jelenti, hogy ha alacsonyról nagy teljesítményre váltunk, az alacsony teljesítményű fókuszált kép többé-kevésbé fókuszban marad a nagyobb teljesítménynél. A legvalószínűbb, hogy a finom fókuszt és a diafragmát kissé vissza kell állítania (nagyobb teljesítménynél növelje a fényt.

Modified 11-6-15 gja

Department of Biology, Bates College, Lewiston, ME 04240