Qu’est-ce qu’un anticorps polyclonal?
Comment faire anticorps polyclonaux
Un anticorps polyclonal est une collection de manyimmunoglobulins, chaque généré à partir d’un autre B-clone de cellules. Ces anticorps ciblent différents épitopes, ou sites de liaison, sur un seul antigène. La dérivation de plusieurs clones de cellules B et le ciblage ultérieur de plusieurs épitopes sont ce qui différencie les anticorps polyclonaux des anticorps monoclonaux.
Comment fabriquer des anticorps polyclonaux
Toute génération d’anticorps, polyclonale ou monoclonale, commence par provoquer une réponse immunitaire, appelée immunisation. Les cibles visées sont injectées dans l’hôte, reconnues par le système immunitaire comme étrangères, et ciblées par des anticorps de blocage ou de clairance immunitaire. L’échec de la mise en place d’une réponse immunitaire nécessiterait l’utilisation d’adjuvants, des substances immunogènes telles que l’adjuvant de Freund ou l’hémocyanine de la limpette en trou de serrure (KLH), pour stimuler davantage le recrutement immunitaire. La vaccination comprend la majorité de ce qui est nécessaire pour fabriquer des anticorps polyclonaux. Une réponse immunitaire typique est décrite ci-dessous.
La Fabrication d’Anticorps Commence Par l’Immunisation
Exposition initiale pour une Réponse immunitaire de Premier ordre
Exposition initiale de l’hôte à l’antigène avec des adjuvants appropriés, l’exposition est appelée Immunisation de premier ordre. Les méthodes d’exposition typiques comprennent l’injection dans la peau, le péritoine, la couche sous-cutanée ou le muscle. Les alternatives moins courantes sont l’administration orale et intranasale.L’immunisation par ADN est également une technologie émergente pour les antigènes toxiques ou autrement difficiles à produire. Toute exposition ultérieure à l’antigène est appelée immunisation « coup de pouce ».
Traitement de l’antigène par les Cellules présentatrices d’Antigène
Les macrophages, les Cellules Dendritiques (DC) et, dans une moindre mesure, les cellules B, toutes les cellules présentatrices d’antigène (APC), internalisent l’antigène par endocytose ou phagocytose. Le traitement de l’antigène brise l’antigène en petits morceaux qui sont ensuite déplacés à la surface de l’APC.
La stimulation des lymphocytes B
La reconnaissance de l’antigène présenté à la surface des APC induit la libération de molécules de signalisation stimulantes, les cytokines, à partir des lymphocytes T auxiliaires. Ces cytokines activent les cellules B qui ont également reconnu l’antigène grâce à leur récepteur de cellules B (BCR). Certaines lymphocytes B ne nécessitent pas d’activation des lymphocytes T auxiliaires après une interaction BCR-antigène, produisant généralement une réponse immunitaire plus rapide avec des anticorps d’affinité plus faible. L’implication des lymphocytes T auxiliaires est essentielle à une réponse immunitaire complète ainsi qu’à la régulation de l’auto-tolérance.
Prolifération des lymphocytes B et Sécrétion d’anticorps
Les lymphocytes B activés se divisent pour créer à la fois des populations de lymphocytes B mémoire et de plasmocytes. Les deux types de cellules reconnaissent le même épitope. Les plasmocytes sécrètent des anticorps dans le sérum pour la reconnaissance immunitaire tandis que les cellules B de la mémoire persistent plus longtemps, fournissant une réponse rapide à l’exposition secondaire du même antigène.
Mesurer la réponse immunitaire
Mesurer les taux d’anticorps au cours du processus d’immunisation est nécessaire pour évaluer les progrès. AnELISA contre l’antigène cible compare des échantillons de sérum immunisés à des échantillons de sérum pré-immunisés révélant le degré de réponse immunitaire entraîné par la vaccination. Des dilutions en série d’échantillons déterminent le titre de l’anticorps. Typiquement un 1:64 000 titres sont considérés comme une réponse immunitaire robuste et suffisante pour procéder à la récolte du sérum ou à la fusion des lymphocytes. Des titres plus faibles peuvent nécessiter des immunisations boost ultérieures, d’autres voies d’administration ou des adjuvants supplémentaires.
Récolte sérique d’anticorps polyclonaux
La production d’anticorps polyclonaux nécessite simplement la récupération du sang de l’animal hôte et la séparation de la fraction cellulaire de la fraction sérique contenant les anticorps sécrétés. Comme de nombreux anticorps spécifiques à l’antigène sont sécrétés par de multiples cellules B activées, le sérum sanguin contient les nombreux produits de différents clones d’anticorps, d’où le terme d’anticorps polyclonal. Plus précisément, la création de plusieurs anticorps clonaux contre un antigène est obtenue à la fois par le traitement de l’antigène en fragments ainsi que par chaque fragment ayant des régions plus petites, appelées épitopes. Chacun peut être reconnu par des BCR spécifiques. Des populations distinctes de lymphocytes B sécrètent des anticorps spécifiques mais différents contre le même antigène. De plus, le sérum contient non seulement des anticorps dirigés contre l’antigène cible visé, mais toutes les autres immunoglobulines contre d’autres cibles, médicaments, hormones, etc. qui sont dans le sérum. Le sérum peut être utilisé directement comme sonde de biologie moléculaire, mais nécessite souvent une purification supplémentaire pour augmenter la sensibilité et la spécificité d’un dosage particulier. La purification par affinité permet de récupérer les anticorps à des degrés divers selon la technique indiquée ci-dessous, mais aucune n’atteint la spécificité au niveau de l’épitope d’un anticorps monoclonal.
| Affinity Purification Technique | Pro | Con |
|---|---|---|
| Protein A/G | Simple, Cost effective | Recovers all immunoglobulin. |
| Antigen Specific | Recovers only antigen specific antibody. | Nécessite une quantité non triviale d’antigène. |
Polyclonal Antibody Applications
| Application | Polyclonal AntibodyUse Rationale |
|---|---|
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ELISA Detection Antibody
(direct, indirect, sandwich, and capture ELISA formats) |
Binds multiple epitopes to deliver many detection molecules.
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ELISA Capture Antibody
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Polyreactivity can maximally recover antigen from samples.
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Western Blot
Detection Antibody |
Multiple epitope recognition can allow for antigen changes (denaturing/linearizing).
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Target recognized by many Ab for maximal drug delivery, immune recruitment, blocking, or activation.
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Tests cliniques
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Capacité de détection potentiellement accrue.
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