Morphologie et taux de développement de la mouche à souffles, Hemipyrellia ligurriens (Diptera: Calliphoridae): Applications d’Entomologie légale
Résumé
Hemipyrellia ligurriens (Diptera: Calliphoridae) est une espèce de mouche à souffles d’importance médico-légale présentée dans de nombreux pays. Dans cette étude, nous avons déterminé la morphologie de tous les stades et le taux de développement de H. ligurriens élevés dans des conditions ambiantes naturelles dans la province de Phitsanulok, au nord de la Thaïlande. Les caractéristiques morphologiques de toutes les étapes basées sur l’observation au microscope optique ont été décrites et démontrées afin d’être utilisées à des fins d’identification. De plus, le temps de développement à chaque étape a été donné. Le temps de développement de H. ligurriens pour compléter la métamorphose; de l’œuf, de la larve, de la chrysalide à l’adulte, a pris 270,71 h pour 1 cycle de développement. Les résultats de cette étude peuvent être utiles non seulement pour une application dans l’enquête médico-légale, mais aussi pour l’étude de sa biologie à l’avenir.
1. Introduction
Spécimens de mouches à souffler (Diptères: Calliphoridae), en particulier les larves de mouches trouvées dans les cadavres et / ou sur les lieux de la mort, peuvent être utilisées comme preuves entomologiques dans les enquêtes médico-légales, c’est-à-dire estimer l’intervalle post-mortem (PMI) et déterminer les substances toxiques, les traumatismes antémortem et si le déplacement des restes s’est produit, comme déjà documenté. L’identification morphologique précise des spécimens d’insectes est l’un des facteurs très importants d’un point de vue appliqué car ils fournissent des preuves pertinentes pour les enquêtes médico-légales.
Parmi les espèces de mouches à souffler, Hemipyrellia ligurriens (Wiedemann) est une espèce de mouches à souffler d’importance médico-légale, comme indiqué précédemment dans des cas en Thaïlande et en Malaisie. Cette espèce de mouche est largement distribuée, couvrant la Corée, Taiwan, le Laos, Singapour, la Papouasie-Nouvelle-Guinée, l’Australie, l’Inde, la Chine, les Philippines, le Sri Lanka, la Malaisie, l’Indonésie et la Thaïlande. Outre son importance médico-légale, H. ligurriens peut être une nuisance dans les marchés et les jardins, et les adultes sont également des vecteurs mécaniques d’agents pathogènes, en raison de leur attirance pour les excréments humains à proximité des environnements occupés par l’homme. Auparavant, la morphologie de certains stades immatures (œuf, larves de 3ème stade et puparium) de H. ligurriens n’a été étudiée qu’en observant au microscope électronique à balayage et au microscope optique. Pour cette raison, les informations disponibles sur H. ligurriens sont incomplètes pour identifier toutes les preuves immatures qui peuvent être trouvées dans les scènes de mort. De plus, le taux de développement de cette espèce, qui est une donnée importante pour l’estimation de l’indice PMI, n’a pas été trouvé dans les littératures citées. De plus, les données sur le développement propres à la population locale sont très importantes pour estimer l’âge des larves afin de déterminer l’indice PMI. Pour augmenter la précision et la précision lors de l’application de ces informations dans les enquêtes médico-légales, l’étude de tous ses stades immatures et de son taux de développement est d’un grand intérêt car la morphologie de chacun pourrait fournir des caractéristiques spécifiques qui deviendront importantes pour une identification correcte, et les données de croissance dans un état particulier pourraient fournir des données essentielles pour l’estimation des PMI. Par conséquent, cette étude visait à étudier les caractéristiques distinctives de tous ses stades immatures en observant au microscope optique, à donner quelques détails importants pour l’identification et à déterminer son taux de développement, en particulier dans la province de Phitsanulok, au nord de la Thaïlande.
2. Matériaux et méthodes
2.1. Entretien de H. ligurriens en Laboratoire
La colonie de H. les ligurriens utilisés dans cette étude ont été obtenus à l’origine en collectant des mouches adultes avec un filet de balayage dans des zones du village de Sao Hin, district de Muang Phitsanulok, province de Phitsanulok, Thaïlande (16 ° 44’18N; 100°13’44E). Tous les adultes de H. ligurriens ont été recueillis sur le terrain et identifiés en fonction de leur morphologie, en utilisant la clé taxonomique de Tumrasvin et al. , avant d’être élevé plus loin en laboratoire. Les mouches ont été élevées dans des conditions ambiantes naturelles dans la salle d’élevage en système ouvert, selon la méthode de Sukontason et al. . Brièvement, les adultes ont été maintenus dans une cage d’élevage (30 × 30 × 30 cm) et nourris avec 2 types d’aliments: (i) un mélange de solution de sucre à 10% (p / v) et de solution de sirop multivitaminé à 1,5% (v / v) (SEVEN SEA, Angleterre) et (ii) du foie de porc frais. Du foie de porc frais a été fourni comme nourriture larvaire et site de ponte. La présence d’œufs sur le foie de porc a été observée quotidiennement. Lorsque des œufs ont été trouvés, le foie de porc contenant des œufs de mouche a été transféré doucement dans une boîte d’élevage de larves à l’aide d’une pince, puis 2 ou 3 morceaux (≈50 g / jour) de foie de porc frais ont été ajoutés dans la boîte comme nourriture pour les larves. Certains morceaux de foie de porc frais ont été ajoutés quotidiennement jusqu’à ce que les larves de la boîte cessent de se nourrir et de se déplacer ou qu’elles deviennent le stade prépupal (fin du 3ème stade). Tous les morceaux de foie de porc qui restaient dans la boîte d’élevage ont été retirés de la boîte. Seules les nymphes ont été conservées dans la boîte d’élevage et scellées hermétiquement jusqu’à ce que l’émergence de l’adulte soit trouvée. Après cela, la boîte a été placée et ouverte dans une cage d’élevage afin de libérer les adultes de la boîte pour vivre dans la cage d’élevage. La nouvelle génération de mouches a été élevée en continu comme mentionné ci-dessus.
2.2. Morphologie
Oeuf
Dans cette étude, des échantillons d’oeufs de H. ligurriens ont été obtenus de la colonie de laboratoire pour étudier des caractéristiques distinctes en utilisant la technique de coloration au permanganate de potassium, selon la description précédente de Sukontason et al. . Les principales caractéristiques, telles que la morphologie de la zone médiane entourant le micropyle et la sculpture chorionique, ont été observées et photographiées au microscope optique (Olympus, Japon), connecté à un appareil photo numérique (Samsung S700, Corée). De plus, les largeurs et longueurs de 30 œufs de mouches ont également été mesurées au microscope optique calibré. L’écart moyen et l’écart type de largeur et de longueur ont été analysés à l’aide du programme Excel (Microsoft office Enterprise 2007).
Larve
Cette étude a déterminé la morphologie et le taux de développement à tous les stades larvaires (1er, 2e et 3e stades). La morphologie de tous les stades a été étudiée en utilisant la méthode de compensation de l’hydroxyde. Brièvement, 30 larves de chaque stade ont été obtenues de la colonie de laboratoire et sacrifiées en les plaçant dans un bécher contenant de l’eau chaude (80 ° C) pendant 30 secondes pour les empêcher de rétrécir. Après cela, ils ont été conservés dans une petite bouteille en verre contenant 70% d’éthanol. Les larves conservées ont été disséquées individuellement sur deux sites pour obtenir trois parties du corps à l’aide d’une lame tranchante sous stéréomicroscope (Olympus, Japon), selon la méthode décrite par Sukontason et al. . La première coupe a été positionnée au milieu du deuxième segment thoracique pour visualiser le squelette céphalopharyngé interne et le spiracle antérieur externe. La deuxième coupe a été positionnée sur le 11e segment du corps afin d’observer les caractéristiques du spiracle postérieur. Comme méthode de compensation, chaque paire de parties antérieure et postérieure a été laissée dans une plaque de verre contenant une solution d’hydroxyde de potassium à 10% (p / v) pendant 1 jour (pour le 1er stade) ou 2 jours (pour les 2e et 3e stades). Ensuite, les échantillons ont été lavés deux fois à l’eau distillée et neutralisés en les plaçant sur une plaque de verre contenant un mélange d’éthanol à 35% et d’acide acétique glacial à 1% pendant 30 min. Après cela, les spécimens ont été déshydratés en série dans 50%, 70%, 80%, 95%, et de l’éthanol absolu (RCI LABSCAN, Thaïlande) pour 30 min par concentration d’alcool. Les échantillons déshydratés ont été transférés sur une plaque de verre contenant du xylène (PROLAB, France) et laissés pendant 1 min avant d’être montés sur une lame de verre avec 2-3 gouttes de support de montage (Permount). Un feuillet de couverture a été placé sur chaque spécimen. Les lames permanentes ont été laissées à température ambiante pendant 2 jours avant d’être observées au microscope optique. Le squelette céphalopharyngé et le spiracle postérieur de chaque stade ont été photographiés au microscope optique, qui a été connecté à l’appareil photo numérique. De plus, la longueur et la largeur du corps de tous les stades ont été examinées. Trente des larves du premier stade ont été mesurées à l’aide d’un microscope calibré, tandis que les deuxième et troisième stades (n = 30 larves / chaque stade) ont été mesurés avec des étriers vernier au microscope disséquant. L’écart moyen et l’écart type de la largeur et de la longueur de leur corps ont été analysés à l’aide du programme Excel.
Pupe
À ce stade, la morphologie des parties antérieure et postérieure et le changement de coloration ont été étudiés. Les parties antérieure et postérieure des puparia ont été déterminées en utilisant la technique de compensation de l’hydroxyde de potassium, précédemment décrite par Sukontason et al. . Les parties antérieures de puparia étaient les restes de la tête contractée jusqu’au quatrième segment de puparia après l’émergence des mouches. Ils ont été recrutés dans la boîte d’élevage où les mouches avaient déjà émergé. Pour chaque partie postérieure, le segment caudal du puparium a été coupé avec une lame tranchante au stéréomicroscope puis transféré à l’aide d’une pince dans la même plaque de verre que celle utilisée pour la partie antérieure. Après cela, ils ont été trempés dans un détergent à vaisselle à 1% (v / v) pour éliminer les artefacts de surface et / ou les tissus du foie de porc. Comme méthode de compensation, les parties antérieure et postérieure ont été laissées dans un tube à essai contenant une solution d’hydroxyde de potassium à 10% (p / v) et le tube à essai a été transféré dans un bain d’eau réglé à une température de 80 ° C pendant 1 h. Ensuite, le processus de prélèvement a été effectué suivant celui décrit pour le stade larvaire. Les caractéristiques importantes des parties antérieure et postérieure ont été observées et photographiées au microscope optique, connecté à l’appareil photo numérique. Le nombre de papilles dans chaque spiracle postérieur de 30 parties antérieures a été compté et calculé pour son aire de répartition. De plus, trente puparia ont été mesurés pour leur largeur et leur longueur à l’aide d’étriers vernier. La moyenne et l’écart type de leur largeur et de leur longueur ont été analysés à l’aide du programme Excel. Pour l’observation du changement de coloration, un seul puparium représentant la couleur des puparia dans la boîte d’élevage a été sélectionné et photographié à 0, 3, 6, 9, 12, 15, 18, 21, et 24 h en utilisant l’appareil photo numérique. Avant de prendre des photographies, le puparium a été lavé à l’eau distillée pour éliminer les artefacts de surface.
Adultes
Les jeunes adultes, âgés de 5 à 7 jours, ont été obtenus à partir de la cage d’élevage à l’aide d’un tube à essai. Ils ont été sacrifiés en les plaçant au réfrigérateur (-4 ° C) pendant 2 h. Après cela, ils ont été délicatement épinglés avec une bonne disposition anatomique. Les caractéristiques importantes pour l’identification ont été examinées et photographiées au stéréomicroscope, connecté à l’appareil photo numérique. De plus, trente adultes ont été mesurés pour la largeur et la longueur du corps à l’aide d’étriers vernier. Dans cette étude, la largeur du corps signifie la largeur du 2ème segment thoracique, et la longueur du corps est la longueur totale du corps, allant de l’œil composé moyen au dernier segment de l’abdomen. L’écart moyen et l’écart type de la largeur et de la longueur de leur corps ont été analysés à l’aide du programme Excel.
2.3. Évaluation du taux de développement
Pour évaluer le taux de développement, les expériences ont été réalisées dans la salle d’élevage en système ouvert à la température ambiante naturelle de la province de Phitsanulok, dans le nord de la Thaïlande. La température et l’humidité relative ont été enregistrées quotidiennement à l’aide d’un thermomètre et d’un hygromètre (Thermo-Hygro TM870, Chine). Les plages (moyennes ± ET) de température et d’humidité relative enregistrées utilisées pour déterminer le taux de développement de cette mouche étaient respectivement de 26,7 ± 0,61 ° C et de 74 ± 3 %. Pour chaque expérience, le taux de développement a commencé à la découverte de larves nouvellement écloses (ou du 1er stade); le stade prépupal signifiait le point final. Les larves nouvellement écloses ont été reconnues comme des larves âgées de 0 h. L’évaluation du taux de développement dans cette étude a été étudiée en séparant les larves nouvellement écloses de la même colonie de mouches adultes en 3 groupes. Chaque groupe était composé de 150 à 200 larves nouvellement écloses. Ils ont été transférés doucement de la boîte d’élevage à la nouvelle à l’aide d’un pinceau humide (numéro 4). Du foie de porc frais (≈50 g) a été fourni quotidiennement comme source de nourriture pour les larves dans chaque boîte d’élevage. Les cinq plus grosses larves ont été retirées de la boîte d’élevage toutes les 3 h. Elles ont été sacrifiées en les plaçant dans de l’eau chaude (≈80 ° C) pendant 30 secondes pour éviter le rétrécissement des larves et ont été conservées dans une petite bouteille en verre contenant 70% d’éthanol. Toutes les larves conservées ont été mesurées à l’aide d’un microscope calibré ou d’un pied à coulisse sous un microscope à dissection, selon leur taille. La relation entre la longueur du corps des larves et le temps de développement a été analysée à l’aide du programme Excel. De plus, les durées de vie à d’autres étapes ont été enregistrées et analysées à l’aide du programme Excel.
3. Résultats
3.1. Morphologie
Œuf
L’œuf de H. ligurriens était allongé et effilé aux extrémités antérieure et postérieure (Figure 1(a)). Il mesurait 1,44 ± 0,11 mm de longueur et 0,47 ± 0,04 mm de largeur (tableau 1). Il a fallu du temps à ce stade pendant 10,3 ± 0,30 h avant que la mue ne devienne un stade larvaire (tableau 1). L’œuf non coloré était blanc crème; tandis que ceux après coloration avec du permanganate de potassium à 1% étaient de couleur brun clair. La zone médiane était située dorsalement, positionnant une forme en Y qui s’étendait de l’extrémité antérieure à presque l’extrémité postérieure (figure 1(b)). La ligne d’éclosion était verticale, montrant ainsi un épaississement sombre le long de la zone médiane (figure 1(a)). La sculpture chorionique est apparue comme un motif hexagonal, avec sa limite réticulaire s’élevant légèrement comme un filet (Figure 1 (c)).
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Œuf d’Hémipyrellia ligurriens coloré avec du permanganate de potassium à 1%. a) Œuf entier; MA : surface médiane. (b) Extrémité antérieure de l’œuf présentant un plastron et un micropyle bifurqués; M: micropyle. (c) Sculpture chorionique externe à motif hexagonal, avec sa limite réticulaire s’élevant légèrement comme un filet. Barres = 100mm pour toutes les figures.
Larve
Sous observation au stéréomicroscope, tous les stades larvaires de H. ligurriens présentaient une larve vermiforme de forme muscoïde typique, pointue à l’avant et émoussée à l’arrière. Le segment caudal avait une seule paire de spiracles postérieurs. Le premier stade était relativement petit, mesurant 2,62 ± 0,70 mm de longueur et 0,75 ± 0,35 mm de largeur, le temps de développement à ce stade étant de 12 ± 0,1 h (tableau 1). Le squelette céphalopharyngé n’était pas bien développé (Figure 2(a)), tandis que le spiracle postérieur présentait 2 fentes spiraculaires fusionnant ventralement (Figure 2(e)). Le deuxième stade était de 6,24 ± 1,67 mm de longueur et de 1,37 ± 0,19 mm de largeur, avec une durée de 12 ± 3 h à ce stade (tableau 1). Le squelette céphalopharyngé était presque complet (Figure 2(b)), tandis que le spiracle postérieur présentait 2 fentes spiraculaires séparées avec un péritrème incomplet faiblement pigmenté (Figure 2(f)). La taille du 3ème stade était la plus grande, mesurant 12,18 ± 1,31 mm de longueur et 2,32 ± 0,19 mm de largeur. Le temps de développement était également le plus long à ce stade, étant de 84 ± 3 h (tableau 1). Les squelettes céphalopharyngés du début et de la fin du 3e stade étaient similaires (Figures 2(c) et 2(d), resp.). Les spiracles postérieurs du stade précoce (Figure 2(g)) et du stade tardif du 3e stade (Figure 2(h)) étaient similaires, présentant 3 fentes spiraculaires séparées et un péritrème complet avec une projection interslite, à l’exception de ce dernier présentant un péritrème très pigmenté (Figure 2(h)). Les caractéristiques distinctives des trois stades sont résumées dans le tableau 2.
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Squelettes céphalopharyngés et spiracles postérieurs des larves d’Hemipyrellia ligurriens. Squelettes céphalopharyngés de (a) 1er stade, (b) 2e stade, (c) 3e stade précoce,. et (d) fin du 3ème stade. Spiracles postérieurs de (e) 1er stade, (f) 2e stade, (g) début du 3e stade et (h) fin du 3e stade. Barres = 100mm pour toutes les figures.
Pupe
Le puparium de H. ligurriens était de forme coarctate typique (Figure 3), qui mesurait 6,82 ± 0.27 mm de longueur et 2,76 ± 0,11 mm de largeur (tableau 1). Les changements de couleur observés ont révélé que le puparium précoce était de couleur blanc crème (0 h), avec l’extrémité postérieure encore tronquée (Figure 3(a)). Cependant, la couleur du puparium a changé progressivement en brun jaune clair dans les 3 h après la pupariation (Figure 3(b)) puis en brun après environ 15 h (Figure 3(f)). La couleur du puparium est passée au brun foncé après environ 18 h d’observation (Figure 3(g)). À 24 h, le puparium présentait la couleur brune la plus foncée (Figure 3(i)). La durée pour l’ensemble du stade nymphal était de 152,5 ± 30,7 h (tableau 1).
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Color changes in puparia of Hemipyrellia ligurriens up to 24 h after pupariation. Puparium (a)–(i) at 0, 3, 6, 9, 12, 15, 18, 21, and 24 h, respectively. Bars = 100 𝜇m for all figures.
L’observation des parties antérieure et postérieure de la puparie est apparue sous la forme d’une couleur jaune-brun pâle après avoir été traitée avec de l’hydroxyde de potassium à 10%. La plaque antérieure, pressée avec une lame de couverture, était de forme trapézoïdale avec 2 spiracles antérieurs situés aux deux extrémités supérieures (Figure 4(a)). Chaque spiracle antérieur était composé de 5 à 7 papilles (Figure 4(b)). La colonne vertébrale observée dans le troisième segment affichait des rangées de pointes à pointe unique (Figure 4 (c)). Chaque spiracle postérieur présentait trois fentes spiraculaires brun foncé très pigmentées, avec un bouton très pigmenté et un péritrème faiblement pigmenté (Figure 4(d)).
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Puparium of Hemipyrellia ligurriens after treating with 10% KOH. (a) Anterior plate with trapezoid shape. (b) Anterior spiracle with 6 papillae. (c) Motif de la colonne vertébrale au 3ème segment montrant une pointe unique. d) Spiracles postérieurs. Barres = 100mm pour toutes les figures.
Adulte
Le H. ligurriens adulte mesurait 12,23 ± 0,61 mm de longueur et 2,85 ± 0,25 mm de largeur (tableau 1), d’aspect vert cuivré métallique, avec une pollinose blanc grisâtre sur la partie antérieure du thorax (Figures 5(a) et 5(b)). La tête de la femelle était dichoptique, mais celle du mâle était subholoptique (figures 5(c) et 5(d)). Une pollinosité faciale grisâtre a été observée chez les deux sexes (Figures 5(c) et 5(d)), et tout le troisième segment antennaire était brun foncé ou orange ventralement (Figures 5(c) et 5(d)). Le squama était blanchâtre (figure 5(e)). Gena était couvert de poils noirs (figure 5(f)). La veine de la tige était dépourvue de setules (Figure 5(g)). Deux soies acrostiches postsuturales ont été trouvées sur le thorax (Figure 5(h)). Des poils pileux supraconvexités ont été trouvés (Figure 5(i)). Toutes les caractéristiques ci-dessus étaient importantes pour l’identification de cette mouche adulte.
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Adults and important characteristics for identification of Hemipyrellialigurrien. (a) Dorsal view of the female. (b) Dorsal view of the male. (c) Frons of the female showing dichoptic eyes. (d) Frons of the male showing subholoptic eyes. e) Vue latérale de l’adulte montrant des squames blanchâtres (flèche). (f) Grossissement plus élevé de la tête montrant des poils noirs sur le gena (flèche). g) Aile montrant la veine de la tige sans setulae (flèche). h) Thorax dorsal. (i) Poils pileux sur la supraconvexité (flèche). Barres = 200mm pour toutes les figures.
3.2. Évaluation du taux de développement
Des évaluations du taux de développement de H.ligurriens ont été déterminées au cours de la période d’enquête, en fonction de l’état ambiant naturel de la province de Phitsanulok. La courbe de croissance du stade larvaire a montré une forme sigmoïde (Figure 6). Les données sur le taux de développement de l’élevage ont révélé que le temps de développement entre les larves nouvellement écloses et le début de la pupariation croît rapidement sur une période totale de 108 h. Les larves ont atteint leur longueur médiane maximale à ≈42 h, et la pupariation a eu lieu à 108 h. Les durées de vie de tous les stades ont également été résumées dans le tableau 1.
Relation entre le temps de développement et la longueur larvaire des Hemipyrellia ligurriens dans des conditions ambiantes naturelles (26,7 ± 0,61°C; 74 ± 3% HR) de la province de Phitsanulok, dans le nord de la Thaïlande.
4. Discussion
Les données relatives aux caractéristiques importantes des insectes pour une identification et un développement rapides et fiables en laboratoire sont des conditions préalables cruciales pour une application appropriée dans les enquêtes médico-légales. H. ligurriens est une espèce de mouche soufflante d’importance médico-légale qui a été enregistrée dans des cas médico-légaux en Malaisie et en Thaïlande. Cette étude s’est concentrée sur les caractéristiques importantes pour identifier tous les stades de H. ligurriens, basé sur l’observation au microscope optique et le temps de développement de chaque étape dans des conditions ambiantes naturelles avec des températures et une humidité relative moyennes, qui étaient respectivement de 26,7 ± 0,61 ° C et de 74 ± 3%. Bien que la morphologie de H. ligurriens à certains stades ait déjà été étudiée au microscope électronique à balayage et au microscope optique, cette étude a fourni des informations plus détaillées sur les caractéristiques distinctives et de nouveaux indices d’identification en utilisant des techniques simples afin d’augmenter la précision et la précision de l’application médico-légale à l’avenir. De plus, cette étude a fourni des données sur le développement de H. ligurriens, qui peuvent être utilisées pour estimer le PMI des cadavres sur lesquels cette espèce de mouche a colonisé.
La sculpture chorionique ainsi que la largeur et la longueur de la zone médiane ont été signalées précédemment comme une caractéristique importante pour identifier l’œuf de mouche. La morphologie de l’œuf de H. ligurriens, observée dans cette étude par coloration à 1% de permanganate de potassium et observation au microscope optique, était similaire à celle des travaux précédents, qui ont été étudiés au microscope électronique à balayage. Par conséquent, les résultats de cette étude ont confirmé l’efficacité de la méthode de coloration, initiée par Sukontason et al. , à des fins d’identification des œufs de mouche. Les œufs tachés ont pu être observés clairement au microscope optique. En comparant les données avec des études antérieures, la taille de l’œuf de H. ligurriens dans cette étude était plus grande que celle d’autres mouches à souffler, telles que Lucilia cuprina, Ceylonomyia (= Chrysomya) nigripes et Aldrichina grahami; cependant, sa taille n’était pas différente de celle des Chrysomya megacephala et Achoetandrus (= Chrysomya) rufifacies. Néanmoins, la taille de l’œuf de mouche ne peut pas être utilisée comme caractéristiques principales pour l’identification, selon les informations d’Erzinclioglu, qui a rapporté que la taille de l’œuf de mouche dépendait des niveaux alimentaires. Par conséquent, l’identification de l’œuf de mouche devrait utiliser les caractéristiques de la largeur du plastron, la morphologie de la zone du plastron entourant le micropyle comme critères principaux et utiliser la taille comme caractéristique supplémentaire pour l’identification de l’œuf.
Sur la base de nos références, cette étude a été la première à montrer la morphologie du squelette céphalopharyngé et du spiracle postérieur chez toutes les larves de stades par observation au microscope optique. Les squelettes céphalopharyngés et les spiracles postérieurs des larves étaient clairement différents à chaque stade. Les résultats de cette étude concordent avec les rapports précédents. De plus, cette étude a montré le degré de pigmentation du péritrème à chaque stade. C’est peut-être un nouvel indice pour différencier l’âge des larves, en particulier entre le stade précoce et le stade tardif. Chaque stade de développement étant certainement différent ainsi que le degré de pigmentation, les données de cette étude peuvent être utiles pour identifier en détail les stades larvaires et l’âge des larves de cette mouche soufflante, comme mentionné ci-dessus.
L’étude sur la morphologie du stade nymphal a fourni des résultats similaires aux rapports précédents. Les résultats de l’observation des changements de coloration selon le temps des puparias de H. ligurriens ont d’abord été rapportés dans cette étude et pourraient constituer une autre nouvelle preuve à l’appui pour déterminer au moins l’âge approximatif des puparias afin d’augmenter la précision de la valeur de l’indice PMI.
Cette étude a mis en évidence certaines photographies de caractéristiques distinctives à utiliser pour l’identification de H. ligurriens adultes. Ces photographies de caractéristiques particulières de cette étude peuvent être utiles pour les personnes qui ne connaissent pas la terminologie des clés taxonomiques. La clé taxonomique actuelle pour l’identification des espèces de mouches soufflées en Thaïlande a été donnée par Kurahashi et Bunchu. À l’œil nu d’un non-intomologiste, H. ligurriens adulte semble similaire à A. rufifacies en apparence. Par conséquent, le risque d’identification erronée peut survenir chez les deux espèces, en particulier en Thaïlande car A. rufifacies était la deuxième espèce de mouche à soufflet la plus prédominante de Thaïlande, et une coïncidence des deux espèces dans certaines provinces de ce pays a été trouvée.
Cette étude a été la première à fournir un temps de développement de H. ligurriens à tous les stades. Les résultats ont montré que le temps de développement de H. ligurriens dans des conditions naturelles dans cette étude (une température moyenne de 26,7 ± 0,61 ° C et une humidité relative de 74 ± 3%) était plus rapide que celui de C. megacephala et A. rufifacies, qui ont été étudiés à une température moyenne de 27,4 ° C. De plus, le temps de développement de chaque stade de H. ligurriens était différent de celui de C. megacephala et A. rufifacies. Le taux de développement de chaque espèce a été spécifié, bien qu’elles aient grandi dans les mêmes conditions ou dans des conditions connexes. De plus, la variation des temps de développement au sein d’une espèce de mouche a été observée dans des populations géographiquement différentes. Les données sur le développement propres à la population locale sont nécessaires pour estimer l’âge des larves afin de déterminer l’indice PMI. Par conséquent, les données de cette étude sont très importantes pour une application ultérieure, en particulier dans la province de Phitsanulok.
Les données, obtenues à partir des caractéristiques morphologiques et du temps de développement, complètent les informations précédentes et fournissent de nouvelles preuves à l’appui pour l’identification de cette espèce de mouche et son application dans les enquêtes médico-légales, en particulier lorsque H. ligurriens est présent dans des cadavres humains. De plus, ils pourraient être utiles comme données de base dans son étude de biologie à l’avenir.
Remerciements
Cette étude a été soutenue principalement par une subvention accordée à N. Bunchu de la Faculté des sciences médicales de l’Université de Naresuan et un autre du Thailand Research Fund (MRG5280194). Les auteurs remercient également le Centre d’excellence en Biotechnologie médicale de la Faculté des Sciences médicales de l’Université de Naresuan et la Division de l’Administration de la recherche de l’Université de Naresuan pour leur soutien et leurs frais de publication.