Abstract

Hemipyrellia ligurriens (Diptera: Calliphoridae) on rikosteknisesti tärkeä puhalluskärpäslaji, joka on esitetty monissa maissa. Tässä tutkimuksessa määritimme kaikkien vaiheiden morfologian ja H. ligurriensin kehitysnopeuden, joka on kasvatettu luonnollisissa olosuhteissa Phitsanulokin maakunnassa Pohjois-Thaimaassa. Kaikkien vaiheiden morfologiset piirteet, jotka perustuvat havainnointiin valomikroskoopilla, kuvattiin ja osoitettiin tunnistamistarkoituksessa. Lisäksi annettiin kehitysaikaa jokaisessa vaiheessa. H. ligurriensin kehitysaika metamorfoosin suorittamiseen; munasta, toukasta, kotelosta aikuiseksi kesti 270,71 tuntia 1 kehityssyklin ajan. Tämän tutkimuksen tuloksista voi olla hyötyä paitsi sovellettavaksi oikeuslääketieteellisessä tutkimuksessa, myös tutkittavaksi sen biologiassa tulevaisuudessa.

1. Johdanto

puhalluskärpästen (Diptera: Calliphoridae), erityisesti ruumiista ja/tai kuolinpaikoilta löydettyjä kärpästoukkia, voidaan käyttää entomologisena todisteena oikeuslääketieteellisissä tutkimuksissa, toisin sanoen arvioitaessa kuoleman jälkeistä aikaa (PMI) ja määritettäessä myrkyllisiä aineita, kuolemaa edeltäviä traumoja ja sitä, oliko jäänteiden siirtäminen tapahtunut, kuten on jo dokumentoitu . Hyönteisnäytteiden tarkka morfologinen tunnistaminen on yksi erittäin tärkeistä tekijöistä sovelletusta näkökulmasta, koska ne tarjoavat relevantteja todisteita oikeuslääketieteellisille tutkimuksille .

puhalluskärpäslajeista Hemipyrellia ligurriens (”Wiedemann”) on tutkitusti merkittävä puhalluskärpäslaji, kuten aiemmin on raportoitu Thaimaan ja Malesian tapauksista . Tämän kärpäslajin levinneisyys kattaa Korean, Taiwanin, Laosin, Singaporen, Papua-Uuden-Guinean, Australian, Intian, Kiinan, Filippiinit, Sri Lankan, Malesian, Indonesian ja Thaimaan . Rikosteknisen merkityksensä lisäksi H. ligurriens voi olla riesa toreilla ja puutarhoissa, ja aikuiset ovat myös taudinaiheuttajien mekaanisia vektoreita, koska ne vetävät puoleensa ihmisen eritteitä lähellä ihmisten asuttamia ympäristöjä . Aiemmin H. ligurriensin joidenkin epäkypsien vaiheiden (muna, 3.-instar toukka ja puparium) morfologiaa on tutkittu vain tarkkailemalla pyyhkäisyelektronimikroskoopilla ja valomikroskoopilla. Tästä syystä H. ligurriensin saatavilla olevat tiedot ovat puutteellisia kaikkien kuolemanpaikoilta löytyvien epäkypsien todisteiden tunnistamiseksi. Lisäksi kyseisen lajin kehitysnopeutta, joka on tärkeä tieto YMI: n arvioimiseksi, ei ole löydetty mainituista kirjallisuuksista. Lisäksi paikalliset populaatiosidonnaiset kehitystiedot ovat erittäin tärkeitä toukkien iän arvioimiseksi PMI: n määrittämiseksi . Jotta voidaan lisätä tarkkuutta ja tarkkuutta sovellettaessa näitä tietoja oikeuslääketieteellisissä tutkimuksissa, on erittäin tärkeää tutkia sen kaikkia kehitysvaiheita ja kehitysnopeutta, koska kunkin kehitysvaihe voi tarjota erityispiirteitä, joista tulee tärkeitä asianmukaisen tunnistamisen kannalta, ja erityisesti kasvutiedot voivat tarjota olennaisia tietoja YSV-estimointia varten. Siksi tämän tutkimuksen tarkoituksena oli tutkia kaikkien sen kypsymättömien vaiheiden ominaispiirteitä havainnoimalla valomikroskoopilla, antaa joitakin tärkeitä yksityiskohtia sen tunnistamiseksi ja sen kehitysnopeuden määrittämiseksi, erityisesti phitsanulokin provinssissa Pohjois-Thaimaassa.

2. Materiaalit ja menetelmät

2.1. H. ligurriensin ylläpito laboratoriossa

H. tässä tutkimuksessa käytetyt ligurrienit saatiin alun perin keräämällä aikuisia kärpäsiä lakaisuverkolla Sao Hinin kylän, Muang Phitsanulokin piirin, Phitsanulokin provinssin, Thaimaan (16°44 ’18N; 100°13′ 44E) alueilla. Kaikki H. ligurriensin aikuiset kerättiin kentältä ja tunnistettiin niiden morfologian perusteella käyttäen Tumrasvin et al: n taksonomista avainta. , ennen kuin sitä kasvatetaan edelleen laboratoriossa. Kärpäset kasvatettiin luonnollisessa ympäristössä avoimessa kasvatushuoneessa sukontason et al-menetelmän mukaisesti. . Lyhyesti, aikuisia pidettiin kasvatushäkissä (30 × 30 × 30 cm) ja ruokittiin 2 erilaista ruokaa: (i) seos 10% (w/v) sokeriliuosta ja 1,5% (v/v) monivitamiinisiirappiliuosta (SEVEN SEA, Englanti) ja (ii) tuoretta sianmaksaa. Toukan ravinnoksi ja ovipointipaikaksi toimitettiin tuoretta sianmaksaa. Kananmunien esiintyminen sianmaksassa havaittiin päivittäin. Kun munat löydettiin, sianmaksa, jossa oli kärpäsen munia, siirrettiin varovasti toukkakasvatuslaatikkoon pihdeillä, ja sitten laatikkoon lisättiin 2 tai 3 kappaletta (≈50 g/vrk) tuoretta sianmaksaa toukkien ravinnoksi. Joitakin paloja tuoretta sianmaksaa lisättiin päivittäin, kunnes laatikossa olevat toukat lopettivat ruokinnan ja liikkumisen tai niistä tuli esivaihe (myöhäinen 3.instar). Kaikki kasvatuslaatikkoon jääneet sianmaksan palat poistettiin laatikosta. Vain koteloita pidettiin kasvatuslaatikossa ja sinetöitiin tiiviisti, kunnes täysikasvuinen ilmaantui. Tämän jälkeen laatikko sijoitettiin ja avattiin kasvatushäkkiin, jotta aikuiset vapautuivat laatikosta elämään kasvatushäkkiin. Uutta kärpässukupolvea kasvatettiin jatkuvasti, kuten edellä mainittiin.

2, 2. Morfologia

muna
tässä tutkimuksessa H. ligurriensin munanäytteet otettiin laboratoriokoloniasta erilaisten piirteiden tutkimiseksi kaliumpermanganaattivärjäystekniikalla sukontason et al: n aiemman kuvauksen mukaisesti. . Tärkeimmät ominaisuudet, kuten mikropyyliä ympäröivän mediaanialueen morfologia ja korioninen veistos, havaittiin ja kuvattiin valomikroskoopilla (Olympus, Japani), joka oli yhdistetty digitaalikameraan (Samsung S700, Korea). Lisäksi 30 kärpäsenmunan leveyksiä ja pituuksia mitattiin myös kalibroidulla valomikroskoopilla. Leveyden ja pituuden keskiarvo ja keskihajonta analysoitiin Excel-ohjelman avulla (Microsoft office Enterprise 2007).

Larva
tässä tutkimuksessa määritettiin morfologia ja kehitysnopeus kaikissa toukkavaiheissa (1., 2. ja 3. instaarit). Kaikkien instaarien morfologia tutkittiin hydroksidipuhdistusmenetelmällä. Laboratorioyhdyskunnasta saatiin lyhyesti 30 toukkaa kustakin instarista ja ne uhrattiin laittamalla ne 30 sekunnin ajaksi dekantterilasiin, jossa oli kuumaa vettä (80°C), jotta ne eivät kutistuisi . Sen jälkeen ne säilöttiin pieneen lasipulloon, jossa oli 70% etanolia. Säilötyt toukat leikeltiin yksitellen kahdesta kohdasta, jotta saatiin kolme ruumiinosaa käyttämällä terävää terää stereomikroskoopilla (Olympus, Japani) Sukontason et al: n kuvaaman menetelmän mukaisesti. . Ensimmäinen viilto sijoitettiin toisen rintakehän keskiosan poikki sisäisen pääfarmarinielun luurangon ja ulkoisen anteriorisen spiraakkelin tarkastelua varten. Toinen viilto sijoitettiin 11. ruumiinosan poikki, jotta voitiin tarkkailla takaosan spiraakkelin ominaisuuksia. Selvitysmenetelmänä kukin etu-ja takaosapari jätettiin lasilevyyn, joka sisälsi 10% (w/v) kaliumhydroksidiliuosta 1 päivän ajan (1.instar) tai 2 päivän ajan (2. ja 3. instar). Sen jälkeen näytteet pestiin kahdesti tislatulla vedellä ja neutraloitiin asettamalla ne lasilevylle, joka sisälsi 35% etanolia ja 1% jääetikkaa 30 minuutin ajan. Sen jälkeen yksilöt kuivuivat sarjatuotantona 50%, 70%, 80%, 95%, ja absoluuttista etanolia (RCI LABSCAN, Thaimaa) 30 min alkoholipitoisuutta kohti. Kuivatut näytteet siirrettiin ksyleeniä sisältävälle lasilevylle (PROLAB, Ranska) ja jätettiin 1 minuutiksi ennen asennusta lasilevylle, jossa oli 2-3 tippaa kiinnitysainetta (Permount). Jokaisen yksilön päälle asetettiin suojalappu. Pysyvät diat jätettiin huoneenlämpöön 2 päiväksi, ennen kuin ne havainnoitiin valomikroskoopilla. Kummankin jalkapöydän pääjalka ja takaspoileri kuvattiin digitaalikameraan kytketyllä valomikroskoopilla. Lisäksi tutkittiin kaikkien jalkapöytien pituus ja leveys. Kolmekymmentä ensimmäistä instar-toukkaa mitattiin kalibroidulla mikroskoopilla, kun taas toinen ja kolmas instar-toukka (n = 30 toukkaa/ jokainen instar) mitattiin Vernier-sammuttimilla dissektiomikroskoopilla. Niiden kehon leveyden ja pituuden keskiarvo ja keskihajonta analysoitiin Excel-ohjelman avulla.

Pupa
tässä vaiheessa tutkittiin etu-ja takaosan morfologiaa sekä värimuutoksia. Puparian etu-ja takaosat määritettiin kaliumhydroksidipuhdistustekniikalla, jota aiemmin kuvasivat Sukontason et al. . Puparian etuosat olivat supistuneen pään jäänteitä puparian neljännelle lohkolle kärpästen noustua esiin. Heidät värvättiin kasvatuslaatikosta, josta Kärpät oli jo noussut. Kunkin takaosan osalta pupaariosa leikattiin terävällä terällä stereomikroskoopin alla ja siirrettiin sitten pihdeillä samaan lasilevyyn kuin anterioriosa. Sen jälkeen niitä liotettiin 1%: ssa (v/v) astianpesuainetta pintaesineiden ja/tai sianlihan maksakudosten poistamiseksi. Selvitysmenetelmänä etu-ja takaosat jätettiin koeputkeen, jossa oli 10% (w/v) kaliumhydroksidiliuosta, ja koeputki siirrettiin vesihauteeseen, joka asetettiin 80°C: n lämpötilaan 1 tunniksi. Tämän jälkeen suoritettiin näyteprosessi toukkavaihetta varten kuvatun mukaisesti. Etu-ja takaosien tärkeitä ominaisuuksia havainnoitiin ja kuvattiin digitaalikameraan kytketyllä valomikroskoopilla. Kussakin takimmaisessa spiraakkelissa, jossa oli 30 etummaista osaa, laskettiin ja laskettiin sen levinneisyysalueen mukaan. Lisäksi kolmestakymmenestä pupariasta mitattiin niiden leveys ja pituus vernier-jarrusatulaitteilla. Niiden leveyden ja pituuden keskiarvo ja keskihajonta analysoitiin Excel-ohjelman avulla. Värimuutoksen tarkkailua varten valittiin ja valokuvattiin vain yksi puparium, joka edusti puparian väriä kasvatuslaatikossa. 0, 3, 6, 9, 12, 15, 18, 21, ja 24 h digitaalikameralla. Ennen valokuvien ottamista puparium pestiin tislatussa vedessä pintaesineiden poistamiseksi.

Aikuiset
nuoret Aikuiset, 5-7 päivän ikäiset, saatiin kasvatushäkistä koeputkella. Ne uhrattiin laittamalla ne jääkaappiin (-4°C) 2 tunnin ajaksi. sen jälkeen ne puristettiin kevyesti hyvällä anatomisella järjestelyllä. Tunnistamisen kannalta tärkeitä ominaisuuksia tutkittiin ja kuvattiin stereomikroskoopilla, joka oli kytketty digitaalikameraan. Lisäksi kolmeltakymmeneltä aikuiselta mitattiin ruumiin leveys ja pituus vernier-jarrusatulaitteilla. Tässä tutkimuksessa kehon leveys tarkoittaa 2. rintakehän segmentin leveyttä, ja kehon pituus on koko kehon pituus, joka vaihtelee keskimmäisestä yhdistetystä silmästä vatsan viimeiseen segmenttiin. Niiden kehon leveyden ja pituuden keskiarvo ja keskihajonta analysoitiin Excel-ohjelman avulla.

2, 3. Kehitysnopeuden arviointi

kehitysnopeuden arvioimiseksi kokeet tehtiin avoimen järjestelmän kasvatushuoneessa luonnollisessa ympäristön lämpötilassa Phitsanulokin provinssissa Pohjois-Thaimaassa. Lämpötila ja suhteellinen kosteus kirjattiin päivittäin lämpömittarin ja kosteusmittarin avulla (Thermo-Hygro TM870, Kiina). Tämän kärpäsen kehittymisnopeuden määrittämiseen käytetyt kirjatun lämpötilan vaihteluvälit (keskiarvo ± SD) olivat 26, 7 ± 0, 61°C ja suhteellisen kosteuden vaihteluvälit (keskiarvo ± SD) 74 ± 3%. Kunkin kokeen kehitysnopeus alkoi vasta kuoriutuneiden toukkien (tai ensimmäisen vaiheen) löytymisestä; esivaihe merkitsi päätepistettä. Vastakuoriutuneet toukat tunnistettiin 0 h vanhoiksi toukiksi. Kehitysnopeuden arviointia tässä tutkimuksessa tutkittiin erottamalla vastakuoriutuneet toukat samasta aikuisen kärpäsyhdyskunnasta kolmeen ryhmään. Kuhunkin ryhmään kuului 150-200 vastakuoriutunutta toukkaa. Ne siirrettiin varovasti kasvatuslaatikosta uuteen märällä siveltimellä (numero 4). Tuoretta sianmaksaa (≈50 g) toimitettiin päivittäin toukkien ravinnonlähteeksi kuhunkin kasvatuslaatikkoon. Viisi suurinta toukkaa poistettiin kasvatuslaatikosta 3 tunnin välein. ne uhrattiin laittamalla kuumaan veteen (≈80°C) 30 sekunniksi toukkien kutistumisen estämiseksi ja säilöttiin pieneen lasipulloon, jossa oli 70% etanolia. Kaikkien säilöttyjen toukkien ruumiinpituudet mitattiin kalibroidulla mikroskoopilla tai Vernier-sammuttimilla dissektiomikroskoopilla niiden koosta riippuen. Toukan ruumiinpituuksien ja kehitysajan suhdetta analysoitiin Excel-ohjelman avulla. Lisäksi muiden vaiheiden elinkaaret taltioitiin ja analysoitiin Excel-ohjelman avulla.

3. Tulokset

3.1. Morfologia

muna
H. ligurriensin muna oli pitkänomainen ja kapeneva sekä etu-että takapäästä (Kuva 1 a). Sen pituus oli 1,44 ± 0,11 mm ja leveys 0,47 ± 0,04 mm (Taulukko 1). Tässä vaiheessa kesti 10,3 ± 0,30 tuntia ennen kuin valettiin toukkavaiheeksi (Taulukko 1). Hallitsematon muna oli kermanvalkoinen; kun taas värjäyksen jälkeen 1% kaliumpermanganaatilla olivat vaaleanruskeita. Mediaanialue sijaitsi dorsaalisesti sijoittaen Y-muodon, joka ulottui etupäästä lähes takapäähän (Kuva 1(b)). Kuoriutumislinja oli pystyasennossa, jolloin se näytti tummaa paksuuntumista keskialueella (Kuva 1 (a)). Korioninen veistos esiintyi kuusikulmaisena kuviona, jonka verkkomainen raja kohosi hieman verkon tavoin (Kuva 1 (c)).

Larva
stereomikroskoopilla tarkkailtaessa kaikissa H. ligurriensin toukkaeläimissä näkyi tyypillinen muskoidinmuotoinen vermiform-toukka, joka oli teräväkärkinen edestä ja tylppä takaa. Takaruumiissa oli yksi pari takaruumiita. Ensimmäinen instar oli suhteellisen pieni, pituus 2,62 ± 0,70 mm ja leveys 0,75 ± 0,35 mm, kehitysajan ollessa tässä vaiheessa 12 ± 0,1 h (Taulukko 1). Kefalofaryngeaalinen luuranko ei ollut hyvin kehittynyt (kuva 2 (a)), kun taas takimmaisessa spiraakkelissa oli 2 spirakulaarista rakoa, jotka sulautuivat ventraalisesti (kuva 2(e)). Toinen instar oli pituudeltaan 6,24 ± 1,67 mm ja leveydeltään 1,37 ± 0,19 mm, kestoltaan tässä vaiheessa 12 ± 3 h (Taulukko 1). Cephalopharyngeal luuranko oli lähes täydellinen(kuva 2 (b)), kun taas posterior spiracle oli 2 erotettu spiracular rakoja heikosti pigmentoitunut epätäydellinen peritreme(kuva 2 (f)). Kooltaan 3. instar oli suurin, pituudeltaan 12,18 ± 1,31 mm ja leveydeltään 2,32 ± 0,19 mm. Myös kehitysaika oli tässä vaiheessa pisin, ollen 84 ± 3 h (Taulukko 1). Alku-ja loppupuolen 3. instaarin kefalopharyngaaliset luurangot olivat samanlaiset (kuvat 2 (c) ja 2 (d), resp.). Varhaisen (kuva 2(g)) ja kolmannen vaiheen (kuva 2(h)) takimmaiset kierteet olivat samanlaisia: niissä oli 3 erillistä spirakulaarista rakoa ja täydellinen peritreme, jossa oli interslitoitu projektio, lukuun ottamatta jälkimmäistä, jossa oli erittäin pigmentoitunut peritreme (kuva 2(h)). Kaikkien kolmen instarsin erityispiirteet on tiivistetty taulukossa 2.

Pupa
H. ligurriensin pupaario oli tyypillisessä koarktaattimuodossa (kuva 3), ja sen mitta oli 6, 82 ± 0.Pituus 27 mm ja leveys 2,76 ± 0,11 mm (Taulukko 1). Havaitut värimuutokset paljastivat, että varhainen pupaario oli väriltään kermanvalkoinen (0 h) ja takapää edelleen typistetty (kuva 3(a)). Pupaarion väri muuttui kuitenkin vähitellen vaalean kellanruskeaksi 3 tunnin kuluessa puparisaatiosta(kuva 3 (b)) ja sitten ruskeaksi noin 15 tunnin kuluttua(kuva 3 (f)). Pupaarion väri muuttui tummanruskeaksi noin 18 tunnin tarkkailun jälkeen(kuva 3 (g)). 24 tunnin kohdalla pupaario näytti tummimman ruskeaa väriä(kuva 3 (i)). Koko kotelovaiheen kesto oli 152, 5 ± 30, 7 h (Taulukko 1).

(a)

(b)

(c)

(d)

(e)

(f)

(g)

(h)

(i)

(a)
(b)
(c)
(d)
(e)
(f)
(g)
(h)
(i)

Figure 3

Color changes in puparia of Hemipyrellia ligurriens up to 24 h after pupariation. Puparium (a)–(i) at 0, 3, 6, 9, 12, 15, 18, 21, and 24 h, respectively. Bars = 100 𝜇m for all figures.

puparian etu-ja takaosan havainto näytti vaalean kellanruskealta, kun sitä oli käsitelty 10-prosenttisella kaliumhydroksidilla. Etulevy, jota painettiin kansilipulla, oli puolisuunnikkaan muotoinen ja sen molemmissa yläpäissä oli 2 etummaista spiraalia(Kuva 4 (a)). Kussakin anteriorisessa spiraakkelissa oli 5-7 papillaa(Kuva 4 (b)). Kolmannessa segmentissä havaittu selkäranka näytti rivejä yksikärkisiä kärkiä(Kuva 4 (c)). Jokaisessa posteriorisessa spiraakkelissa oli kolme erittäin pigmentoitunutta tummanruskeaa spiraa, joissa oli erittäin pigmentoitunut nappi ja heikosti pigmentoitunut peritreme (Kuva 4(d)).

(a)

(b)

(c)

(d)

(a)
(b)
(c)
(d)

Figure 4

Puparium of Hemipyrellia ligurriens after treating with 10% KOH. (a) Anterior plate with trapezoid shape. (b) Anterior spiracle with 6 papillae. (C) selkärangan kuvio 3.segmentin osoittaa yhden pisteen kärki. D) Posterior spiracles. Bars = 100 𝜇m kaikissa luvuissa.

AIKUINEN
AIKUINEN H. ligurriens oli pituudeltaan 12, 23 ± 0, 61 mm, leveydeltään 2, 85 ± 0, 25 mm (Taulukko 1) ja ulkonäöltään metallinen kuparinvihreä, ja rintakehän etuosassa oli harmahtavan valkoista pölinoosia (kuvat 5(a) ja 5(b)). Naaraan pää oli dikoptinen, mutta uroksen pää oli subholoptinen (kuvat 5(c) ja 5(d)). Harmahtavaa naamapölytystä havaittiin molemmilla sukupuolilla (kuvat 5 (c) ja 5 (d)), ja koko kolmas tuntosarvijako oli vatsapuolelta tummanruskea tai oranssi(kuvat 5(c) ja 5 (d)). Squama oli vaalea (kuva 5 (e)). Gena oli mustien karvojen peitossa(kuva 5 (f)). Varren laskimossa ei ollut setuloja (kuva 5(g)). Rintakehästä löytyi kaksi postsuturaalista akrostichaalista setaa(kuva 5 (h)). Suprakonveksity todettiin pilose hiukset (kuva 5 (i)). Kaikki edellä mainitut ominaisuudet olivat tärkeitä tämän kärpäsen aikuisen tunnistamisessa.

(a)

(b)

(c)

(d)

(e)

(f)

(g)

(h)

(i)

(a)
(b)
(c)
(d)
(e)
(f)
(g)
(h)
(i)

Figure 5

Adults and important characteristics for identification of Hemipyrellialigurrien. (a) Dorsal view of the female. (b) Dorsal view of the male. (c) Frons of the female showing dichoptic eyes. (d) Frons of the male showing subholoptic eyes. (e) Poikittaiskuva aikuisesta, jossa näkyy valkeahkoja squamae-alueita (nuoli). (f) suurempi suurennos pään osoittaa mustia karvoja gena (nuoli). G) siipi, jossa on varren suoni ilman setuloja (nuoli). H) selkäpuolen rintakehä. (I) Pilose hiukset suprakonvexity (nuoli). Bars = 200 𝜇m kaikissa luvuissa.

3, 2. Kehitysnopeuden arviointi

H. ligurriensin kehitysnopeuden arviointi määritettiin tutkimusajanjakson aikana phitsanulokin provinssin luonnollisen ympäristön tilan perusteella. Toukkavaiheen kasvukäyrä osoitti sigmoidin muotoa (kuva 6). Tiedot kasvatuksen kehitysnopeudesta osoittivat, että kehitysaika vastakuoriutuneista toukista pupariaation alkuun kasvaa nopeasti yhteensä 108 tunnin aikana. toukat saavuttivat suurimman mediaanipituutensa ≈42 tunnin kohdalla, ja pupariaatio tapahtui 108 tunnin kohdalla. kaikkien vaiheiden elinajat on myös tiivistetty taulukossa 1.

4. Keskustelu

tiedot, jotka liittyvät hyönteisten tärkeisiin ominaisuuksiin, jotta ne voidaan tunnistaa ja kehittää nopeasti ja luotettavasti laboratoriossa, ovat olennaisia edellytyksiä asianmukaiselle soveltamiselle oikeuslääketieteellisissä tutkimuksissa. H. ligurriens on rikosteknisesti tärkeä puhalluskärpäslaji, joka on todettu oikeuslääketieteellisissä tapauksissa Malesiassa ja Thaimaassa . Tässä tutkimuksessa keskityttiin tärkeisiin ominaisuuksiin h: n kaikkien vaiheiden tunnistamiseksi. ligurrieenit, jotka perustuvat valomikroskoopilla tehtyihin havaintoihin ja kunkin vaiheen kehitysaikaan luonnollisessa ympäristössä, jossa keskilämpötila oli 26,7 ± 0,61°C ja suhteellinen kosteus 74 ± 3%. Vaikka H. ligurriensin joidenkin vaiheiden morfologiaa on tutkittu aiemmin pyyhkäisyelektronimikroskoopilla ja valomikroskoopilla , tämä tutkimus antoi tarkempaa tietoa erityispiirteistä ja uusia vihjeitä tunnistamiseksi yksinkertaisilla tekniikoilla, jotta rikosteknisen soveltamisen tarkkuus ja tarkkuus tulevaisuudessa paranisivat. Lisäksi tässä tutkimuksessa saatiin H. ligurriensin kehitysdataa, jota voidaan käyttää arvioitaessa niiden ruumiiden PMI-arvoa, joihin tämä kärpäslaji on asettunut.

Korioniveistos sekä keskialueen leveys ja pituus raportoitiin aiemmin tärkeäksi ominaisuudeksi kärpäsmunan tunnistamisessa . H. ligurriensin munan morfologia, joka havaittiin tässä tutkimuksessa värjäämällä 1% kaliumpermanganaatilla ja tarkkailemalla valomikroskoopilla, oli samanlainen kuin edellisessä työssä, jossa tutkittiin pyyhkäisyelektronimikroskoopilla . Siksi tämän tutkimuksen tulokset vahvistivat sukontason et al: n aloittaman värjäysmenetelmän tehokkuuden. , kärpäsen munien tunnistamista varten. Värjäytyneet munat voitiin havaita selvästi valomikroskoopilla. Vertailtaessa tietoja aiempiin tutkimuksiin H. ligurriensin munan koko tässä tutkimuksessa oli suurempi kuin muiden puhalluskärpästen, kuten Lucilia cuprinan, Ceylonomyia (= Chrysomya) nigripesin ja Aldrichina Grahamin, koko ei kuitenkaan eronnut chrysomya megacephalan ja Achoetandrus (= Chrysomya) rufifaciesin koosta . Erzinclioglun tietojen mukaan kärpäsmunan koko riippui ravinnon määrästä. Sen vuoksi kärpäsmunan tunnistamisessa tulee käyttää tärkeimpinä kriteereinä plastronin leveyttä, plastronin mikropyyliä ympäröivän alueen morfologiaa ja käyttökokoa täydentävinä tekijöinä munien tunnistamisessa .

viitteidemme perusteella tämä tutkimus oli ensimmäinen tutkimus, jossa näytettiin kefalofaryngeaalisen luurangon ja posteriorisen spiraakkelin morfologia kaikissa instar-toukissa valomikroskoopilla tarkkailemalla. Toukkien takaruumiin luurangot ja takaruumiin spiraasit nähtiin selvästi erilaisina jokaisessa instaarissa. Tutkimuksen tulokset olivat yhtäpitäviä aiempien raporttien kanssa . Lisäksi tämä tutkimus osoitti peritremen pigmenttiasteen jokaisessa instaarissa. Se voi olla Uusi johtolanka toukkien iän erittelyyn erityisesti varhaisen ja myöhäisen instaarin välillä. Koska jokainen kehitysvaihe on varmasti erilainen sekä pigmentaatioaste, tästä tutkimuksesta saatavat tiedot voivat olla hyödyllisiä tämän puhalluskärpäsen toukkavaiheiden ja-iän yksilöimisessä yksityiskohtaisesti edellä mainitulla tavalla.

pupaalivaiheen morfologiaa koskevassa tutkimuksessa saatiin samanlaiset tulokset kuin aiemmissa raporteissa . H. ligurriens puparian värimuutosten havainnoinnista saadut tulokset raportoitiin ensin tässä tutkimuksessa, ja ne voivat olla toinen Uusi tukeva näyttö ainakin puparian likimääräisen iän määrittämiseksi PMI-arvon tarkkuuden lisäämiseksi.

tässä tutkimuksessa osoitettiin joitakin valokuvia, joissa oli erityispiirteitä, joita käytettiin aikuisen H. ligurriensin tunnistamiseen. Nämä kuvat tämän tutkimuksen erityispiirteistä voivat olla hyödyllisiä ihmisille, jotka eivät tunne taksonomisten avainten terminologiaa. Nykyisen taksonomisen avaimen puhalluskärpäslajien tunnistamiseen Thaimaassa antoivat Kurahashi ja Bunchu . Nonentomologin paljain silmin AIKUINEN H. ligurriens näyttää ulkonäöltään samanlaiselta kuin A. rufifacies. Siksi virheellisen tunnistamisen mahdollisuus voi esiintyä molemmissa lajeissa, erityisesti Thaimaassa, koska A. rufifacies oli Thaimaan toiseksi hallitseva puhalluskärpäslaji, ja molempien lajien yhteensattumia havaittiin joissakin tämän maan provinsseissa .

Tämä tutkimus oli ensimmäinen raportti, joka antoi H. ligurriensin kehitysajan kaikissa vaiheissa. Tulokset osoittivat, että H. ligurriensin kehitysaika luonnollisissa olosuhteissa tässä tutkimuksessa (keskilämpötila 26,7 ± 0,61°C ja suhteellinen kosteus 74 ± 3%) oli nopeampi kuin C. megacephalan ja A. rufifaciesin, joita tutkittiin 27,4°C: n keskilämpötilassa . Lisäksi H. ligurriensin jokaisen vaiheen kehitysaika oli erilainen kuin C. megacephalan ja A. rufifaciesin. Kunkin lajin kehitysnopeus määriteltiin, vaikka ne kasvoivat samoissa tai samankaltaisissa olosuhteissa . Lisäksi pallokärpäslajin kehitysaikojen vaihtelua havaittiin maantieteellisesti erilaisissa populaatioissa . Paikallista populaatiosidonnaista kehitystietoa tarvitaan toukkien iän arvioimiseksi PMI: n määrittämiseksi. Tästä syystä tämän tutkimuksen tiedot ovat erittäin tärkeitä jatkokäyttöä varten erityisesti Phitsanulokin maakunnassa.

sekä morfologisten ominaisuuksien että kehitysajan perusteella saadut tiedot täyttävät aiemmat tiedot ja tarjoavat uusia tukevia todisteita tämän puhalluskärpäslajin tunnistamiseksi ja soveltamiseksi oikeuslääketieteellisessä tutkimuksessa, erityisesti silloin, kun H. ligurriensia esiintyy ihmisen ruumiissa. Lisäksi ne voivat tulevaisuudessa olla hyödyllisiä perustietoina sen biologian tutkimuksessa.

kiitokset

tätä tutkimusta tuettiin pääasiassa N. Bunchu lääketieteellisestä tiedekunnasta, Naresuanin yliopistosta ja toinen Thaimaan Tutkimusrahastosta (MRG5280194). Kirjoittajat myös kiittää Centre of Excellence in Medical Biotechnology, lääketieteellisen tiedekunnan, Naresuanin yliopisto, ja Division of Research Administration, Naresuanin yliopisto, tuesta ja kattamatta julkaisukustannuksia.