mikä on polyklonaalinen vasta-aine?
How to make polyklonal vasta-aineita
div>
polyklonaalinen vasta-aine on kokoelma moniimmunoglobuliineja, joista jokainen on tuotettu eri B-solukloonista. Nämä vasta-aineet kohdistuvat eri epitoopeihin eli sitoutumiskohtiin yhteen antigeeniin. Useiden B-solujen kloonien johtaminen ja sen jälkeen useiden epitooppien kohdistaminen erottaa polyklonaaliset vasta-aineet monoklonaalisista vasta-aineista.
polyklonaalisten vasta-aineiden valmistaminen
kaikki polyklonaaliset tai monoklonaaliset vasta-aineiden muodostus alkaa immuunivasteen aikaansaamisella, jota kutsutaan immunisaatioksi. Aiotut kohteet ruiskutetaan isäntään, immuunijärjestelmä tunnistaa ne vieraiksi, ja vasta-aineet kohdistetaan immuunijärjestelmän tukkeutumiseen tai puhdistumaan. Immuunivasteen epäonnistuminen vaatisi adjuvanttien, immunogeenisten aineiden, kuten Freundin adjuvantin tai keyhole-limpetin hemosyaniinin (KLH), käyttöä immuunijärjestelmän rekrytoinnin edistämiseksi. Immunisaatio käsittää suurimman osan siitä, mitä tarvitaan polyklonaalisten vasta-aineiden muodostamiseen. Tyypillinen immuunivaste on esitetty alla.
vasta-aineiden valmistaminen alkaa immunisaatiolla
Alkurasitus primaariselle Immuunivasteelle
isäntäaltistus antigeenille sopivilla adjuvanteilla altistusta kutsutaan ”Prime” – immunisaatioksi. Tyypillisiä altistustapoja ovat injektio ihoon, vatsakalvoon, ihonalaiseen kerrokseen tai lihakseen. Harvinaisempia vaihtoehtoja ovat oraalinen ja intranasaalinen anto.DNA-immunisaatio on myös kehittymässä oleva teknologia myrkyllisten tai muuten vaikeasti tuotettavien antigeenien tuottamiseksi. Myöhempää altistumista antigeenille kutsutaan” boost ” – immunisaatioksi.
antigeenin käsittely antigeenia esittävillä soluilla
makrofagit, dendriittisolut (DC) ja vähäisemmässä määrin B-solut, kaikki antigeenia esittävät solut (APCs) internalisoivat antigeenin endosytoosilla tai fagosytoosilla. Antigeenin käsittely pilkkoo antigeenin pienemmiksi paloiksi, jotka sitten siirretään APC: n pinnalle.
B-solujen
APCs: n pinnalla olevan antigeenin tunnistaminen saa aikaan stimuloivien signalointimolekyylien, sytokiinien, vapautumisen auttaja-T-soluista. Nämä sytokiinit aktivoivat B-soluja, jotka myös tunnistavat antigeenin B-Solureseptorinsa (BCR) kautta. Jotkin B-solut eivät tarvitse auttaja-T-solujen aktivaatiota BCR-antigeeniyhteisvaikutuksen jälkeen, vaan ne tuottavat yleensä nopeamman immuunivasteen pienemmällä affiniteetilla. Auttaja-T-solujen mukanaolo on ratkaisevan tärkeää täydellisen immuunivasteen sekä itsen sietokyvyn säätelyssä.
B-solujen proliferaatio ja vasta-aineiden eritys
aktivoidut B-solut jakautuvat muodostaen sekä muistin B-solu-että plasmasolupopulaatioita. Molemmat solutyypit tunnistavat saman epitoopin. Plasmasolut erittävät vasta-aineita seerumiin immuunitunnistusta varten muistin B-solujen säilyessä pidempään, mikä antaa nopean vasteen saman antigeenin sekundaariselle altistumiselle.
immuunivasteen mittaaminen
vasta-ainetasojen mittaaminen immunisaatioprosessin aikana on tarpeen edistymisen arvioimiseksi. Anelisa kohde-antigeenia vastaan vertaa immunisoituja seeruminäytteitä ennalta immunisoituihin seeruminäytteisiin, jotka paljastavat immunisaation aikaansaaman immuunivasteen asteen. Näytteiden sarjalaimennokset määrittävät vasta-aineen titterin. Tyypillisesti 1:64 000 titteriä katsotaan vahvaksi immuunivasteeksi ja riittäväksi etenemään seerumin saantiin tai lymfosyyttien fuusioon. Alemmat tiitterit voivat vaatia myöhempiä tehosterokotuksia, vaihtoehtoisia antoreittejä tai muita adjuvantteja.
polyklonaalinen vasta-ainetuotanto seerumissa
polyklonaalinen vasta-ainetuotanto edellyttää vain veren talteenottoa isäntäeläimestä ja solufraktion erottamista erittyviä vasta-aineita sisältävästä seerumifraktiosta. Koska useat aktivoidut B-solut erittävät monia antigeenispesifisiä vasta-aineita, veriseerumi sisältää eri vasta-ainekloonien monia tuotteita, tästä nimitys polyklonaalinen vasta-aine. Erityisesti useiden kloonisten vasta-aineiden muodostuminen yhtä antigeenia vastaan saavutetaan sekä käsittelemällä antigeenia fragmenteiksi että jokaisella fragmentilla on pienempiä alueita, joita kutsutaan epitoopeiksi. Jokainen voidaan tunnistaa erityisiä BCRs. Erilliset B-Solupopulaatiot erittävät spesifisiä, mutta eri vasta-aineita samaa antigeenia vastaan. Lisäksi seerumi sisältää paitsi vasta-aineita aiottua kohde-antigeenia vastaan, myös kaikkia muita immunoglobuliineja muita kohteita, lääkkeitä, hormoneja jne.vastaan. ne ovat seerumissa. Seerumia voidaan käyttää suoraan molekyylibiologian koettimena, mutta se vaatii usein lisäpuhdistusta tietyn määrityksen herkkyyden ja spesifisyyden lisäämiseksi. Affiniteettipuhdistus saavuttaa vasta-aineiden palautumisen vaihtelevassa määrin riippuen alla esitetystä tekniikasta, mutta yksikään niistä ei saavuta monoklonaalisen vasta-aineen epitooppitason spesifisyyttä.
| Affinity Purification Technique | Pro | Con |
|---|---|---|
| Protein A/G | Simple, Cost effective | Recovers all immunoglobulin. |
| Antigen Specific | Recovers only antigen specific antibody. | vaatii ei-triviaalin määrän antigeenia. |
Polyclonal Antibody Applications
| Application | Polyclonal AntibodyUse Rationale |
|---|---|
|
ELISA Detection Antibody
(direct, indirect, sandwich, and capture ELISA formats) |
Binds multiple epitopes to deliver many detection molecules.
|
|
ELISA Capture Antibody
|
Polyreactivity can maximally recover antigen from samples.
|
|
Western Blot
Detection Antibody |
Multiple epitope recognition can allow for antigen changes (denaturing/linearizing).
|
|
Target recognized by many Ab for maximal drug delivery, immune recruitment, blocking, or activation.
|
|
|
kliiniset testit
|
mahdollisesti lisääntynyt havaitsemiskyky.
|
Polyklonaaliset vasta-aineisiin liittyvät palvelut
Polyexpress™ – palvelumme on kustannustehokas ja nopea tapa valmistaa omia molekyyliluotaimia. Antigeenisekvenssistä luovutettuihin vasta-aineisiin 45 päivässä taattu. Etsitkö vielä enemmän kontrollia vasta-aineiden kehittämiseen? Tutustu myös muihin vasta-ainepalveluihimme:
- DNA-immunisaatiot, erikoisalamme. Vasta-aineiden kehittämishankkeen aloittamiseen. Kiertää proteiiniantigeenin tuotantoa in vitro ja käsittelee vaikeita kohteita.
- MonoExpress™ Antibody Service-palvelussa on alan johtavia sovellustakuita, jotka takaavat menestyksen määrityksissäsi.
- Anti-idiotyypin vasta-aineet tekevät terapeuttisten vasta-ainelääkkeiden PK-eli PD-testauksen helpoksi. Ne havaitsevat vain kohde-vasta-aineen CDR: n.
12 vuoden kokemuksella räätälöityjen vasta-aineiden kehittämisestä projektisi on asiantuntevissa käsissä. Hanki tarjous tänään!
Lainaukset ja tilaaminen
Asiakaspalvelumme edustajat ovat käytettävissä 24 tuntia vuorokaudessa, maanantaista perjantaihin.