In: Recent Advances in Small Animal Reproduction, P. W. Concannon, G. England and J. Verstegen (toim.) Julkaisija: International Veterinary Information Service (www.ivis.org), Ithaca, New York, Yhdysvallat.

Koiran kohdunsisäinen keinohedelmöitys skandinaavista kohdunkaulan katetria käyttäen ja vertailu muihin menetelmiin ( 2-helmi-2001)

C. Linde-Forsberg

Eläinlääketieteellinen tiedekunta, synnytysopin ja gynekologian laitos, Ruotsin maataloustieteellinen yliopisto, Uppsala, Ruotsi

Johdanto

kiinnostus koirien siemennesteen säilömiseen ja keinosiemennykseen (AI) kasvaa jatkuvasti maailmanlaajuisesti, mutta silti tällä alalla julkaistaan vuosittain verrattain vähän tutkimuksia, ja on erityisen vaikeaa löytää tietoa keinosiemennyksistä, joissa käytetään tuoretta siemennestettä tai siemennestettä, joka on säilötty erilaisilla jäähdytys -, jäädytys-ja sulatusmenetelmillä, ja myös vertailla tuloksia, kun eri keinosiemennystekniikoita käytetään. Yksi syy tietojen niukkuuteen on se, että kokeellisten tutkimusten tekeminen koirilla on kallista, ja harva tutkimuskeskus pystyy pitämään riittävän suuria koirayhdyskuntia tällaisia tutkimuksia varten. Toinen syy on se, että suurin osa suurista yrityksistä, jotka käsittelevät ja jakavat koiran siemennestettä koirankasvattajille, työskentelevät puhtaasti kaupallisin perustein, ja vaikka jotkut niistä näyttävät pitävän kirjaa tuloksistaan, näitä tuloksia ei julkisteta, eikä jatkeiden koostumusta tai siemennesteen säilymismenetelmiä. Näin saatu tieto jää siis eri yhtiöille, eikä siitä ole hyötyä tiedemaailmalle eikä siten myöskään koirankasvattajille yleensä. Ainoa tutkimukset koiran keinosiemennys raportointi hedelmällisyyteen tulokset suuri määrä keinosiemennykset ovat ne Seager et al., on 156 jäädytetty-sulatettu siemennesteen AIs käyttäen emättimen laskeumaa, Linde-Forsberg & Forsberg on 470 ja 527 AIs vastaavasti, käyttäen sekä tuoretta, jäähdytetty laajennettu ja jäädytetty-sulatettu siemennesteen ja emättimen sekä kohdunsisäisen AI, Linde-Forsberg et al., jäsenen 327 jäädytetty-sulatettu siemennesteen AIs, vertaamalla emättimen ja kohdun AI, Linde-Forsberg raportointi 2041 AIs tuoretta ja jäähdytettyä laajennettu, ja jäädytetty-sulatettu siemennesteen ja käyttämällä sekä emättimen ja kohdun AI, ja Thomassen et al., on 312 jäädytetty-sulatettu pääasiassa kohdunsisäinen AIs. Koirien keinosiemennyksen onnistumisasteen määrittämisessä on useita tekijöitä, kuten milloin ja kuinka monta kertaa nartun kiima-aikana tekoäly suoritetaan, siemennesteen laatu ja käsittely sekä keinosiemennystekniikka. Lisätietoja näistä seikoista on mainituissa lähteissä. Tässä asiakirjassa käsitellään vain keinosiemennystekniikoita ja siemennesteen laskeuman vaikutuksia. Viimeaikaiset kliiniset tutkimukset ovat korostaneet merkitystä kohdunsisäisen toisin kuin emättimensisäisen keinosiemennyksen koiran ja ovat ensimmäinen osoittaa huomattavasti parempia tuloksia, kun siemenneste talletettiin kohtuun sijaan emättimeen. Tutkimuksessa Linde-Forsberg et al. kohdunsisäisen frozenthawed-siemennesteen synnyttämisaste oli 84,4% verrattuna 58: aan.9%: lla käytettiin emättimen laskeumaa, ja keskimääräinen poikuekoko oli 5, 4 + 3, 0 verrattuna 4, 0

+2, 7 poikasta/poikue (p<0, 001). Hedelmällisyystiedot vuodelta 2041 keinohedelmöityksistä ovat ruotsalaisille nartuille vuosina 1990-1998 tehtyjä koiria, jotka on ilmoitettu Kennelliitolle 2 viikon kuluessa (ts. ennen raskaustestiä olisi voitu tehdä tulosten puolueellisuuden välttämiseksi), osoitti, että merkittävästi suurempia poikimisasteita ja poikuekokoja saatiin paitsi jäädytetyllä sulatetulla siemennesteellä myös tuoreella ja jäähdytetyllä pidennetyllä siemennesteellä, kun siemenneste oli talletettu kohtuun eikä emättimeen (Taulukko 1).

tuoreen siemennesteen tulokset, jotka on esitetty taulukossa 1, ovat hieman liian korkeat, koska 11% nartuista oli eri syistä keinosiemennyksen lisäksi myös astutettu. Yleisin syy tähän oli se, että kasvattajat yrittivät paritella narttuja liian aikaisin kiima-aikana ja kun koirat eivät suostuneet parittelemaan, niiden omistajat pyysivät tekoälyä. Myös astutetun ryhmän poikueprosentti oli peräti 84,5%, jolloin keskimääräinen poikuekoko oli 6,0 + 2,8 poikasta, kun taas vain keinotekoisesti keinosiemennettyjen narttujen poikueprosentti oli 48,9% ja keskimääräinen poikuekoko 5,8 + 2,8 poikasta. Näyttää siis siltä, että monet AIs, jotka suoritetaan tuoretta siemennestettä todella tehdään ei-optimaalinen aika aikana estrus, yleensä koska kasvattajan kokemattomuus, mutta suhteellisen huono tulos on todennäköisesti myös siksi, että AI on pyydetty, koska erilaisia ongelmia koirilla. Ruotsalaistiedot kuitenkin osoittavat selvästi, että koiralla kohdunsisäinen tekoäly parantaa merkittävästi poikimisnopeutta ja pentueen kokoa. Kohdunsisäisen tekoälyn synnyttämisaste nousi tuoreesta siemennesteestä 36 prosentista pakastetun sulatetun siemennesteen 50 prosenttiin verrattuna emättimen tekoälyyn. Kohdunsisäisen keinoälyn osalta keskimääräinen poikuekoko kasvoi 0,3 poikasta per poikue, kun kyseessä on pakastettu siemenneste, ja 0,6 ja 0,7 pentuetta kohti, kun kyseessä on tuore ja jäähdytetty laajennettu siemenneste. Tässä yhteydessä on myös mielenkiintoista huomata, että koiraa pidetään lajina, jolla on kohdunsisäinen siemennesteen Laskeuma luonnollisessa parittelussa, koska siihen mennessä, kun paritteluside on ohi, siittiöt ovat saavuttaneet oviductsin . Siittiöiden rikas fraktio ejakuloidaan intromissiossa ja kopulatorisen solmion varhaisessa vaiheessa, ja sitä seuraa suuri määrä eturauhasen nestettä, joka välittömästi huuhtoo spermatozoa kapeasta kallon emättimestä kohdunkaulan kautta kohdun runkoon ja sarviin. Emätin näyttää tarjoavan epäedullisen ympäristön koiran siittiöille, koska suuri osa menettää häntänsä muutamassa minuutissa kallon emättimeen laskeuman jälkeen . On myös osoitettu , että noin 10 kertaa niin paljon siittiöitä tarvitaan saada samanlaisia tuloksia emättimen AI kuin kohdunsisäinen AI tuoretta siemennestettä, sekä jäädytettyä sulatettua siemennestettä . On siis monia tekijöitä, jotka edistävät huonompi tuloksia intravaginal siemennesteen laskeuman verrattuna kohdunsisäistä laskeumaa.

menetelmät kohdunsisäisen tekoälyn suorittamiseksi koiralla.

kohdunsisäinen AI koiralla voidaan tehdä transkervisesti joko skandinaavisen (tai norjalaisen) katetrin avulla tai jäykän kuituoptisen emättimen endoskoopin avulla visualisoida kohdunkaula ja koiran virtsakatetrin poikittaiseksi. Kohdunsisäinen AI voidaan toteuttaa myös invasiivisia menetelmiä, kuten laparoscopy, tai koko vatsan leikkaus. Joissakin maissa jälkimmäiset menetelmät voivat olla laittomia tai niitä ei pidetä eettisesti hyväksyttävinä.

kohdunkaulan tunnustelu

koiran tekoälyn harjoittajan on ehdottoman tärkeää oppia löytämään kohdunkaula vatsan tunnustelun avulla, jotta siemenneste voidaan sijoittaa oikeaan paikkaan ja jotta narttu ei vahingoitu. Nartulla tulee olla tyhjä vatsa ja rakko toimenpiteen helpottamiseksi. Koulutuksessa suositellaan käytettäväksi kertakäyttöisiä koiran emättimen TEKOÄLYKATETREJA (Minitüb GmbH, Tiefenbach, Saksa) (Kuva. 1).

kuva 1. Kolme kokoa Scandinavian keinosiemennyskatetrin koirille, ja muovinen kertakäyttöinen emättimen keinosiemennyskatetri.

koska nartun ureteraalinen aukko sijaitsee lantion reunassa, on TEKOÄLYKATETRIN eli ohuen jäykän endoskoopin joutuminen vahingossa virtsarakkoon yllättävän helppoa. Sen lisäksi, että rakon lävistämiseen katetrilla liittyy vaaroja, on ilmeistä, että tekoälyn jälkeen ei tulisi raskautta. Katetrin oikea asento on siis aina tarkistettava tunnustelemalla ennen siemennesteannoksen tallettamista. Jos katetri on virtsarakossa, emättimen kallo-osa ja kohdunkaula voidaan palpoida katetrin yläpuolelle. Virtsarakon seinät ovat yleensä ohuemmat kuin emättimen, ja katetrin kärki erottuu selvemmin kuin jos se olisi emättimessä. Kohdunkaulan tunnustelemiseksi nartun emättimeen tuodaan TEKOÄLYKATETRI. Käyttöönotto katetrin helpottuu, jos vulva on koholla, kunnes se on juuri peräaukon alapuolella (kuten silloin, kun narttu edustaa uroskoira). Kun katetrin kärki otetaan käyttöön niin pitkälle kuin välittömästi kallon lantion reunalle, se on tunnusteltava. Kraniaalisesti emättimen useimmat nartut rinteet hieman alaspäin. Joillakin roduilla, erityisesti näkökoirilla, joilla on hyvin kaareva kupe, emättimessä on kuitenkin dorsaalisempi suunta. Katetrin kallonpää on nyt laskettava lähemmäs vatsan seinämää, jotta tunnustelu olisi helpommin saavutettavissa. Kun katetrin kärki voidaan tunnustella ja sen oikea asento emättimessä siten tarkistaa, sitä lisätään varovasti edelleen, jatkuvassa tunnustelevassa valvonnassa, kunnes se saavuttaa paracervical-alueen. Tämä on kapea, kallon osa emättimen luoma dorsal, mediaani post-kohdunkaulan kertaiseksi ja voidaan tunnustella 1-2 cm pitkä, kiinteä rakenne. Se päättyy kohdunkaula, joka narttu estrus on 0,5-1,5 cm kova, pyöristetty-to-ovoid vapaasti liikuteltava rakenne. Skandinaavisen katetrin ulompaa suojavaippaa, jonka halkaisija on 10 mm, ei yleensä ole mahdollista siirtää paracervical-alueelle. Myös ohuempi Muovinen TEKOÄLYKATETRI, jonka halkaisija on 5 mm, voi olla liian leveä tuodakseen paracervical-alueelle joillakin nartuilla, erityisesti pienemmillä roduilla, tai niillä, jotka eivät ole synnyttäneet pentuetta. Kun kohdunkaula on tunnistettu corpus kohtu ja kohdun sarvet voidaan tunnustella edessä tämän rakenteen. Laske katetrin kärki ja sulje sitten peukalon kärki katetrin yläpuolella olevaa etusormea vasten ja nosta katetrin kallonpää siten, että kohdunkaula ja kohdun sarvet vedetään sormien välistä ylöspäin. Niiden koko ja johdonmukaisuus tulevat sitten ilmi. (Tämä menetelmä tunnustelemalla kohtu on myös erittäin hyödyllinen raskauden alkuvaiheessa havaitsemiseen ja tutkia nartut epäillään pyometra).

kohdunsisäinen keinohedelmöitys käyttäen skandinaavista katetria

skandinaavinen katetri koostuu 1-2 mm leveästä teräskatetrista, jossa on 0.75 mm-1 mm halkaisija kärki, ja tulee kolme eri pituudet: 20, 30 tai 40 cm. Sitä käytetään yhdessä halkaisijaltaan 10 mm: n ulomman suojaavan nailonvaipan kanssa (kuva. 1 ja kuva. 2). Keskikokoinen katetri sopii useimmille pienille ja keskisuurille nartuille. Varusteita saa Norwegian Fur Breeders ’ Association, P. O. Box 136, Økern, n-0509 Oslo 5, Norja.

kuva 2. Lähikuva kahden koon vinkkejä Scandinavian AI katetrin koirille.

kohdunsisäinen tekoäly skandinaavisella katetrilla tehdään nartun seistessä lattialla tai pöydällä. Sedaatio on hyvin harvoin tarpeen; päinvastoin, useimmat estrus nartut vapaasti hyväksyä tällaista käsittelyä. Jos Kevyt sedaatio on tarpeen esimerkiksi erittäin kookkaalle, lihavalle tai hermostuneelle nartulle, voidaan käyttää 1-3 mg/kg xylatsiinia IM tai IV. Sisempi teräskatetri, jonka kärki on nailonvaipan sisällä ja suojattu, tuodaan emättimeen. Nailonvaipan kallonpää tunnustelee lantion reunan edessä kuten aiemmin on kuvattu. Jos katetrin vaipan kärki on laskettu lähemmäs vatsan seinämää, kohdunkaula löytyy yleensä muutaman senttimetrin edestä ja yläpuolelta. Tämän jälkeen teräskatetri johdetaan vaipan läpi, kunnes sen kärki saavuttaa ventraalisen fornixin. Kohdunkaula on kiinnitetty peukalon ja etusormen väliin, ja kohdistamalla hieman alaspäin veto korpuksen kohdalta, sitä kallistetaan niin, että kohdunkaulan kanavan kulma muuttuu vaakasuorammaksi (Kuva. 3).

kuva 3. Kaavamainen piirros koiran paracervical alueella ja kohdunkaulan kanava, Skandinavian katetri asennossa kallon emättimessä. Manipuloimalla kohdunkaula ja corpus kohtu kulma kohdunkaula muutetaan saada kohdunkaulan kanava paremmin linjassa kärki katetrin helpottaa katetroinnin.

tämän jälkeen katetrin kärki vedetään varovasti ulos samalla, kun se painetaan toistuvasti kohdunkaulan pintaa vasten etsiessään kaulakanavan aukkoa. Tunne, kun tämä aukko löytyy, voidaan useimmissa tapauksissa kuvata rustoa koskettavan tunteen tunteeksi, eli ”rapeaksi”. Kun aukko on löytynyt, kiinnitä katetri ja aloita kohdunkaulan työntäminen katetria vasten. Kaulakanava on 5-10 mm pitkä, eikä aina täysin suora. Näin ollen, hieman painetta voidaan soveltaa, kun pyörittämällä katetrin helpottaa sitä läpi. Useimmilla nartuilla katetrin kärki voi helposti tuntua kohdunkaulan edessä corpus uterissa. Joillakin nartuilla tunne ei kuitenkaan ole yhtä selvä. Siemennestettä sisältävä ruisku liitetään katetriin ja siemenneste infusoidaan hitaasti kohtuun. Joskus on resistenssi infuusio riippuen siitä, onko aukko katetrin painaa vasten kohdun limakalvon limakalvoa. Kevyt alaspäin veto corpus uterin tai kohdunkaula yleensä lievittää tilannetta ja mahdollistaa siemennesteen infuusio. Tarkistaa, että katetri todella on kohdussa narttu 1-2 ml fysiologista suolaliuosta voidaan infusoida. Jos katetri on oikeassa asennossa kohdun elin neste voidaan helposti infusoida. Jos taas katetri on paracervical alueella, siellä on lähes välitön takaisinvirtaus suolaliuosta katetrin ja nylon vaippa. Katetri poistetaan ja nartun takaneljännekset nostetaan ylös ja narttu pidetään tässä asennossa 5 – 10 minuuttia tekoälyn jälkeen siemennesteen takaisinvirtauksen minimoimiseksi ja siittiöiden kohtukuljetuksen helpottamiseksi ovidukteja kohti . Narttu on myös höyhenpeitteinen ympäri välilihan alueella, koska tämän uskotaan stimuloivan kohdun supistuksia. Tämän tekniikan oppiminen vaatii jonkin verran harjoittelua, mutta kun se on opittu, se on nopea menetelmä, joka yleensä saavutetaan muutamassa minuutissa. On suositeltavaa, että aluksi urkunäytteitä hankitaan koulutusta ja anatomista tutkimusta varten. Se on myös etu, jos varsinkin ensimmäiset yritykset tehdään nartuilla, jotka ovat synnyttäneet yhden tai useamman pentueen, koska ne ovat yleensä paljon helpompia katetroida. Perforaatioita voi esiintyä, jos katetri otetaan käyttöön sokkona tai voimalla. Edellyttäen, että katetrointi suoritetaan huolellisesti tunnustelevassa valvonnassa, tekniikka on kuitenkin täysin turvallinen nartulle. Jotkut nartut ovat vaikeammin katetroitavissa, erityisesti ne, jotka kuuluvat joihinkin jättiläisrotuihin, sekä lihavat tai hermostuneet Eläimet. Skandinaavisen katetrin käyttö vain 2-3, 5% kohdunsisäisen katetroinnin yrityksistä epäonnistui . Tuloksena syntyvä määrä käyttäen jäädytettyä sulatettua siemennestettä on raportoitu olevan 84.5%, ja 71%, kun suoritetaan ammattitaitoisten keinosiementäjät, keskimäärin 65% tuoreella ja jäähdytetyllä siemennesteellä ja 52% pakastetulla sulatetulla siemennesteellä, suuremmassa kenttätutkimuksessa, johon osallistuu myös vähemmän kokeneita keinosiementäjiä (Kuva. 1). Tätä tekniikkaa voidaan käyttää myös kohdunsisäiseen varjoaineen infuusioon nartun hysterografista tutkimusta varten .

kohdunsisäinen keinohedelmöitys kohdunkaulan endoskooppisella visualisoinnilla

transkervinen kohdunsisäinen keinohedelmöitys voidaan tehdä myös jäykän kuituoptisen endoskoopin ja virtsa-tai angiografiakatetrin avulla seisovalle nartulle ja ilman sedaatiota (Kuva. 4 ja kuva. 5).

kohdunsisäisen keinosiemennyksen käyttäen laparoskopiaa

vatsan laparoskopian tulisi tarjota jonkin verran hyväksyttävämpi vaihtoehto koiran tekoälyn täydelliselle leikkaukselle. Tekniikkaa ovat kuvanneet muun muassa Wildt and Silva et al. . Tekoäly on raportoinut 60-73% tiineydestä laparoskopian avulla , mutta nartut olivat näissä tutkimuksissa harvassa.

kohdunsisäistä Keinohedelmöitystä, jossa käytetään leikkausta

kohdunsisäistä keinohedelmöitystä on raportoitu . On käytetty erilaisia kirurgisia toimenpiteitä, joissa narttu nukutetaan yleisanestesiassa ja selkä toipuu. Ventraalinen vatsa leikataan, ja rutiininomaisen kirurgisen valmistelun jälkeen tehdään 4 -6 cm: n viilto pubiksen ja navan puolivälissä linea alban läpi. Kohtu kohotetaan viillon kautta,ja siemennestettä sisältävän ruiskun neula työnnetään kohdun rungon lumeniin 45o-kulmassa neulan viiste ylöspäin. Siemenneste ruiskutetaan hitaasti kohtuun. Sen pitäisi virrata helposti ja kohdun sarvet ovat selvästi pullistuneet, tai muuten neula tulee Asettaa uudelleen. Kun neula on vedetty ruiskusta, pistoskohdan päällä pidetään kostutettua suolaliuosta. 1 minuutin kuluttua sideharso poistetaan, kohtu korvataan vatsaan ja haava suljetaan rutiinimenetelmällä. Siemennesteen takaisinvirtauksen välttämiseksi narttu tulee asettaa selkä koholla, kun se toipuu nukutuksesta . Noin 60% tiineisyydestä on raportoitu koiralla kirurgisen tekoälyn jälkeen , mutta kuten laparoskooppisen tekoälyn tulokset perustuvat rajallisiin kokeellisiin tutkimuksiin eikä kenttätietoja ole saatavilla arviointia varten kummallakaan menetelmällä. On kyseenalaista, onko eettisesti hyväksyttävää turvautua leikkaukseen raskauksien saavuttamiseksi. Vaikka jotkut kannattavat menetelmää, monet pitävät sitä epäeettisenä ja sietämättömän stressaavana nartulle. Infektioriskit jne. liittyy kirurgiaan yleensä ja rajallinen määrä kirurgisia tekoälyjä, jotka voidaan suorittaa tietyn narttu ovat kaksi selvää haittaa. Menetelmä on myös kallis ja aikaa vievä.

1. Seager SWJ, Platz CC, Fletcher WS. Hedelmöitysprosentit ja niihin liittyvät tiedot käyttäen pakastettua koiran siemennestettä. J Reprod Fertil 1975;45: 189-192.

2. Linde-Forsberg C, Forsberg M. koirien hedelmällisyys suhteessa siemennesteen laatuun sekä keinosiemennysaikaan ja-paikkaan. J Reprod Fertil 1989;39 (Suppl): 299-310. PubMed –

3. Linde-Forsberg C, Forsberg M. Tulokset 527 kontrolloidusta keinohedelmöityksestä koirilla. J Reprod Fertil 1993;47 (Suppl): 313-323. PubMed –

4. Linde-Forsberg C, Ström Holst B, Govette G. Vertailu hedelmällisyyttä tietoja emättimen vs kohdunsisäinen keinohedelmöitys frozen-sulatetun koiran siemennesteen: retrospektiivinen tutkimus. Theriogenology 1999;52: 11-23. PubMed –

5. Linde-Forsberg C. Hedelmällisyystiedot vuodelta 2041 kontrolloiduista keinohedelmöityksistä koirilla. Julkaisussa: Proceeding of the 4th Int Symp Canine Feline Reprod, Oslo, 2000, 120 s.(abstr.)

6. Thomassen R, Farstad W, Krogenaes, A, Fougner, J. A. ja Andersen Berg K. Keinohedelmöitys pakastetulla siemennesteellä koiralla. Retrospektiivinen tutkimus. J Reprod Fertil 2001, in press.

7. Tsutsui T, Kawakami E, Murao i, et al. Siittiöiden kuljetus nartun lisääntymiskanavassa: havainnot kohdun fistelien kautta. Jpn J Vet Sci 1989; 51: 560-565. PubMed –

8. Linde-Forsberg C. keinosiemennys koiran tuoreella, jäähdytetyllä pidennetyllä ja pakastetulla sulatetulla siemennesteellä. Seminaarit Vet Med Surg (Small Animal) 1995;10: 48-58.

9. Tsutsui T, Tezuka T, Shimizu T, Murao I, Kawakami E, Ogasa A. Beagle-narttujen keinosiemennys tuoreella siemennesteellä. Jpn J Vet Sci 1988; 50: 193-198.

10. Andersen K. keinosiemennys pakastetulla koiran siemennesteellä, joka perustuu uuteen keinosiemennystekniikkaan. Zuchthyg 1975;10: 1-4.

11. Linde C. röntgensäteilyä läpäisevän nesteen kuljetus kohtuun emättimen laskeuman jälkeen kiimaisessa nartussa. Acta vet scand 1978; 19: 463-465.

12. Funkquist B, Lagerstedt A-S, Linde C, Obel N. Hysterography in the bitch. Vet Radiol 1985; 26: 12-18.

13. Wilson M. ei-kirurginen kohdunsisäinen keinohedelmöitys nartuilla pakastettua siemennestettä käyttäen. J Reprod Fertil 1993; 47 (Suppl): 307-311. PubMed –

14. Battista M, Parks J, Concannon PW. Koiran siittiöiden jälkisulatuksesta selviytyminen jäätymisen jälkeen pillejä tai pellettejä käyttäen putkia, laktoosi, tris tai testin jatkeet. Julkaisussa: Proceedings of the 11th Int Congr Anim Reprod and AI, Dublin 1988; 3: 229-231.

15. Wildt DE. Laparoskopia. In: Burke TJ, toim. Pieneläinten lisääntyminen ja hedelmättömyys. Philadelphia: lea & Febiger, 1986; 121-140.

16. Silva LDM, Onclin K, Snaps F, Verstegen JP. Laparoskooppinen kohdunsisäinen keinohedelmöitys narttu. Theriogenology 1995;43: 615-623.

17. Silva LDM, Verstegen JP. Vertailuja kolmen eri extenders koiran kohdunsisäinen keinohedelmöitys jäädytetty-sulanut spermatozoa. Theriogenology 1995;44: 571-579.

18. Silva LDM, Onclin K, Lejeune B, Verstegen JP. Narttujen intravaginaalisen ja kohdunsisäisen keinosiemennyksen vertailu tuoreeseen tai pakastettuun siemennesteeseen. Vet Rec 1996;138: 154-157. PubMed –

19. Smith FO, Graham EF: cryopreservation of canine siemenneste: Technique and performance. Julkaisussa: Proceedings of the Xth Int Congr Anim Reprod and AI, Champaign-Urbana 1984;2: 216.

20. Hutchisonin Matkailuauto. Emätin & kirurginen siemennesteen kohdunsisäinen Laskeuma. Julkaisussa: Proceedings of the Canine Theriogenology Short Course 1993; 33-37.

21. Hutchisonin Matkailuauto. Maksimointi käsitys hinnat käyttäen tuoretta jäähdytettyä tai jäädytettyä koiran siemennestettä. Julkaisussa: Proceedings of the Canine Male Reprod Symp 1997; 61-70.