| mag vs resolution | working distance | monocular parts | care of the microscopes |
| monocular focusing | oil immersion | measuring field diameter | binocular parts | binocular focusing | PDF version| Microscopy Exercises |

A. Johdanto

tyypillinen valomikroskooppi (Kuva.1) pystyy lisäämään kykyämme nähdä yksityiskohtia 1000 kertaa niin, että niinkin pienet kohteet kuin 0,1 mikrometriä (um) tai 100 nanometriä (nm) voidaan nähdä. Elektronimikroskoopit laajentavat tätä aluetta entisestään, jotta voimme nähdä kohteita, jotka ovat halkaisijaltaan 0,5 nm tai noin 1/200, 000 th koko, jonka voimme nähdä paljain silmin. On sanomattakin selvää, että mikroskooppien kehittäminen ja käyttö on parantanut valtavasti ymmärrystämme soluista ja niiden rakenteesta ja toiminnasta.

Kuva 1. Binokulaarinen yhdistelmämikroskooppi.

B. suurennos, resoluutio ja työskentelyetäisyys

suurennos on yksinkertaisesti funktio, jolla esine saadaan näyttämään isommalta, kuten käytettäessä käsilinssiä painetun sanan suurentamiseen. Pelkkä esineen suurentaminen ilman samanaikaista nähtyjen yksityiskohtien määrän lisäämistä ei anna katsojalle hyvää kuvaa. Mikroskoopin (tai silmän) kyky nähdä yksityiskohtia on sen erotuskyvyn funktio. Ratkaisuvoima määritellään kahden kohteen väliseksi vähimmäisetäisyydeksi, jolla kappaleet voidaan vain erottaa toisistaan erillisinä, ja se on käytetyn valon aallonpituuden ja optiikan laadun funktio. Yleensä mitä lyhyempi valonlähteen aallonpituus on, sitä suurempi on mikroskoopin resoluutio.

työetäisyys on objektiivilinssin ja näytteen välinen etäisyys. Pienellä suurennuksella työetäisyys on suhteellisen pitkä. Suurentamisen myötä työetäisyys pienenee dramaattisesti. Öljykylpylinssit koskettavat näytettä koskettavasti. Ota huomioon tämä muutos työskentelyetäisyydellä suurentamalla, jotta vältät näytteidesi vahingoittumisen.

sivun alkuun

C. monokulaarisen Yhdistelmävalomikroskoopin osat:

ota aikaa perehtyäksesi mikroskooppiisi ja sen asianmukaiseen käyttöön. Kursseillamme käyttämiemme mikroskooppien kahden merkin kontrollit on esitetty alla (kuva. 2).

kuva 2. Leica-ja Olympus-kiikarimikroskooppien Ohjauslaitteet.

1. Silmälinssi tai okulaari: meidän ovat 10x suurennos. Scopes käytämme ovat monocular (yksi okulaarin vain.)

2. Body tube: sisältää peilejä ja prismoja, jotka ohjaavat kuvan silmän linssiin.

3. Nosepiece: pitää objektiivit, pyörii, huomaa positiivinen pysähtyy kunkin Objektiivin.

4. Objektiivit: yleensä 3-4 meidän scopes, 4x, 10x, 43X, 100x öljy Upotus (red banding). Kokonaissuurennus = silmäteho x tavoiteteho.

5. Stage: platform, johon diat on asennettu katseltavaksi; jotkut scopes on mekaaninen vaiheissa. Opettele leikkaamaan liukumäki paikoilleen oikein.

6. Kalvo: kalvo ohjaa näytekappaleeseen kulkevan valon määrää ja voi vaikuttaa rajusti kuvan tarkennukseen. OPETTELE KÄYTTÄMÄÄN PALLEAA MAHDOLLISIMMAN NOPEASTI. USEIMMAT ONGELMAT SINULLA ON TARKENNUS JOHTUU VIRHEELLISESTÄ SÄÄTÖ VALON.

meillä on kaksi tyyppiä:

• iiriskalvo: Etsi vipu aivan lavan alta läheltä etupuolta.
• dial-tyyppi: aivan lavan alapuolella on pyörivä dial, jossa on erikokoisia aukkoja (reikiä); tämä tyyppi on hyödyllinen pseudopimeän kenttäefektin luomisessa.

7. Tarkennusnupit: sijaitsevat mikroskoopin sivulla; uloin on hieno tarkennus ja sisin on karkea tarkennus.
8. Valonlähde: meidän scopes on rakennettu valonlähteitä. Painonappikytkin sijaitsee (useimmiten) valolinssin takana pohjassa.

sivun alkuun

D. Yhdistelmämikroskoopin hoito ja käsittely

käytettävistä mikroskoopeista huolehtimisessa on vain muutamia ehdottomia sääntöjä, joita on noudatettava. Huolehditaan, nämä välineet kestävät useita vuosikymmeniä ja toimivat edelleen hyvin. Ilmoita toimintahäiriöistä välittömästi kouluttajallesi.

1. Käytä aina kahta kättä kiikaritähtäimen kantamiseen-toinen käsivarteen ja toinen pohjan alle-ei poikkeuksia! Älä koskaan kanna tähtäintä ylösalaisin, sillä silmä voi pudota ja putoaa.

2. Käytä linssipaperia kaikkien linssien puhdistamiseen ennen jokaista lab-istuntoa ja öljykylpylinssin käytön jälkeen. ÄLÄ KOSKAAN, EI NYT, EI KOSKAAN, KÄYTÄ MITÄÄN MUUTA KUIN LINSSIPAPERIA LINSSIEN PUHDISTAMISEEN. Muut paperit ovat liian epäpuhtaita ja naarmuttavat linssien optista päällystettä. Älä myöskään käytä linssejä puhdistettaessa mitään nesteitä-vain LINSSIPAPERIA!

3. Käytä aina oikeaa tarkennustekniikkaa välttääksesi Objektiivin törmäämistä liukumäkeen-tämä voi rikkoa Objektiivin ja / tai pilata kalliin liukumäen.

4. Sammuta valo aina, kun et käytä tähtäintä.

5. Aseta lanka aina varovasti vaarattomaksi. Jalkatiloihin loopatut johdot aiheuttavat suuren mikroskooppikatastrofin. Yritä liu ’ uttaa johto alas vetolaatikon kahvat bside penkkitilaa.

6. Vaihda mikroskoopin kansi aina, kun laitat sen pois

sivun yläosaan

E. tarkennus: monokulaariset Yhdistelmämikroskoopit

1. Sytytä valonlähde.

2. Vaihda 10x objektiiviin.

3. Peräänny karkealla tarkennuksella nokan nostamiseksi.

4. Aseta näyteliukumäki lavalle ja kiinnitä se oikeaan asentoon. Katso liukumäkeä ja aseta se niin, että yksilö on lavan valoaukon päällä.

5. Alempi Objektiivi alarajalle (lähellä liukua). Nosta objektiivia karkeatarkennusnupilla, kunnes näet kuvan tarkentuvan ja sitten menet taas ulos, sitten Tarkenna takaisin, kunnes löydät keskitarkennuksen. Säädä hieno tarkennus samalla tavalla.

6. Keskitä kuva ja säädä valoa pallean avulla.

7. Recenter ja säädä tarkennus, ensin karkea, sitten hieno tarkennus kuten vaiheessa 5.

8. Säädä palleaa tarpeen mukaan.

9. Vaihda nyt tavoitteet 43X: ään, jos suurennus on tarpeen. Säädä hieno tarkennus ja valo (kalvo) tarpeen mukaan.

skaalamme ovat parfokaalisia, mikä tarkoittaa, että kun siirryt matalasta (100x) tehosta korkeaan (430X) tehoon, pienitehoinen kuva pysyy enemmän tai vähemmän tarkennettuna korkeammalla teholla. Todennäköisesti sinun täytyy säätää hienosäätöä ja palleaa hieman.

sivun ylälaidassa

F. öljy-upotusmenetelmä

joissakin yksikokulaarisissa mikroskoopeissa ja kaikissa kiikarin yhdistelmämikroskoopeissa meillä on 100-kertaiset öljy-upotuslinssit. Nämä voidaan tunnistaa linssikotelon ympärillä olevasta punaisesta nauhasta. Suurennuksissa suurempi kuin noin 500x valo taittuu liikaa, kun se kulkee ilman läpi, jolloin saadaan hyvä erotuskyky. Näin ollen näiden suurempien suurennosten optiikkaa käytetään korkealuokkaisen mineraaliöljyn kanssa valon välitysvälineenä. On välttämätöntä, että käytät vain upotusöljyä ja että puhdistat linssin huolellisesti linssipaperilla jokaisen käyttökerran jälkeen.

1. Etsi kiinnostava alue liukumäeltä ja keskitä se kohtaan 430x.

2. Nosta Objektiivi äärirajoilleen (ts., maksimoi vaiheen ja tavoitteiden välinen etäisyys) ja heilauta linssi pois tieltä noin puolivälissä seuraavaan asentoon.

3. Aseta varovasti pieni pisara upotusöljyä suoraan liukumäelle kiinnostavan alueen keskustan yli.

4. Kierrä öljykylpytavoitetta asentoon ja laske sitä varovasti sivulta katsottaessa karkean tarkennusnupin avulla, kunnes linssi vain koskettaa öljypisaraa. Näet pudotushyppy ylös sarakkeeseen, kun kontakti on tehty.

5. Laske linssiä hitusen enemmän ja sitten tarkennusta käyttäen ja silmäobjektiivin läpi katsellen keskity näytteeseen.

6. Kun olet valmis, puhdista linssi linssipaperilla, kunnes öljyä ei enää irtoa, ja puhdista dia, jos haluat säästää.

sivun yläreuna

G. näkökentän halkaisijan määrittäminen

voit halutessasi arvioida laboratoriossa näkemiesi näytteiden koon (esim.solut). Paras tapa tehdä tämä on silmän mikrometri, tarkkuus silmän linssi insertti, joka on viivain kaiverrettu lasiin. Alkeiskursseilla käyttämämme monokulaariset scopit eivät ole niin varustettuja, joten käytämme vaihtoehtoista menetelmää, joka perustuu tietyn mikroskoopin näkökentän halkaisijan tuntemiseen. Tätä varten sinun on määritettävä:

• pienen suurennuskenttäsi likimääräinen halkaisija tietylle mikroskoopillesi.
• kaikkien muiden objektiivien kokonaissuurennus.

tietäen tämän jokaisen Objektiivin osalta, voit verrata näytteen kokoa tunnettuun kentän halkaisijaan ja tehdä kohtuullisen esimaatin koosta. Tämä tekniikka toimii millä tahansa mikroskoopilla.

1. Hanki dian asteikko ja aseta se scope. Läpinäkyvä metrinen viivoitin toimii myös.

2. Tuo se tarkennukseen käyttäen 10x tavoite (100x yhteensä). Asteikkotangot ovat 1 mm: n lisäyksiä alla olevan kuvan mukaisesti. Näin ollen musta palkki = 0,5 mm samoin kuin välilyönti.

3. Siirrä dia niin, että reuna ulkopuolella musta palkki on vain tangentti valaistun kentän (katso Kohta ”A” edellä).

4. Aloita tästä reunasta, arvioi kuinka monta tankoa ja tilaa tarvitaan näkökentän ylittämiseen. Joudut todennäköisesti arvioimaan tilan tai palkin viimeisen murto-osan. Useimmissa mikroskoopeissamme se on noin 1,8-2,0 mm leveä. Tämä on tarkistettava jokaisesta käyttämästäsi mikroskoopista, jossa ei ole silmän mikrometriä.

5. Tallenna tähtäimen tunnistenumero ja kentän halkaisija 100x lab Notebookiin tulevaa käyttöä varten.

6. Seuraavaksi lasketaan kentän leveys 430X kokonaissuurennoksella seuraavalla kaavalla (kutsumme 100x mag: ia ”pienitehoiseksi” ja 430X: ää ”suuritehoiseksi”):

(low power mag/ high power mag) x low power field halkaisija (mm)

esimerkiksi oletetaan, että 100x kentän halkaisija on 1,8 mm, 430X, kentän halkaisija olisi

(100 / 430) x 1,8 mm = 0,418 mm = 418 um (mikrometriä)

huomaa, että kentän halkaisija suurella teholla on verrannollinen pienen ja suuren tehon tavoitteiden suhteeseen. Toisin sanoen suurennoksen kasvaessa todellinen näkökenttä pienenee suhteessa.

sivun ylälaidassa

H. Binokulaariset Yhdistelmävalomikroskoopit
Valomikroskoopin osat

1. Silmälinssi tai okulaari: meidän ovat 10x suurennos. Scopes käytämme ovat kiikari (kaksi eyepieces).

2. Body tube: sisältää peilejä ja prismoja, jotka ohjaavat kuvan silmän linsseihin.

3. Nosepio: pitää objektiivit, pyörii

4. Objektiivit: yleensä 3-4 meidän scopes, 4x, 10x, 43X, 100x öljy Upotus (red banding). Kokonaissuurennus = silmäteho x tavoiteteho. Useimmissa kiiloissa on kiinteät linssit.lava liikkuu ylös ja alas eikä linssi.

5. Vaihe: Liikkuva alusta, johon diat on asennettu katseltavaksi; kaikki meidän scopes on mekaaninen vaiheissa X, Y vernier asteikot. Focus nupit siirtää vaiheessa ylös ja alas.

6. Lauhdutin: alaobjektiivi, joka kohdistaa valon näytteeseen. Kiikareissamme on lauhduttimet, jotka liikkuvat ylös ja alas kohdistamaan valonsäteen.

7. Värikalvo: pallea sijaitsee aivan lavan alapuolella ja ohjaa näytteeseen kulkevan valon määrää ja voi vaikuttaa rajusti kuvan tarkennukseen.

8. Tarkennusnupit: uloin on hieno tarkennus ja sisin on karkea tarkennus. Binocs nämä nupit control ylös / alas liikkeen vaiheessa.

9. Valonlähde: meidän scopes on rakennettu valonlähteitä. Rheostat ON / OFF-kytkin sijaitsee joko laajuudessa tai ulkoisessa virtalähteessä ja sitä käytetään valon voimakkuuden säätelyyn.

sivun alkuun

I. Tarkennusmenettely: Binokulaariset Yhdistelmämikroskoopit

1. Sytytä valonlähde. Binoc-scopeissa on joko sisäänrakennettu yksikkö tai ulkoinen virtalähde.

2. Vaihda 10x objektiiviin.

3. Säädä karkea tarkennus nokan nostamiseksi (tai laske vaihe).

4. Clip näyte dia lavalla oikeassa asennossa.

5. Katso tähtäimen linssejä. Toinen linssi on kiinteä ja toisessa on tarkennusrengas (kuten kiikarissa). Viekää Objektiivi mahdollisimman lähelle liukumäkeä ja Perääntykää, kunnes näyte vain tarkentuu. Säädä hienotarkennus samalla tavalla kiinteälle linssille.

6. Nyt, katsot vain säädettävän silmän läpi, säädä sen tarkennus käyttäen tarkennusrengasta linssin ympärillä. Katso molemmilla silmillä (säädä välimatkaa nähdäksesi yhden kierroksen valaistun kentän) ja tee pieniä muutoksia tarkentaaksesi.

7. Keskitä kuva ja säädä valoa kondensaattorilinssin, värikalvon ja valonlähteen rheostaatin avulla.

8. Recenter ja säädä tarkennus, ensin karkea, sitten hieno tarkennus kuten 5.

9. Säädä palleaa tarpeen mukaan.

10.Vaihda tavoitteet korkeammalle voimalle. Säädä hieno tarkennus ja valo (kalvo) tarpeen mukaan.

skaalamme ovat parfokaalisia, mikä tarkoittaa, että kun siirryt matalasta suuritehoiseen, pienellä teholla oleva Tarkennettu kuva pysyy enemmän tai vähemmän tarkennettuna korkeammalla teholla. Todennäköisesti sinun täytyy säätää hienosäätöä ja palleaa hieman (lisätä valoa suuremmilla tehoilla.

Modified 11-6-15 gja

Department of Biology, Bates College, Lewiston, ME 04240