Zusammenfassung

Hemipyrellia ligurriens (Diptera: Calliphoridae) ist eine forensisch wichtige Schlagfliegenart, die in vielen Ländern vertreten ist. In dieser Studie bestimmten wir die Morphologie aller Stadien und die Entwicklungsrate von H. ligurriens, die unter natürlichen Umgebungsbedingungen in der Provinz Phitsanulok, Nordthailand, aufgezogen wurden. Morphologische Merkmale aller Stadien, die auf der Beobachtung unter einem Lichtmikroskop basieren, wurden beschrieben und demonstriert, um sie für Identifikationszwecke zu verwenden. Darüber hinaus wurde die Entwicklungszeit in jeder Phase angegeben. Die Entwicklungszeit von H. ligurriens bis zur vollständigen Metamorphose; Von Ei, Larve, Puppe bis zum Erwachsenen dauerte 270,71 h für 1 Entwicklungszyklus. Die Ergebnisse dieser Studie können nützlich sein, nicht nur für die Anwendung in der forensischen Untersuchung, sondern auch für das Studium in seiner Biologie in der Zukunft.

1. Einführung

Exemplare von Schlagfliegen (Diptera: Calliphoridae), insbesondere Fliegenlarven, die in Leichen und / oder an Todesszenen gefunden werden, können als entomologische Beweise in forensischen Untersuchungen verwendet werden, dh zur Abschätzung des postmortalen Intervalls (PMI) und zur Bestimmung toxischer Substanzen, Ante-Mortem-Traumata und ob eine Verlagerung von Überresten stattgefunden hat , wie bereits dokumentiert . Die genaue morphologische Identifizierung von Insektenproben ist aus angewandter Sicht einer der wichtigsten Faktoren, da sie relevante Beweise für forensische Untersuchungen liefern . Hemipyrellia ligurriens (Wiedemann) ist eine forensisch wichtige Art der Schlagfliege, wie bereits aus Fällen in Thailand und Malaysia berichtet . Diese Fliegenart ist weit verbreitet und umfasst Korea, Taiwan, Laos, Singapur, Papua-Neuguinea, Australien, Indien, China, die Philippinen, Sri Lanka, Malaysia, Indonesien und Thailand . Neben seiner forensischen Bedeutung kann H. ligurriens ein Ärgernis in Märkten und Gärten sein, und Erwachsene sind auch mechanische Vektoren von Krankheitserregern, aufgrund ihrer Anziehungskraft auf menschliche Exkremente in der Nähe von Menschen besetzten Umgebungen . Bisher wurde die Morphologie einiger unreifer Stadien (Ei, Larven der 3. Stufe und Puparium) von H. ligurriens nur durch Beobachtung unter einem Rasterelektronenmikroskop und einem Lichtmikroskop untersucht . Aus diesem Grund sind die verfügbaren Informationen von H. ligurriens unvollständig, um alle unreifen Beweise zu identifizieren, die in den Todesszenen gefunden werden können. Außerdem, Die Entwicklungsrate dieser Art, die wichtige Daten für die Schätzung des PMI sind, wurde in den zitierten Literaturen nicht gefunden. Darüber hinaus sind lokale populationsspezifische Entwicklungsdaten für die Schätzung des Larvenalters zur Bestimmung des PMI sehr wichtig . Um die Genauigkeit und Präzision bei der Anwendung dieser Informationen in forensischen Untersuchungen zu erhöhen, ist die Untersuchung aller unreifen Stadien und der Entwicklungsrate von großem Interesse, da die Morphologie jedes einzelnen spezifische Merkmale liefern könnte, die für eine ordnungsgemäße Identifizierung wichtig werden, und Wachstumsdaten in einem bestimmten Zustand könnten wesentliche Daten für die PMI-Schätzung liefern. Daher zielte diese Studie darauf ab, die charakteristischen Merkmale aller unreifen Stadien durch Beobachtung unter dem Lichtmikroskop zu untersuchen, einige wichtige Details für die Identifizierung zu geben und ihre Entwicklungsrate zu bestimmen, insbesondere in der Provinz Phitsanulok, Nordthailand.

2. Materialien und Methoden

2.1. Wartung von H. ligurriens im Labor

Die Kolonie von H. ligurriens, das in dieser Studie verwendet wurde, wurde ursprünglich durch Sammeln von adulten Fliegen mit einem Kehrnetz in Gebieten des Dorfes Sao Hin, Bezirk Muang Phitsanulok, Provinz Phitsanulok, Thailand (16 ° 44’18N; 100 ° 13’44E) erhalten. Alle Erwachsenen von H. ligurriens wurden im Feld gesammelt und anhand ihrer Morphologie identifiziert, unter Verwendung des taxonomischen Schlüssels von Tumrasvin et al. , bevor sie im Labor weiter aufgezogen werden. Fliegen wurden unter natürlichen Umgebungsbedingungen im offenen Aufzuchtraum nach der Methode von Sukontason et al. . Kurz gesagt, Erwachsene wurden in einem Aufzuchtkäfig (30 × 30 × 30 cm) gehalten und mit 2 Arten von Futter gefüttert: (i) eine Mischung aus 10% (w / v) Zuckerlösung und 1,5% (v / v) Multivitaminsiruplösung (SEVEN SEA, England) und (ii) frische Schweineleber. Frische Schweineleber wurde als Larvenfutter und Eiablagestelle bereitgestellt. Das Vorhandensein von Eiern auf der Schweineleber wurde täglich beobachtet. Wenn Eier gefunden wurden, wurden die Schweineleber mit Fliegeneiern vorsichtig mit einer Pinzette in eine Larvenaufzuchtbox überführt, und dann wurden 2 oder 3 Stück (≈50 g / Tag) frische Schweineleber als Nahrung für die Larven in die Box gegeben. Einige Stücke frischer Schweineleber wurden täglich hinzugefügt, bis die Larven in der Box aufhörten zu fressen und sich zu bewegen, oder sie wurden zum präpupalen Stadium (spätes 3. Stadium). Alle in der Aufzuchtbox verbliebenen Schweineleberstücke wurden aus der Box entfernt. Nur Puppen wurden in der Aufzuchtbox gehalten und dicht verschlossen, bis das Auftauchen von Erwachsenen gefunden wurde. Danach wurde die Box in einen Aufzuchtkäfig gelegt und geöffnet, um Erwachsene aus der Box zu befreien und im Aufzuchtkäfig zu leben. Die neue Fliegengeneration wurde wie oben erwähnt kontinuierlich aufgezogen.

2.2. Morphologie

Ei
In dieser Studie wurden Eiproben von H. ligurriens aus der Laborkolonie gewonnen, um verschiedene Merkmale unter Verwendung der Kaliumpermanganat-Färbetechnik gemäß der vorherigen Beschreibung von Sukontason et al. . Die Hauptmerkmale, wie die Morphologie der Umgebung des Mikropyls und die Chorionskulptur, wurden unter einem Lichtmikroskop (Olympus, Japan) beobachtet und fotografiert, das an eine Digitalkamera (Samsung S700, Korea) angeschlossen war. Außerdem wurden die Breiten und Längen von 30 Fliegeneiern unter dem kalibrierten Lichtmikroskop vermessen. Mittelwert und Standardabweichung von Breite und Länge wurden mit dem Excel-Programm (Microsoft Office Enterprise 2007) analysiert.

Larve
Diese Studie bestimmte die Morphologie und Entwicklungsrate in allen Larvenstadien (1., 2. und 3. Stadium). Die Morphologie aller Stadien wurde mit der Hydroxid-Clearing-Methode untersucht. Kurz gesagt, 30 Larven jedes Instars wurden aus der Laborkolonie gewonnen und geopfert, indem sie 30 Sekunden lang in ein Becherglas mit heißem Wasser (80 ° C) gegeben wurden, um ein Schrumpfen zu verhindern . Danach wurden sie in einer kleinen Glasflasche mit 70% Ethanol konserviert. Die konservierten Larven wurden an zwei Stellen einzeln unter Verwendung einer scharfen Klinge unter einem Stereomikroskop (Olympus, Japan) nach der von Sukontason et al. . Der erste Schnitt wurde in der Mitte des zweiten Thoraxsegments positioniert, um das innere Cephalopharynxskelett und das äußere vordere Spirakel zu betrachten. Der zweite Schnitt wurde über das 11. Körpersegment positioniert, um die Eigenschaften des hinteren Spirakels zu beobachten. Als Clearing-Methode wurde jedes Paar anteriorer und posteriorer Teile in einer Glasplatte mit 10% (w / v) Kalilauge für 1 Tag (für 1. Instar) oder 2 Tage (für 2. und 3. Instar) belassen. Anschließend wurden die Proben zweimal mit destilliertem Wasser gewaschen und neutralisiert, indem man sie 30 min lang auf eine Glasplatte legte, die eine Mischung aus 35% Ethanol und 1% Eisessig enthielt. Danach wurden die Proben seriell in 50%, 70%, 80%, 95%, und absolutem Ethanol (RCI LABSCAN, Thailand) für 30 min pro Alkoholkonzentration. Dehydratisierte Proben wurden auf eine xylolhaltige Glasplatte (PROLAB, Frankreich) übertragen und 1 min stehen gelassen, bevor sie mit 2-3 Tropfen Montagemedium (Permount) auf einen Objektträger montiert wurden. Über jedes Exemplar wurde ein Deckblatt gelegt. Die Objektträger wurden 2 Tage bei Raumtemperatur belassen, bevor sie unter dem Lichtmikroskop beobachtet wurden. Das cephalopharyngeale Skelett und das hintere Spirakel jedes Instars wurden unter dem Lichtmikroskop fotografiert, das mit der Digitalkamera verbunden war. Zusätzlich wurden die Körperlänge und -breite aller Instars untersucht. Dreißig Larven der ersten Stufe wurden unter Verwendung eines kalibrierten Mikroskops gemessen, während die zweite und dritte Stufe (n = 30 Larven / jede Stufe) mit Messschiebern unter einem Seziermikroskop gemessen wurden. Mittelwert und Standardabweichung ihrer Körperbreite und -länge wurden mit dem Excel-Programm analysiert.

Puppe
In diesem Stadium wurden die Morphologie des vorderen und hinteren Teils und die Farbänderung untersucht. Die vorderen und hinteren Teile von Puparia wurden unter Verwendung der Kaliumhydroxid-Clearing-Technik bestimmt, zuvor von Sukontason et al. . Die vorderen Teile von Puparia waren die Überreste des zusammengezogenen Kopfes zum vierten Segment von Puparia, nachdem die Fliegen aufgetaucht waren. Sie wurden aus der Aufzuchtbox rekrutiert, in der bereits Fliegen aufgetaucht waren. Für jeden hinteren Teil wurde das kaudale Segment des Pupariums mit einer scharfen Klinge unter dem Stereomikroskop geschnitten und dann mit einer Pinzette in die gleiche Glasplatte wie für den vorderen Teil übertragen. Danach wurden sie in 1% (v / v) Geschirrspülmittel eingeweicht, um Oberflächenartefakte und / oder Schweinelebergewebe zu entfernen. Als Klärverfahren wurden die vorderen und hinteren Teile in einem Reagenzglas belassen, das 10% (w / v) Kalilauge enthielt, und das Reagenzglas wurde 1 h lang in ein Wasserbad überführt, das auf eine Temperatur von 80 ° C eingestellt war. Anschließend wurde der Probenprozess in Anlehnung an das für das Larvenstadium beschriebene Verfahren durchgeführt. Die wichtigen Merkmale der vorderen und hinteren Teile wurden unter dem Lichtmikroskop beobachtet und fotografiert, das mit der Digitalkamera verbunden war. Die Anzahl der Papillen in jedem hinteren Spirakel von 30 vorderen Teilen wurde gezählt und für seine Reichweite berechnet. Darüber hinaus wurden dreißig Puparia mit Hilfe von Messschiebern auf ihre Breite und Länge gemessen. Mittelwert und Standardabweichung ihrer Breite und Länge wurden mit dem Excel-Programm analysiert. Zur Beobachtung der Farbänderung wurde nur ein Puparium ausgewählt und fotografiert, das die Farbe der Puparia in der Aufzuchtbox repräsentierte 0, 3, 6, 9, 12, 15, 18, 21, und 24 h mit der Digitalkamera. Vor dem Fotografieren wurde Puparium in destilliertem Wasser gewaschen, um Oberflächenartefakte zu entfernen.

Erwachsener
Die jungen Erwachsenen im Alter von 5-7 Tagen wurden mit einem Reagenzglas aus dem Aufzuchtkäfig gewonnen. Sie wurden geopfert, indem sie für 2 h in einen Kühlschrank (-4 ° C) gestellt wurden. Die für die Identifizierung wichtigen Merkmale wurden unter dem an die Digitalkamera angeschlossenen Stereomikroskop untersucht und fotografiert. Zusätzlich wurden dreißig Erwachsene mit Messschiebern auf Körperbreite und -länge gemessen. In dieser Studie bedeutet Körperbreite die Breite des 2. Brustsegments, und die Körperlänge ist die gesamte Länge des Körpers, vom mittleren Facettenauge bis zum letzten Abdomensegment. Mittelwert und Standardabweichung ihrer Körperbreite und -länge wurden mit dem Excel-Programm analysiert.

2.3. Bewertung der Entwicklungsrate

Zur Bewertung der Entwicklungsrate wurden die Experimente im offenen Aufzuchtraum unter der natürlichen Umgebungstemperatur der Provinz Phitsanulok, Nordthailand, durchgeführt. Temperatur und relative Luftfeuchtigkeit wurden täglich mit einem Thermometer und Hygrometer (Thermo-Hygro TM870, China) aufgezeichnet. Die Bereiche (Mittelwert ± SD) der aufgezeichneten Temperatur und der relativen Luftfeuchtigkeit, die zur Bestimmung der Entwicklungsrate dieser Fliege verwendet wurden, betrugen 26,7 ± 0,61 ° C bzw. 74 ± 3%. Für jedes Experiment begann die Entwicklungsrate beim Auffinden neu geschlüpfter Larven (oder des 1. Stadiums); Das präpupale Stadium bedeutete den Endpunkt. Die frisch geschlüpften Larven wurden als 0 h alte Larven erkannt. Die Beurteilung der Entwicklungsrate in dieser Studie wurde untersucht, indem die neu geschlüpften Larven derselben adulten Fliegenkolonie in 3 Gruppen eingeteilt wurden. Jede Gruppe bestand aus 150-200 frisch geschlüpften Larven. Sie wurden vorsichtig mit einem feuchten Pinsel (Nummer 4) von der Aufzuchtbox in die neue übertragen. Frische Schweineleber (≈50 g) wurde täglich als Nahrungsquelle für die Larven in jeder Aufzuchtbox bereitgestellt. Die fünf größten Larven wurden alle 3 h aus der Aufzuchtbox entfernt. Sie wurden 30 Sekunden lang in heißes Wasser (≈ 80 ° C) gelegt, um ein Schrumpfen der Larven zu verhindern, und in einer kleinen Glasflasche mit 70% Ethanol konserviert. Alle konservierten Larven wurden gemessen Körperlängen unter Verwendung eines kalibrierten Mikroskops oder Messschieber unter einem Seziermikroskop, abhängig von ihrer Größe. Das Verhältnis von Larvenkörperlängen und Entwicklungszeit wurde mit dem Excel-Programm analysiert. Darüber hinaus wurden Lebensdauern in anderen Phasen mithilfe des Excel-Programms aufgezeichnet und analysiert.

3. Ergebnisse

3.1. Morphologie

Ei
Das Ei von H. ligurriens war sowohl am vorderen als auch am hinteren Ende länglich und verjüngt (Abbildung 1(a)). Es war 1,44 ± 0,11 mm lang und 0,47 ± 0,04 mm breit (Tabelle 1). In diesem Stadium dauerte es 10,3 ± 0,30 h, bis die Mauser zum Larvenstadium wurde (Tabelle 1). Das ungefärbte Ei war cremeweiß; während die nach der Färbung mit 1% Kaliumpermanganat hellbraun gefärbt waren. Der mediane Bereich befand sich dorsal und positionierte eine Y-Form, die sich vom vorderen Ende bis fast zum hinteren Ende erstreckte (Abbildung 1 (b)). Die Schraffurlinie war aufrecht und zeigte daher eine dunkle Verdickung entlang der mittleren Fläche (Abbildung 1 (a)). Die Chorionskulptur erschien als sechseckiges Muster, dessen netzartige Begrenzung sich leicht wie ein Netz erhob (Abbildung 1 (c)).

Abbildung 1

Ei von Hemipyrellia ligurriens mit 1% Kaliumpermanganat gefärbt. (a) Vollei; MA: mittlere Fläche. (b) Vorderes Ende des Eies mit gegabeltem Plastron und Mikropyle; M: Mikropyle. (c) Äußere Chorionskulptur mit hexagonalem Muster, deren netzartige Grenze sich leicht wie ein Netz erhebt. Balken = 100 𝜇m für alle Figuren.

Larve
Unter Beobachtung mit dem Stereomikroskop zeigten alle Larvenstadien von H. ligurriens typische muskoidförmige Wurmlarven, die anterior spitz und posterior stumpf waren. Das kaudale Segment hatte ein einziges Paar hintere Spirakel. Die erste Phase war relativ klein und betrug 2,62 ± 0,70 mm Länge und 0,75 ± 0,35 mm Breite, wobei die Entwicklungszeit in diesem Stadium 12 ± 0,1 h betrug (Tabelle 1). Das cephalopharyngeale Skelett war nicht gut entwickelt (Abbildung 2 (a)), während das hintere Spirakel 2 spirakuläre Schlitze hatte, die ventral zusammenflossen (Abbildung 2 (e)). Der zweite Instar war 6,24 ± 1,67 mm lang und 1,37 ± 0,19 mm breit, mit einer Dauer von 12 ± 3 h in diesem Stadium (Tabelle 1). Das cephalopharyngeale Skelett war fast vollständig (Abbildung 2 (b)), während das hintere Spirakel 2 getrennte spirakuläre Schlitze mit schwach pigmentiertem unvollständigem Peritrem aufwies (Abbildung 2 (f)). Die Größe des 3. Instars war mit 12,18 ± 1,31 mm Länge und 2,32 ± 0,19 mm Breite am größten. Auch die Entwicklungszeit war in diesem Stadium mit 84 ± 3 h am längsten (Tabelle 1). Die cephalopharyngealen Skelette des frühen und des späten 3. Instars waren ähnlich (Abbildungen 2 (c) und 2 (d) bzw.). Die hinteren Spirakel des frühen (Abbildung 2 (g)) und späten 3. Instars (Abbildung 2 (h)) waren ähnlich, mit 3 getrennten spirakulären Schlitzen und vollständigem Peritreme mit einer Interslit-Projektion, mit Ausnahme des letzteren, der ein hochpigmentiertes Peritreme zeigte (Abbildung 2 (h)). Die Unterscheidungsmerkmale aller drei Stadien wurden in Tabelle 2 zusammengefasst.

Abbildung 2

Cephalopharyngeale Skelette und hintere Spirakel von Hemipyrellia ligurriens-Larven. Cephalopharyngeale Skelette von (a) 1. Stadium, (b) 2. Stadium, (c) frühem 3. Stadium,. und (d) späte 3. instar. Hintere Spiralen von (e) 1. Instar, (f) 2. Instar, (g) frühem 3. Instar und (h) spätem 3. Instar. Balken = 100 𝜇m für alle Figuren.

Puppe
Das Puparium von H. ligurriens war von typischer koarktaler Form (Abbildung 3), die 6,82 ± 0 maß.27 mm lang und 2,76 ± 0,11 mm breit (Tabelle 1). Beobachtete Farbveränderungen zeigten, dass das frühe Puparium cremeweiß gefärbt war (0 h), wobei das hintere Ende noch abgeschnitten war (Abbildung 3 (a)). Die Farbe des Pupariums änderte sich jedoch allmählich innerhalb von 3 h nach der Pupariation in Hellgelbbraun (Abbildung 3 (b)) und dann nach etwa 15 h in Braun (Abbildung 3 (f)). Die Farbe des Pupariums änderte sich nach etwa 18 h Beobachtung in Dunkelbraun (Abbildung 3 (g)). Bei 24 h zeigte das Puparium die dunkelste braune Farbe (Abbildung 3 (i)). Die Dauer für das gesamte Puppenstadium betrug 152,5 ± 30,7 h (Tabelle 1).

(a)

(b)

(c)

(d)

(e)

(f)

(g)

(h)

(i)

(a)
(b)
(c)
(d)
(e)
(f)
(g)
(h)
(i)

Figure 3

Color changes in puparia of Hemipyrellia ligurriens up to 24 h after pupariation. Puparium (a)–(i) at 0, 3, 6, 9, 12, 15, 18, 21, and 24 h, respectively. Bars = 100 𝜇m for all figures.

Die Beobachtung der vorderen und hinteren Teile von Puparia zeigte sich nach Behandlung mit 10% Kaliumhydroxid als blassgelbbraune Farbe. Die vordere Platte, die mit einem Deckglas gepresst wurde, war trapezförmig mit 2 vorderen Spirakeln an beiden oberen Enden (Abbildung 4 (a)). Jedes vordere Spirakel bestand aus 5 bis 7 Papillen (Abbildung 4 (b)). Die im dritten Segment beobachtete Wirbelsäule zeigte Reihen von einspitzigen Spitzen (Abbildung 4 (c)). Jedes hintere Spirakel hatte drei hochpigmentierte dunkelbraune spirakuläre Schlitze mit hochpigmentiertem Knopf und schwach pigmentiertem Peritreme (Abbildung 4(d)).

(a)

(b)

(c)

(d)

(a)
(b)
(c)
(d)

Figure 4

Puparium of Hemipyrellia ligurriens after treating with 10% KOH. (a) Anterior plate with trapezoid shape. (b) Anterior spiracle with 6 papillae. (c) Wirbelsäulenmuster am 3. Segment mit Einzelpunktspitze. (d) Hintere Spirakel. Balken = 100 𝜇m für alle Figuren.

Erwachsener
Der erwachsene H. ligurriens war 12,23 ± 0,61 mm lang, 2,85 ± 0,25 mm breit (Tabelle 1) und metallisch kupfergrün mit grauweißer Pollinose im vorderen Teil des Thorax (Abbildungen 5 (a) und 5(b)). Der Kopf des Weibchens war dichoptisch, aber der des Männchens war subholoptisch (Abbildungen 5 (c) und 5 (d)). Bei beiden Geschlechtern wurde eine graue Gesichtsbestäubung festgestellt (Abbildungen 5 (c) und 5 (d)), und das gesamte dritte Antennensegment war ventral dunkelbraun oder orange (Abbildungen 5 (c) und 5 (d)). Squama war weißlich (Abbildung 5(e)). Gena war mit schwarzen Haaren bedeckt (Abbildung 5(f)). Stammvene war ohne Setulae (Abbildung 5(g)). Zwei postsuturale akrostichale Setae wurden am Thorax gefunden (Abbildung 5 (h)). Suprakonvexität wurde gefunden pilose Haare (Abbildung 5(i)). Alle oben genannten Eigenschaften waren wichtig für die Identifizierung dieser Fliege Erwachsenen.

(a)

(b)

(c)

(d)

(e)

(f)

(g)

(h)

(i)

(a)
(b)
(c)
(d)
(e)
(f)
(g)
(h)
(i)

Figure 5

Adults and important characteristics for identification of Hemipyrellialigurrien. (a) Dorsal view of the female. (b) Dorsal view of the male. (c) Frons of the female showing dichoptic eyes. (d) Frons of the male showing subholoptic eyes. (e) Seitenansicht des Erwachsenen mit weißlichen Squamae (Pfeil). (f) Höhere Vergrößerung des Kopfes mit schwarzen Haaren auf der Gena (Pfeil). (g) Flügel, der die Stammvene ohne Setulae zeigt (Pfeil). (h) Dorsaler Thorax. (i) Pilose Haare auf der Suprakonvexität (Pfeil). Balken = 200 𝜇m für alle Figuren.

3.2. Bewertung der Entwicklungsrate

Die Bewertung der Entwicklungsrate von H.ligurriens wurde während des Untersuchungszeitraums auf der Grundlage der natürlichen Umgebungsbedingungen in der Provinz Phitsanulok bestimmt. Die Wachstumskurve des Larvenstadiums zeigte eine sigmoide Form (Abbildung 6). Daten über die Entwicklungsrate der Aufzucht zeigten, dass die Entwicklungszeit von frisch geschlüpften Larven bis zum Beginn der Pupariation in einem Gesamtzeitraum von 108 h schnell zunimmt. Die Larven erreichten ihre maximale mittlere Länge bei ≈42 h und die Pupariation trat bei 108h auf. Die Lebensspannen aller Stadien wurden ebenfalls in Tabelle 1 zusammengefasst.

Abbildung 6

Zusammenhang zwischen Entwicklungszeit und Larvenlänge von Hemipyrellia ligurriens unter natürlichen Umgebungsbedingungen (26,7 ± 0,61°C; 74 ± 3% RH) der Provinz Phitsanulok, Nordthailand.

4. Diskussion

Daten zu wichtigen Insektenmerkmalen für eine schnelle und zuverlässige Identifizierung und Entwicklung im Labor sind entscheidende Voraussetzungen für eine angemessene Anwendung in forensischen Untersuchungen. H. ligurriens ist eine forensisch wichtige Schlagfliegenart, die in forensischen Fällen in Malaysia und Thailand nachgewiesen wurde . Diese Studie konzentrierte sich auf die wichtigen Merkmale zur Identifizierung aller Stadien von H. ligurriens, basierend auf Beobachtung unter dem Lichtmikroskop und Entwicklungszeit jeder Stufe in natürlichen Umgebungsbedingungen mit Durchschnittstemperaturen und relativer Luftfeuchtigkeit, die 26,7 ± 0,61 ° C bzw. 74 ± 3% betrugen. Obwohl die Morphologie in einigen Stadien von H. ligurriens zuvor mit dem Rasterelektronenmikroskop und dem Lichtmikroskop untersucht wurde , lieferte diese Studie detailliertere Informationen zu Unterscheidungsmerkmalen und neuen Hinweisen zur Identifizierung unter Verwendung einfacher Techniken, um die Genauigkeit und Präzision der forensischen Anwendung in Zukunft zu erhöhen. Darüber hinaus lieferte diese Studie Entwicklungsdaten von H. ligurriens, die zur Schätzung des PMI von Leichen verwendet werden können, auf denen diese Fliegenart besiedelt ist.

Die Chorionskulptur sowie die Breite und Länge der medianen Fläche wurden zuvor als wichtiges Merkmal bei der Identifizierung des Fliegeneis gemeldet . Die Morphologie des H. ligurriens-Eies, das in dieser Studie durch Anfärben mit 1% Kaliumpermanganat und Beobachten unter dem Lichtmikroskop beobachtet wurde, ähnelte der in früheren Arbeiten, die unter Verwendung des Rasterelektronenmikroskops untersucht wurden . Daher bestätigten die Ergebnisse dieser Studie die Wirksamkeit der von Sukontason et al. , zur Identifizierung von Fliegeneiern. Die gefärbten Eier konnten unter dem Lichtmikroskop deutlich beobachtet werden. Beim Vergleich der Daten mit früheren Studien war die Größe des H. ligurriens-Eies in dieser Studie größer als die anderer Schlagfliegen wie Lucilia cuprina, Ceylonomyia (= Chrysomya) nigripes und Aldrichina grahami; Seine Größe unterschied sich jedoch nicht von der Größe von Chrysomya megacephala und Achoetandrus (= Chrysomya) rufifolia . Nichtsdestotrotz kann die Größe des Fliegenei nicht als primäres Merkmal für die Identifizierung verwendet werden, so Informationen von Erzinclioglu , der berichtete, dass die Größe des Fliegeneies von den Nahrungsmengen abhing. Daher sollte die Identifizierung von Fliegenei die Eigenschaften der Breite des Plastrons, die Morphologie des Plastron-Bereichs, der den Mikropyle umgibt, als Hauptkriterien und die Größe als zusätzliches Merkmal für die Identifizierung von Eiern verwenden .

Basierend auf unseren Referenzen war diese Studie die erste Studie, die die Morphologie des cephalopharyngealen Skeletts und des hinteren Spirakels bei allen Instarlarven durch Beobachtung unter dem Lichtmikroskop zeigte. Cephalopharyngeale Skelette und hintere Larvenspiralen waren in jedem Stadium deutlich unterschiedlich. Die Ergebnisse dieser Studie stimmten mit den vorherigen Berichten überein . Darüber hinaus zeigte diese Studie den Grad der Pigmentierung von Peritreme in jedem Stadium. Es kann ein neuer Hinweis sein, um das Alter von Larven zu unterscheiden, besonders zwischen frühem und spätem Stadium. Da jeder Entwicklungsstadium definitiv anders ist und der Grad der Pigmentierung, können die Daten aus dieser Studie nützlich sein, um die Larvenstadien und das Alter der Larven dieser Schlagfliege im Detail zu identifizieren, wie oben erwähnt.

Die Studie zur Morphologie des Puppenstadiums lieferte ähnliche Ergebnisse wie die vorherigen Berichte . Die Ergebnisse der Beobachtung von Farbveränderungen durch die Zeit von H. ligurriens puparia wurden zuerst in dieser Studie berichtet und können ein weiterer neuer unterstützender Beweis sein, um zumindest das ungefähre Alter von Puparia zu bestimmen, um die Genauigkeit des PMI-Wertes zu erhöhen.

Diese Studie zeigte einige Fotos von Unterscheidungsmerkmalen, die zur Identifizierung von adultem H. ligurriens verwendet werden können. Diese Fotos von besonderen Merkmalen aus dieser Studie können für Personen nützlich sein, die mit der Terminologie in den taxonomischen Schlüsseln nicht vertraut sind. Der aktuelle taxonomische Schlüssel zur Identifizierung von Schlagfliegenarten in Thailand wurde von Kurahashi und Bunchu gegeben. Mit bloßem Auge eines Nonentomologen scheint der erwachsene H. ligurriens A. rufifolia im Aussehen ähnlich zu sein. Daher kann die Möglichkeit einer Fehlidentifikation bei beiden Arten auftreten, insbesondere in Thailand, weil A. rufifacies war die zweithäufigste Schlagfliegenart Thailands, und in einigen Provinzen dieses Landes wurde ein Zusammentreffen beider Arten gefunden .

Diese Studie war der erste Bericht, der die Entwicklungszeit von H. ligurriens in allen Stadien lieferte. Die Ergebnisse zeigten, dass die Entwicklungszeit von H. ligurriens unter natürlichen Bedingungen in dieser Studie (eine Durchschnittstemperatur von 26, 7 ± 0, 61 ° C und eine relative Luftfeuchtigkeit von 74 ± 3%) schneller war als die von C. megacephala und A. rufifolia, die bei einer Durchschnittstemperatur von 27, 4 ° C untersucht wurden. Darüber hinaus unterschied sich die Entwicklungszeit jedes Stadiums von H. ligurriens von der von C. megacephala und A. rufifolia. Die Entwicklungsrate jeder Art wurde angegeben, obwohl sie unter denselben oder verwandten Bedingungen wuchsen . Außerdem, Variation der Entwicklungszeiten innerhalb einer Schlagfliegenart wurde in geografisch unterschiedlichen Populationen gefunden . Die lokalen populationsspezifischen Entwicklungsdaten werden zur Schätzung des Larvenalters benötigt, um PMI zu bestimmen. Daher sind die Daten aus dieser Studie sehr wichtig für die weitere Anwendung, insbesondere in der Provinz Phitsanulok.Daten, die sowohl aus den morphologischen Merkmalen als auch aus der Entwicklungszeit gewonnen wurden, erfüllen die vorherigen Informationen und liefern neue unterstützende Beweise für die Identifizierung dieser Schlagfliegenart und die Anwendung in der forensischen Untersuchung, insbesondere wenn H. ligurriens in menschlichen Leichen vorhanden ist. Darüber hinaus können sie in Zukunft als Basisdaten für ihre biologische Studie nützlich sein.

Danksagungen

Diese Studie wurde hauptsächlich durch ein Stipendium an N unterstützt. Bunchu von der Medizinischen Fakultät der Naresuan University und ein weiterer vom Thailand Research Fund (MRG5280194). Die Autoren danken auch dem Centre of Excellence in Medical Biotechnology, Faculty of Medical Science, Naresuan University, und der Division of Research Administration, Naresuan University, für die Unterstützung und die Erstattung der Publikationskosten.