Retention time and dead time
de fleste af separationsteknikkerne består af en kromatografisk søjle, stationær fase og mobil fase og bruger almindelig terminologi. Derfor er det bedre at lære nogle beskrevet i tekstbogen til HPLC (Ref.1) som en oversigt:
retentionstiden $T_\mathrm{R}$ opløst stof A kan defineres som tiden fra injektionen af prøven til tidspunktet for sammensat eluering, taget ved den maksimale (spids) af toppen, der hører til den specifikke molekylære Art a (kendt eller ukendt). Retentionstiden angiver, hvor lang tid det tager for en forbindelse a At eluere fra søjlen (fra injektoren til detektoren). Retentionstiden for den sidste top (hvis prøven indeholder flere forbindelser) i et kromatogram bruges til at estimere den nødvendige længde af det kromatografiske løb. Generelt for en molekylær Art A kan retentionstiden angives som $t_\mathrm{R}$(A), og tiden måles normalt i $\pu{min}$. Imidlertid udelades delen “(a)” i notationen undertiden, men alligevel er $t_\mathrm{R}$ altid relateret til en bestemt molekylær Art.
retentionstid afhænger ikke kun af strukturen af det specifikke molekyle, men også af faktorer som arten af de mobile og stationære faser, strømningshastigheden for den mobile fase og dimensioner af den kromatografiske søjle. Retentionstid er normalt karakteristisk for en specifik forbindelse i en given adskillelse. Af denne grund er retentionstiden kritisk for at identificere analytter, når deres retentionstid er kendt (f.eks.
af særlig interesse i en adskillelse er den døde tid $T_\mathrm{m}$, hvilket er den tid, en ikke-bevaret molekylær art skal elute fra den kromatografiske kolonne. Den døde tid er også kendt som void time eller holdup time. Den døde tid $t_ \ mathrm{M}$ kan også fortolkes som en del af retentionstiden $T_\mathrm{R}$(A) for analytten A, som analytten bruger i mobilfasen, der bevæger sig gennem kolonnen (det er årsagen til subscrpt “M”, der betyder mobil). Denne parameter er ikke relateret til retentionsprocessen og afhænger af søjlens strømningshastighed og fysiske egenskaber (dvs.længde, diameter, porøsitet af stationær fase). Forskellen mellem retentionstiden ($T_\mathrm{R}$) og den døde tid ($T_\mathrm{M}$) repræsenterer den tid, analyt a bevares i den stationære fase ($T_\mathrm{s}$). Denne forskel er angivet som reduceret retentionstid $T_ \ mathrm{s}$ (eller $t ‘ _ \ mathrm{R}$) og udtrykkes med formlen:$$t_ \ mathrm{S}=t_\mathrm{R} – t_\mathrm{m}$$
værdien for $T_\mathrm{M}$ opnås typisk som en tilnærmelse ved hjælp af forbindelser, der er meget lidt tilbageholdt, da det kan være svært at finde en forbindelse, der slet ikke bevares på en kromatografisk kolonne. For eksempel under HPLC-kørsler kan opløsningsmidlet, der anvendes til injektion af prøven (når det er forskelligt fra den mobile fase), være en sådan forbindelse, og retentionstiden for denne opløsningsmiddeltop kan tages som dødtid.