abstrakt

Hemipyrellia ligurriens (Diptera: Calliphoridae) er en retsmedicinsk vigtig slagflugteart præsenteret i mange lande. I denne undersøgelse bestemte vi morfologien i alle faser og udviklingshastigheden for H. ligurriens opdrættet under naturlige omgivelsesforhold i Phitsanulok-provinsen, det nordlige Thailand. Morfologiske træk ved alle faser baseret på observation under et lysmikroskop blev beskrevet og demonstreret for at kunne anvendes til identifikationsformål. Desuden blev udviklingstid i hvert trin givet. Udviklingstiden for H. ligurriens for at fuldføre metamorfose; fra æg, larve, puppe til voksen, tog 270,71 h for 1 udviklingscyklus. Resultaterne fra denne undersøgelse kan være nyttige ikke kun til anvendelse i retsmedicinsk undersøgelse, men også til undersøgelse i dets biologi i fremtiden.

1. Introduktion

prøver af slagfluer (Diptera: Calliphoridae), især fluelarver, der findes i Lig og/eller ved dødsscener, kan bruges som entomologisk bevis i retsmedicinske undersøgelser, det vil sige estimering af postmortemintervallet (PMI) og bestemmelse af giftige stoffer, antemortemtraume , og om flytning af rester var sket, som allerede dokumenteret . Præcis morfologisk identifikation af insektprøver er en af meget vigtige faktorer fra et anvendt synspunkt, fordi de giver relevante beviser for retsmedicinske undersøgelser . Hemipyrellia ligurriens er en retsmedicinsk vigtig slagflugteart, som tidligere rapporteret fra sager i Thailand og Malaysia . Denne flueart er udbredt og dækker Korea, Laos, Singapore, Papua Ny Guinea, Australien, Indien, Kina, Filippinerne, Sri Lanka, Malaysia, Indonesien og Thailand . Udover dets retsmedicinske betydning kan H. ligurriens være en gener på markeder og haver, og voksne er også mekaniske vektorer af patogener på grund af deres tiltrækning til menneskelig udskillelse nær menneskelige besatte miljøer . Tidligere er morfologi af nogle umodne stadier (æg, 3 .instar larver og puparium) af H. ligurriens kun blevet undersøgt ved at observere under et scanningselektronmikroskop og et lysmikroskop. Af den grund er den tilgængelige information fra H. ligurriens ufuldstændig til at identificere alle umodne beviser, der kan findes i dødsscenerne. I øvrigt, udviklingshastighed for denne art, som er vigtige data til estimering af PMI, er ikke fundet i de citerede litteraturer. I øvrigt, lokalbefolkningsspecifikke udviklingsdata er meget vigtige for at estimere larvealder for at bestemme PMI . For at øge nøjagtigheden og præcisionen, når disse oplysninger anvendes i retsmedicinske undersøgelser, undersøgelsen af alle dens umodne stadier og udviklingshastighed er af stor interesse, fordi morfologien for hver enkelt kunne give specifikke funktioner, der bliver vigtige for en korrekt identifikation, og vækstdata i særlig tilstand kunne give vigtige data til PMI-estimering. Derfor, denne undersøgelse havde til formål at undersøge de karakteristiske egenskaber ved alle dens umodne stadier ved at observere under lysmikroskopet, at give nogle vigtige detaljer til identifikation og at bestemme dens udviklingshastighed, især i tilstand i Phitsanulok-provinsen, det nordlige Thailand.

2. Materialer og metoder

2.1. Vedligeholdelse af H. ligurriens i laboratoriet

kolonien af H. ligurriens anvendt i denne undersøgelse blev oprindeligt opnået ved at samle voksne fluer med et fejende net i områder i Sao Hin Village, Muang Phitsanulok district, Phitsanulok-provinsen, Thailand (16 liter 44 ’18N; 100 liter 13′ 44E). Alle voksne af H. ligurriens blev samlet i marken og identificeret ud fra deres morfologi ved hjælp af den taksonomiske nøgle til Tumrasvin et al. , før de opdrættes yderligere i laboratoriet. Fluer blev opdrættet under naturlig omgivelsestilstand i det åbne systemopdrætrum, ifølge metoden fra Sukontason et al. . Kort sagt blev voksne opretholdt i et opdræt bur (30 liter 30 liter 30 cm) og fodret med 2 slags mad: (i) en blanding af 10% (vægt/v) sukkeropløsning og 1,5% (v/v) multivitaminsirupopløsning (SEVEN SEA, England) og (ii) frisk svinelever. Frisk svinelever blev leveret som larvefoder og ovipositionssted. Tilstedeværelsen af æg på svinelever blev observeret dagligt. Da der blev fundet æg, blev svinelever med flueæg overført forsigtigt til en larveopdrætkasse ved hjælp af pincet, og derefter blev der tilsat 2 eller 3 stykker (50 g/dag) frisk svinelever i kassen som mad til larverne. Nogle stykker frisk svinelever blev tilsat dagligt, indtil larverne i kassen stoppede med at fodre og bevæge sig, eller de blev præpupalstadiet (sen 3.instar). Alle stykker svinelever, der forblev i opdrætskassen, blev fjernet fra kassen. Kun pupper blev holdt i opdræt kasse og forseglet tæt indtil fremkomsten af voksen blev fundet. Derefter blev kassen anbragt og åbnet i et opdræt bur for at frigive voksne fra kassen for at leve i opdræt bur. Ny fluegeneration blev opdrættet kontinuerligt som nævnt ovenfor.

2, 2. Morfologi

æg
i denne undersøgelse blev ægprøver af H. ligurriens opnået fra laboratoriekolonien for at undersøge forskellige træk ved anvendelse af kaliumpermanganatfarvningsteknikken ifølge tidligere beskrivelse af Sukontason et al. . De vigtigste egenskaber, såsom morfologi af medianområdet omkring mikropylen og chorionisk skulptur, blev observeret og fotograferet under et lysmikroskop (Olympus, Japan), som var forbundet til et digitalt kamera (Samsung S700, Korea). Endvidere blev bredderne og længderne af 30 flueæg også målt under det kalibrerede lysmikroskop. Middelværdi og standardafvigelse for bredde og længde blev analyseret ved hjælp af Microsoft office Enterprise 2007.

larve
denne undersøgelse bestemte morfologi og udviklingshastighed i alle larvestadier (1., 2. og 3. instars). Morfologi af alle instars blev undersøgt ved hjælp af hydroksidrensningsmetoden. Kort fortalt blev 30 larver af hver instar opnået fra laboratoriekolonien og ofret ved at placere dem i et bægerglas indeholdende varmt vand (80 liter C) i 30 sek for at forhindre dem i at krympe . Derefter blev de konserveret i en lille glasflaske indeholdende 70% ethanol. De konserverede larver blev dissekeret individuelt på to steder for at opnå tre kropsdele ved hjælp af et skarpt blad under et stereomikroskop (Olympus, Japan) ifølge metoden beskrevet af Sukontason et al. . Det første snit blev placeret over midten af det andet thorakale segment til visning af det indre cephalopharyngeale skelet og det ydre forreste spirakel. Det andet snit blev placeret på tværs af det 11.kropssegment for at observere egenskaberne ved det bageste spirakel. Som en clearingmetode blev hvert par forreste og bageste dele efterladt i en glasplade indeholdende 10% (vægt/v) kaliumhydroksidopløsning i 1 dag (for 1.instar) eller 2 dage (for 2. og 3. instars). Derefter blev prøverne vasket to gange med destilleret vand og neutraliseret ved at placere dem på en glasplade indeholdende en blanding af 35% ethanol og 1% iseddikesyre i 30 minutter. Derefter blev prøverne dehydreret serielt i 50%, 70%, 80%, 95%, og absolut ethanol (RCI LABSCAN, Thailand) i 30 minutter pr. Dehydrerede prøver blev overført til en glasplade indeholdende ksilen (PROLAB, Frankrig) og efterladt i 1 min før montering på en glasrutschebane med 2-3 dråber monteringsmedium (Permount). En dækslip blev anbragt over hver prøve. De permanente dias blev efterladt i stuetemperatur i 2 dage, før de blev observeret under et lysmikroskop. Det cephalopharyngeale skelet og den bageste spirakel af hver instar blev fotograferet under lysmikroskopet, som var forbundet til det digitale kamera. Derudover blev kropslængden og bredden af alle instarer undersøgt. Tredive af de første instar larver blev målt ved hjælp af et kalibreret mikroskop, mens den anden og tredje instars (n = 30 larver/ hver instar) blev målt med vernier calipre under et dissekerende mikroskop. Gennemsnit og standardafvigelse af deres kropsbredde og længde blev analyseret ved hjælp af programmet.

Pupa
i dette trin blev morfologi af de forreste og bageste dele og farveændring undersøgt. De forreste og bageste dele af puparia blev bestemt ved anvendelse af kaliumhydroksidrensningsteknikken, tidligere beskrevet af Sukontason et al. . De forreste dele af puparia var resterne af det kontraherede hoved til det fjerde segment af puparia, efter at fluerne var kommet frem. De blev rekrutteret fra opdræt kasse, der fluer allerede var opstået. For hver bageste del blev det kaudale segment af puparium skåret med et skarpt blad under stereomikroskopet og derefter overført ved hjælp af pincet til den samme glasplade som den, der blev brugt til den forreste del. Derefter blev de gennemblødt i 1% (v/v) opvaskemiddel for at fjerne overfladeartikler og/eller svinelevervæv. Som en clearingmetode blev de forreste og bageste dele efterladt i et reagensglas indeholdende 10% (vægt/v) kaliumhydroksidopløsning, og reagensglasset blev overført til et vandbad indstillet til en temperatur på 80 liter C i 1 time. Derefter blev prøveprocessen udført efter den, der er beskrevet for larvestadiet. De vigtige træk ved forreste og bageste dele blev observeret og fotograferet under lysmikroskopet, der var forbundet med digitalkameraet. Antal papiller i hver bageste spirakel på 30 forreste dele blev talt og beregnet for dets rækkevidde. Derudover blev tredive puparia målt for deres bredde og længde ved hjælp af vernier-Kalipre. Gennemsnit og standardafvigelse af deres bredde og længde blev analyseret ved hjælp af programmet. Til observation af farveændring, kun et puparium, der repræsenterede farven på puparia i opdrætskassen, blev valgt og fotograferet kl 0, 3, 6, 9, 12, 15, 18, 21, og 24 timer ved at bruge det digitale kamera. Før du tager fotografier, puparium blev vasket i destilleret vand for at fjerne overfladeartikler.

voksen
de unge voksne, 5-7 dage gamle, blev opnået fra opdræt bur ved hjælp af et reagensglas. De blev ofret ved at placere dem i køleskab (-4 liter C) i 2 timer. derefter blev de forsigtigt fastgjort med godt anatomisk arrangement. De vigtige egenskaber til identifikation blev undersøgt og fotograferet under stereomikroskopet, forbundet til digitalkameraet. Derudover blev tredive voksne målt for kropsbredde og længde ved hjælp af vernier-Kalipre. I denne undersøgelse betyder kropsbredde bredden af det 2.thorakale segment, og kropslængde er hele kroppens længde, der spænder fra det midterste sammensatte øje til det sidste segment af maven. Gennemsnit og standardafvigelse af deres kropsbredde og længde blev analyseret ved hjælp af programmet.

2, 3. Udviklingshastighedsvurdering

til vurdering af udviklingshastigheden blev eksperimenterne udført i det åbne systemopdrætrum under den naturlige omgivelsestemperatur i Phitsanulok-provinsen, det nordlige Thailand. Temperatur og relativ fugtighed blev registreret dagligt ved hjælp af et termometer og hygrometer (Thermo-Hygro TM870, Kina). Intervallerne (Middelkrr SD) for registreret temperatur og relativ fugtighed, der blev brugt til at bestemme udviklingshastigheden for denne flue, var henholdsvis 26,7 liter 0,61 liter C og 74 liter 3%. For hvert eksperiment begyndte udviklingshastigheden ved at finde nyklækkede larver (eller 1.instar); præpupalstadiet betød slutpunktet. De nyklækkede larver blev anerkendt som 0 h gamle larver. Udviklingshastighedsvurdering i denne undersøgelse blev undersøgt ved at adskille de nyklækkede larver fra den samme voksne fluekoloni i 3 grupper. Hver gruppe bestod af 150-200 nyklækkede larver. De blev overført forsigtigt fra opdrætskassen til den nye ved hjælp af en våd pensel (nummer 4). Frisk svinelever (50 g) blev leveret dagligt som fødekilde til larverne i hver opdrætskasse. De fem største larver blev fjernet fra opdrætskassen hver 3. time.de blev ofret ved at placere i varmt vand (liter 80 liter C) i 30 sekunder for at forhindre larvekrympning og blev konserveret i en lille glasflaske indeholdende 70% ethanol. Alle konserverede larver blev målt kropslængder ved hjælp af et kalibreret mikroskop eller vernier-Kalipre under et dissekeringsmikroskop, afhængigt af deres størrelser. Forholdet mellem larvelængder og udviklingstid blev analyseret ved hjælp af programmet. Derudover blev levetiden i andre faser registreret og analyseret ved hjælp af programmet.

3. Resultater

3.1. Morfologi

æg
ægget af H. ligurriens var langstrakt og tilspidset i både forreste og bageste ender (Figur 1(a)). Den målte 1,44 liter 0,11 mm i længden og 0,47 liter 0,04 mm i bredden (tabel 1). Det tog tid i denne fase for 10,3 liter 0,30 timer før moulting at være larvestadiet (tabel 1). Det ufarvede æg var cremet hvidt; mens de efter farvning med 1% kaliumpermanganat var lysebrune i farve. Medianområdet var placeret dorsalt og placerede en Y-form, der strakte sig fra den forreste ende til næsten den bageste ende (figur 1(b)). Udklækningslinjen var lodret og viste således mørk fortykning langs medianområdet(Figur 1 (a)). Den chorioniske skulptur optrådte som et sekskantet mønster med sin retikulære grænse lidt hævet som et net (Figur 1(c)).

Figur 1

Æg af Hemipyrellia ligurriens farvet med 1% kaliumpermanganat. a) Hele æg; MA: medianareal. (B) den forreste ende af ægget, der viser bifurcated plastron og mikropyle; M: mikropyle. (C) ekstern chorionskulptur, der viser sekskantet mønster, med sin retikulære grænse lidt hævet som et net. Bars = 100 liter m for alle tal.

larve
under observation med stereomikroskopet viste alle larvestjerner af H. ligurriens typisk muskoidformet vermiform larve, der blev peget i anterior og stump i posterior. Det kaudale segment havde et enkelt par bageste spirakler. Den første instar var relativt lille og målte 2,62 liter 0,70 mm i længden og 0,75 liter 0,35 mm i bredden med udviklingstiden på dette trin for 12 liter 0,1 h (tabel 1). Det cephalopharyngeale skelet var ikke veludviklet(figur 2 (A)), mens den bageste spirakel havde 2 spirakulære spalter, der fusionerede ventralt(figur 2 (e)). Den anden instar var 6,24 liter 1,67 mm i længden og 1,37 liter 0,19 mm i bredden, med 12 liter 3 h varighed på dette trin (tabel 1). Det cephalopharyngeale skelet var næsten komplet(figur 2 (b)), mens den bageste spirakel havde 2 adskilte spirakulære spalter med svagt Pigmenteret ufuldstændig peritrem(figur 2 (f)). Størrelsen på 3. instar var den største, der måler 12,18 liter 1,31 mm i længden og 2,32 liter 0,19 mm i bredden. Udviklingstiden var også den længste på dette stadium, idet den var 84 kr.3 h (tabel 1). De cephalopharyngeale skeletter af den tidlige og den sene 3. instar var ens(figur 2(c) og 2 (d), hhv.). De tidlige bageste spirakler(figur 2 (g)) og sen 3.instar(figur 2 (h)) var ens, idet de havde 3 adskilte spirakulære spalter og komplette peritreme med en interslit projektion, bortset fra at sidstnævnte viser en stærkt pigmenteret peritreme(figur 2 (h)). De karakteristiske træk ved alle tre instarer blev opsummeret i tabel 2.

Character 1st instar 2nd instar 3rd instar Cephalopharyngeal skeletal: accessory sclerite of cephalopharyngeal skeletal Absent Absent Present Posterior spiracle: button of posterior spiracle Absent Absent Present peritreme of posterior spiracle Very weakly pigmented; incomplete peritreme Weakly pigmented; incomplete peritreme without an interslit projection Highly pigmented; komplet peritreme med en interslit projektion Antal spiracular slids 2 slidser fusionerer ventrally 2 adskilte slidser 3 adskilte slidser

tabel 2

sammenligning af karakteristiske træk ved 1., 2. og 3. instar larver af hemipyrellia ligurriens.

figur 2

Cephalopharyngeal skeletter og posterior spirakler af Hemipyrellia ligurriens larver. Cephalopharyngeal skeletter af (A) 1.instar, (b) 2. instar, (c) tidlig 3. instar,. og (D) sent 3. instar. Bageste spirakler af (e) 1.instar, (f) 2. instar, (g) tidlig 3. instar og (h) sen 3. instar. Bars = 100 liter m for alle tal.

Pupa
pupariet af H. ligurriens var af typisk coarctatform (figur 3), som målte 6,82 liter 0.27 mm i længden og 2,76 g 0,11 mm i bredden (tabel 1). Observerede farveændringer afslørede, at det tidlige puparium var cremet hvidt i farve (0 h), med den bageste ende stadig afkortet (figur 3(a)). Pupariumets farve ændrede sig dog gradvist til lysegulbrun inden for 3 timer efter pupariation (figur 3(b)) og derefter til brun efter omkring 15 timer (figur 3(f)). Farven på puparium ændret til mørkebrun efter ca. 18 h observation(figur 3 (g)). Ved 24 timer viste pupariet den mørkeste brune farve(Figur 3 (i)). Varigheden for hele puppetrinnet var 152,5 kr.30,7 h (tabel 1).

(a)

(b)

(c)

(d)

(e)

(f)

(g)

(h)

(i)

(a)
(b)
(c)
(d)
(e)
(f)
(g)
(h)
(i)

Figure 3

Color changes in puparia of Hemipyrellia ligurriens up to 24 h after pupariation. Puparium (a)–(i) at 0, 3, 6, 9, 12, 15, 18, 21, and 24 h, respectively. Bars = 100 𝜇m for all figures.

Observation af de forreste og bageste dele af puparia optrådte som en lysegulbrun farve efter behandling med 10% kaliumhydroksid. Den forreste plade, presset med en dækslip, var trapesformet med 2 forreste spirakler placeret i begge øverste ender (figur 4(A)). Hver forreste spirakel bestod af 5 til 7 papiller (figur 4(b)). Rygsøjlen observeret i det tredje segment viste rækker af enkeltspidsede spidser (figur 4(c)). Hver bageste spirakel optrådte tre stærkt pigmenterede mørkebrune spirakulære spalter med stærkt pigmenteret knap og svagt Pigmenteret peritreme (figur 4(d)).

(a)

(b)

(c)

(d)

(a)
(b)
(c)
(d)

Figure 4

Puparium of Hemipyrellia ligurriens after treating with 10% KOH. (a) Anterior plate with trapezoid shape. (b) Anterior spiracle with 6 papillae. (c) rygsøjlen mønster på 3.segment viser enkelt punkt spids. D) bageste spirakler. Bars = 100 liter m for alle tal.

voksen
den voksne H. ligurriens var 12,23 liter 0,61 mm i længden, 2,85 liter 0,25 mm i bredden (tabel 1) og metallisk kobbergrøn i udseende med gråhvid pollinose på den forreste del af brystkassen (figur 5(A) og 5(b)). Hovedet på kvinden var dikoptisk, men hannens var subholoptisk (figur 5(c) og 5(d)). Grålig ansigtspolinøsitet blev fundet hos begge køn (figur 5(c) og 5(d)), og hele det tredje antennesegment var mørkebrunt eller orange ventralt (figur 5(c) og 5(d)). Hvidlig (figur 5 (e)). Gena var dækket med sorte hår(figur 5 (f)). Stamvenen var uden setulae(figur 5 (g)). To postsutural acrostichal setae blev fundet på brystkassen (figur 5(h)). Suprakonveksitet blev fundet pilose hår(figur 5 (i)). Alle ovennævnte egenskaber var vigtige for identifikation af denne flyve voksen.

(a)

(b)

(c)

(d)

(e)

(f)

(g)

(h)

(i)

(a)
(b)
(c)
(d)
(e)
(f)
(g)
(h)
(i)

Figure 5

Adults and important characteristics for identification of Hemipyrellialigurrien. (a) Dorsal view of the female. (b) Dorsal view of the male. (c) Frons of the female showing dichoptic eyes. (d) Frons of the male showing subholoptic eyes. (e) sidebillede af den voksne med hvidlige skæl (pil). (f) højere forstørrelse af hovedet, der viser sorte hår på gena (pil). (g) Vinge, der viser stamvenen uden setulae (pil). h) Dorsal brystkasse. (i) Pilose hår på suprakonveksiteten (pil). Bars = 200 liter m for alle tal.

3.2. Udviklingshastighedsvurdering

vurderinger af udviklingshastigheden for H. ligurriens blev bestemt i undersøgelsesperioden baseret på den naturlige omgivende tilstand i Phitsanulok-provinsen. Vækstkurven for larvestadiet viste sigmoid form (Figur 6). Data om udviklingshastigheden for opdræt afslørede, at udviklingstiden fra nyklækkede larver til begyndelsen af pupariation vokser hurtigt i en samlet periode på 108 h. larver nåede deres maksimale medianlængde ved 42 h, og pupariation fandt sted ved 108 h. levetiden for alle faser blev også opsummeret i tabel 1.

figur 6

forhold mellem udviklingstid og larvelængden af Hemipyrellia ligurriens under naturlige omgivelsesbetingelser (26,7 liter 0,61 liter; 74 3% RH) af Phitsanulok-provinsen, det nordlige Thailand.

4. Diskussion

Data relateret til vigtige insektegenskaber til hurtig og pålidelig identifikation og udvikling i laboratoriet er afgørende forudsætninger for passende anvendelse i retsmedicinske undersøgelser. H. ligurriens er en retsmedicinsk vigtig slagflue, der er registreret i retsmedicinske sager i Malaysia og Thailand . Denne undersøgelse fokuserede på de vigtige egenskaber til identifikation af alle faser af H. ligurriens, baseret på observation under lysmikroskopet og udviklingstiden for hvert trin i naturlig omgivelsestilstand med gennemsnitlige temperaturer og relativ fugtighed, som var henholdsvis 26,7 liter 0,61 liter C og 74 liter 3%. Selvom morfologi i nogle stadier af H. ligurriens er blevet undersøgt tidligere ved hjælp af scanningselektronmikroskopet og lysmikroskopet , denne undersøgelse gav mere detaljerede oplysninger om særpræg og nye spor til identifikation ved hjælp af enkle teknikker for at øge nøjagtigheden og præcisionen af retsmedicinsk anvendelse i fremtiden. Desuden leverede denne undersøgelse udviklingsdata for H. ligurriens, som kan bruges til at estimere PMI for lig, som denne flueart har koloniseret.

chorionisk skulptur samt bredde og længde af medianområdet blev tidligere rapporteret som en vigtig egenskab ved identifikation af flueæget . Morfologi af H. ligurriens æg, observeret i denne undersøgelse ved farvning med 1% kaliumpermanganat og observation under lysmikroskopet, svarede til det i tidligere arbejde, som undersøgt ved anvendelse af scanningselektronmikroskopet . Derfor bekræftede resultater fra denne undersøgelse effektiviteten af farvningsmetode, initieret af Sukontason et al. , til identifikation formål med flyve æg. De farvede æg kunne observeres tydeligt under lysmikroskopet. Ved sammenligning af data med tidligere undersøgelser var størrelsen af H. ligurriens æg i denne undersøgelse større end for andre slagfluer, såsom Lucilia cuprina, ceylonomyia (= Chrysomya) nigripes og Aldrichina grahami; størrelsen var imidlertid ikke forskellig fra størrelserne på Chrysomya megacephala og Achoetandrus (= Chrysomya) rufifacies . Ikke desto mindre kan størrelsen af flueæg ikke bruges som de primære egenskaber til identifikation, ifølge oplysninger fra Ersinclioglu , der rapporterede, at størrelsen af flueæg var afhængig af diætniveauerne. Derfor, identifikation af flueæg bør bruge karakteristika for bredden af plastron, morfologi af plastronområdet omkring mikropylen som hovedkriterier og brug størrelse som et supplerende træk til ægidentifikation .

baseret på vores referencer var denne undersøgelse den første undersøgelse, der viste morfologi af cephalopharyngeal skelet og posterior spirakel i alle instar larver ved at observere under lysmikroskopet. Cephalopharyngeal skeletter og bageste spirakler af larver blev tydeligt set som forskellige i hver instar. Resultaterne af denne undersøgelse var i overensstemmelse med de tidligere rapporter . Derudover viste denne undersøgelse grad af pigmentering af peritrem i hver instar. Det kan være en ny ledetråd til differentiering af larvernes alder, især mellem tidligt og sent instar. Da hver udviklingsinstar bestemt er forskellig såvel som graden af pigmentering, kan dataene fra denne undersøgelse være nyttige til at identificere larvestadier og alder af larver af denne slagflue i detaljer som nævnt ovenfor.

undersøgelse af morfologi af puppestadiet gav de resultater, der svarede til de tidligere rapporter . Resultaterne fra observation i farveændringer efter tid af H. ligurriens puparia blev først rapporteret i denne undersøgelse og kan være endnu et nyt understøttende bevis for at bestemme mindst den omtrentlige alder af puparia for at øge nøjagtigheden af PMI-værdi.

denne undersøgelse viste nogle fotografier af særpræg til brug ved identifikation af voksne H. ligurriens. Disse fotografier af ejendommelige egenskaber fra denne undersøgelse kan være nyttige for folk, der ikke er bekendt med terminologien i de taksonomiske nøgler. Den nuværende taksonomiske nøgle til identifikation af slagflugtearter i Thailand blev givet af Kurahashi og Bunchu . Ved en nonentomologs blotte øjne ser voksne H. ligurriens ud som A. rufifacies i udseende. Derfor, chancen for fejlidentifikation kan forekomme hos begge arter, især i Thailand, fordi A. rufifacies var den næstmest dominerende slagflugteart i Thailand, og tilfældighed af begge arter i nogle provinser i dette land blev fundet .

denne undersøgelse var den første rapport, der gav udviklingstid for H. ligurriens i alle faser. Resultaterne viste, at udviklingstiden for H. ligurriens under naturlige forhold i denne undersøgelse (en gennemsnitstemperatur på 26,7 liter 0,61 liter C og relativ fugtighed på 74 liter 3%) var hurtigere end for C. megacephala og A. rufifaces, som blev undersøgt ved en gennemsnitstemperatur på 27,4 liter C . Desuden var udviklingstiden for hvert trin af H. ligurriens forskellig fra C. megacephala og A. rufifaces. Udviklingshastigheden for hver art blev specificeret, skønt de voksede under de samme eller beslægtede forhold . Desuden blev variation af udviklingstider inden for en slagflugteart fundet i geografisk forskellige populationer . De lokale befolkningsspecifikke udviklingsdata er nødvendige for at estimere larvealderen for at bestemme PMI. Derfor er dataene fra denne undersøgelse meget vigtige for yderligere anvendelse, især i Phitsanulok-provinsen.

Data, opnået fra både de morfologiske egenskaber og udviklingstid, opfylder de tidligere oplysninger og giver nye understøttende beviser til identifikation af denne slagflugteart og anvendelse i retsmedicinsk undersøgelse, især når H. ligurriens er til stede i menneskelige kadavere. Desuden kan de være nyttige som baseline data i sin biologi undersøgelse i fremtiden.

anerkendelser

denne undersøgelse blev hovedsageligt støttet af et tilskud til N. Bunchu fra Det Medicinske Fakultet, Naresuan University, og en anden fra Thailand Research Fund (MRG5280194). Forfatterne takker også Center for ekspertise inden for medicinsk bioteknologi, det medicinske fakultet, Naresuan University, og Division of Research Administration, Naresuan University, for støtte og forsvar af publikationsomkostningerne.