i: Nylige fremskridt inden for reproduktion af små dyr, P. V. Concannon, G. England og J. Verstegen (Eds.) Udgiver: International Veterinary Information Service (www.ivis.org), Ithaca, USA.

Intra-uterin Insemination hos hunden ved hjælp af det skandinaviske Trans-cervikale kateter og en sammenligning med andre metoder ( 2-Feb-2001)

C. Linde-Forsberg

det veterinærmedicinske Fakultet, Institut for Obstetrik og gynækologi, Sveriges landbrugsuniversitet, Uppsala, Sverige

introduktion

interessen for konservering af hundesæd og kunstig insemination (AI) er støt stigende over hele verden, men der offentliggøres relativt få undersøgelser hvert år inden for dette felt, og det er især vanskeligt at finde data fra kunstige inseminationer ved hjælp af frisk sæd eller sæd konserveret efter forskellige metoder til nedkøling eller frysning og optøning og også sammenligne resultater, når forskellige teknikker til at udføre inseminationerne anvendes. En af grundene til manglen på data er, at det er dyrt at lave eksperimentelle undersøgelser hos hunde, og få forskningscentre kan holde store nok hundekolonier til denne slags undersøgelser. En anden grund er, at de fleste af de store virksomheder, der forarbejder og distribuerer hundesæd til hundeopdrættere, arbejder på et rent kommercielt grundlag, og selvom nogle af dem ser ud til at føre fortegnelser over deres resultater, afsløres hverken disse resultater eller sammensætningen af forlængerne eller metoderne til konservering af sæden. Enhver viden, der således opnås, vil derfor forblive hos de forskellige virksomheder og vil ikke være til gavn for den videnskabelige verden og dermed heller ikke for hundeopdrættere generelt. De eneste undersøgelser af kunstig insemination hos hunde, der rapporterer om fertilitetsresultater fra et stort antal inseminationer, er dem fra Seager et al., på 156 frosset-optøet sæd AIs ved hjælp af vaginal aflejring, Linde-Forsberg & Forsberg på henholdsvis 470 og 527 AIs ved hjælp af både frisk, kølet udvidet og frosset optøet sæd og vaginal såvel som intra-uterin AI, Linde-Forsberg et al., på 327 frosne optøede sæd AIs, sammenligning af vaginal og intra-uterin AI, Linde-Forsberg rapportering om 2041 AIs med frisk og kølet udvidet og frosset optøet sæd og ved hjælp af både vaginal og intra-uterin AI og Thomassen et al., på 312 frosset-optøet hovedsageligt intra-uterin AIs. En række faktorer er vigtige for at bestemme succesraten for kunstig insemination hos hunde, såsom hvornår og hvor mange gange i tævens østrouscyklus AI udføres, sædkvalitet og håndtering og insemineringsteknikken. Mere information om disse facetter kan findes i de citerede referencer. Dette papir vil kun beskæftige sig med insemineringsteknikkerne og virkningerne af sædaflejringsstedet. De nylige kliniske undersøgelser har fremhævet vigtigheden af intra-uterin i modsætning til intravaginal kunstig insemination hos hunden og er de første til at demonstrere signifikant bedre resultater, når sæd blev deponeret i livmoderen snarere end i vagina. I undersøgelsen af Linde-Forsberg et al., var hvalpehastigheden ved anvendelse af intrauterin aflejring af frosneopvarmet sæd 84,4% sammenlignet med 58.9 % ved anvendelse af vaginal deposition og gennemsnitlig Kuldstørrelse var 5,4 + 3,0 sammenlignet med 4,0

+2,7 hvalpe/kuld (P<0,001). Fertilitetsdata fra 2041 kunstige inseminationer er hunde, udført i Svenske tæver mellem 1990 og 1998 og rapporteret til Kennelklubben inden for 2 uger (dvs. før en graviditetstest kunne have været lavet for at undgå bias til resultaterne), viste, at signifikant højere hvalpehastigheder og kuldstørrelser blev opnået ikke kun med frosset optøet sæd, men også med frisk såvel som kølet forlænget sæd, når sæden var blevet deponeret i livmoderen snarere end i vagina (tabel 1).

resultaterne ved hjælp af frisk sæd, vist i tabel 1, er lidt for høje, fordi 11% af disse tæver af forskellige årsager ikke kun var kunstigt insemineret, men også parret. Den hyppigste årsag til dette var, at opdrættere forsøgte at parre tæverne for tidligt under østrus, og når hundene ikke ville parre sig, anmodede deres ejere om en AI. Hvalpefrekvensen i den også parrede gruppe var så høj som 84,5% med en gennemsnitlig Kuldstørrelse på 6,0 + 2,8 hvalpe sammenlignet med en hvalpefrekvens på 48,9% og en gennemsnitlig Kuldstørrelse på 5,8 + 2,8 hvalpe for de tæver, der kun var kunstigt insemineret. Det ser derfor ud til, at et antal AIs, der udføres med frisk sæd, faktisk udføres på et ikke-optimalt tidspunkt under østrus, normalt på grund af opdrætterens uerfarenhed, men det forholdsvis dårlige resultat skyldes sandsynligvis også, at AI anmodes om på grund af forskellige problemer hos hundene. De svenske data viser imidlertid tydeligt, at i hunden forbedrer intra-uterin AI signifikant hvalpehastigheden og kuldstørrelsen. Hvalpehastigheden ved intra-uterin AI steg med fra 36% for frisk sæd til 50% for frosset optøet sæd sammenlignet med vaginal AI. Og med intra-uterin AI steg den gennemsnitlige Kuldstørrelse med 0,3 unger pr.kuld for frosneopvarmet sæd og med 0,6 og 0,7 pr. kuld for frisk og kølet udvidet sæd. Det er også interessant i denne sammenhæng at bemærke, at hunden anses for at være en art med intrauterin aflejring af sæd ved naturlig parring, for når det copulatoriske slips er forbi, har sædcellerne nået ovidukterne . Den sædrige fraktion ejakuleres ved intromission og i det tidlige stadium af det copulatoriske slips og efterfølges af et stort volumen prostatavæske, der straks skyller sædcellerne fra den smalle kraniale vagina gennem livmoderhalsen ind i livmoderkroppen og hornene. Vagina ser ud til at tilbyde et ugunstigt miljø for hundesperma, da en stor del mister deres haler inden for få minutter efter aflejring i kranial vagina . Det har også vist sig , at der kræves omkring 10 gange så mange sædceller for at opnå lignende resultater ved vaginal AI som ved intra-uterin AI med frisk sæd såvel som med frosset optøet sæd . Der er således mange faktorer, der bidrager til de dårligere resultater opnået ved intravaginal sædaflejring sammenlignet med intrauterin aflejring.

metoder til at udføre Intra-uterin AI hos hunden.

Intra-uterin AI hos hunden kan udføres transcervisk enten ved hjælp af det skandinaviske (eller Norske) kateter eller ved at bruge et stift fiberoptisk vaginal endoskop til at visualisere livmoderhalsen og et hundekateter til at krydse det. Intra-uterin AI kan også opnås ved invasive metoder såsom laparoskopi eller Fuld abdominal kirurgi. I nogle lande kan sidstnævnte metoder være ulovlige eller ikke betragtes som etisk acceptable.

Palpation af livmoderhalsen

det er absolut nødvendigt for den person, der ønsker at udføre hunde AI, at lære at lokalisere livmoderhalsen ved abdominal palpation for at kunne deponere sæden på det rigtige sted og for at undgå at skade tæven. Tæven skal have en tom mave og blære for at lette proceduren. Til træningsformål anbefales det at bruge engangs-plast hunde vaginale AI-katetre (Minit Pristb GmbH, Tiefenbach, Tyskland) (Fig. 1).

Figur 1. De tre størrelser af det skandinaviske kunstige inseminationskateter til hunde og det plastiske vaginale kunstige inseminationskateter til engangsbrug.

fordi tævens urinrørsåbning er placeret ved bækkenranden, er det overraskende let for AI-kateteret eller et tyndt stift endoskop at blive utilsigtet indført i urinblæren. Bortset fra farerne ved perforering af blæren med kateteret er det indlysende, at ingen graviditet ville følge efter en AI. Således skal kateterets korrekte position altid kontrolleres ved palpation, inden der deponeres en sæddosis. Hvis kateteret er i urinblæren, kan den kraniale del af vagina og livmoderhalsen palperes over kateteret. Væggene i urinblæren er normalt tyndere end vagina, og spidsen af kateteret skiller sig mere tydeligt ud end hvis det var i vagina. For at palpere livmoderhalsen indføres et AI-kateter i tævens vagina. Indførelsen af kateteret Letter, hvis vulvaen hæves, indtil den er lige under anus (som når tæven står for hanhunden). Når spidsen af kateteret indføres så langt som til straks kranial til bækken randen, skal det palperes. Cranially vagina i de fleste tæver skråner lidt nedad. I nogle racer har vagina imidlertid en mere dorsal retning, især synshundene med en meget buet lænd. Kateterets kraniale ende skal nu sænkes tættere på mavevæggen for at blive mere tilgængelig for palpation. Når kateterspidsen kan palperes og dens korrekte position i vagina således kontrolleres, introduceres den omhyggeligt yderligere under fortsat palpatorisk kontrol, indtil den når det paracervikale område. Dette er den smalle, kraniale del af vagina skabt af den dorsale, median post-cervikale fold og kan palperes som en 1 til 2 cm lang, fast struktur. Det ender ved livmoderhalsen, som i en tæve i østrus er en 0,5 til 1,5 cm hård, afrundet til ovoid frit bevægelig struktur. Det er normalt ikke muligt at føre den ydre beskyttelseskappe af det skandinaviske kateter, som har en diameter på 10 mm, ind i det paracervikale område. Også det tyndere AI-kateter af plast, der har en diameter på 5 mm, kan være for bredt til at introducere i det paracervikale område i nogle tæver, især dem fra de mindre racer, eller dem, der ikke har født et kuld hvalpe. Når livmoderhalsen er blevet identificeret, kan corpus uteri og livmoderhornene palperes foran denne struktur. Sænk spidsen af kateteret, og luk derefter tommelfingerspidsen mod pegefingeren over kateteret, løft derefter kateterets kraniale ende på en sådan måde, at livmoderhalsen og livmoderhornene trækkes opad mellem fingrene. Deres størrelse og konsistens bliver derefter tydelige. (Denne metode til palpering af livmoderen er også meget nyttig til tidlig graviditetsdetektion og til at undersøge tæver med mistanke om pyometra).

Intra-uterin Insemination ved hjælp af det skandinaviske kateter

det skandinaviske kateter består af et 1 – 2 mm bredt stålkateter med et 0.75 mm til 1 mm diameter spids, og kommer i tre forskellige længder: 20, 30 eller 40 cm. Den bruges sammen med en ydre beskyttelseshylster af nylon med en diameter på 10 mm (Fig. 1 og Fig. 2). Det mellemstore kateter passer til de fleste små og mellemstore tæver. Udstyret kan fås hos den norske Fur Breeders ‘ Association, P. O. Boks 136, Priskern, N-0509 Oslo 5, Norge.

figur 2. Et nærbillede af de to størrelser af spidser af det skandinaviske AI-kateter til hunde.

Intra-uterin AI med det skandinaviske kateter udføres med tæven stående på gulvet eller på et bord. Sedation er meget sjældent nødvendig; tværtimod accepterer de fleste tæver i østrus frit denne type håndtering. I tilfælde af at en let sedation skal kræves for eksempel i en meget stor, overvægtig eller nervøs tæve, kan 1 – 3 mg/kg IM eller IV anvendes. Det indre stålkateter, med spidsen indeni og beskyttet af nylonkappen, indføres i vagina. Den kraniale ende af nylonkappen palperes foran bækkenranden som tidligere beskrevet. Hvis spidsen af kateterkappen er sænket tættere på mavevæggen, findes livmoderhalsen normalt et par cm foran og over den. Stålkateteret indføres derefter gennem kappen, indtil dets spids når den ventrale forniks. Livmoderhalsen er fastgjort mellem tommelfingeren og pegefingeren, og ved at anvende en let nedadgående trækkraft ved corpus uteri vippes den, så vinklen på livmoderhalskanalen bliver mere vandret (Fig. 3).

figur 3. En skematisk tegning af hundens paracervikale region og livmoderhalskanalen med det skandinaviske kateter på plads i kranialskeden. Ved manipulation ved livmoderhalsen og corpus uteri ændres livmoderhalsens vinkel for at få livmoderhalskanalen i bedre tilpasning til spidsen af kateteret for at lette kateteriseringen.

spidsen af kateteret trækkes derefter forsigtigt ud, mens det skubbes gentagne gange mod overfladen af livmoderhalsen på jagt efter åbningen af livmoderhalskanalen. Fornemmelsen, når denne åbning findes, kan i de fleste tilfælde beskrives som følelsen af at røre brusk, dvs. “sprød”. Når åbningen er fundet, skal du rette kateteret og begynde at arbejde livmoderhalsen mod kateteret. Den cervikale kanal er 5 til 10 mm lang og ikke altid helt lige. Således kan det være nødvendigt at anvende et let tryk, mens kateteret drejes for at lette det igennem. I de fleste tæver kan spidsen af kateteret let mærkes foran livmoderhalsen i corpus uteri. I nogle tæver er fornemmelsen imidlertid ikke så tydelig. Sprøjten, der indeholder sæd, er forbundet med kateteret, og sæden infunderes langsomt i livmoderen. Nogle gange er der en modstand mod infusion afhængigt af om kateterets åbning presser mod endometrial slimhinden. En let nedadgående trækkraft af corpus uteri eller livmoderhalsen lindrer normalt situationen og tillader sædinfusion. For at kontrollere, at kateteret virkelig er i tævens livmoder, kan 1 – 2 ml fysiologisk saltvand infunderes. Hvis kateteret er i den rigtige position i livmoderkroppen, kan væsken let infunderes. Hvis kateteret på den anden side er i det paracervikale område, vil der være en næsten øjeblikkelig tilbagestrømning af saltvand mellem kateteret og nylonkappen. Kateteret fjernes, og tævens bagfjerdinger hæves, og tæven holdes i denne position i 5 – 10 minutter efter AI for at minimere tilbagestrømning af sæd og for at lette livmodertransport af sædceller mod æggelederne . Tæven skal også være fjedret omkring perinealområdet, da dette menes at stimulere livmoderkontraktioner. At lære denne teknik kræver en vis øvelse, men når den først er lært, er det en hurtig metode, som normalt udføres inden for få minutter. Det anbefales, at der i første omgang opnås organprøver til træningsformål og anatomisk undersøgelse. Det er også en fordel, hvis især de første forsøg foretages i tæver, der har født et eller flere kuld, da de normalt er meget lettere at kateterisere. Perforeringer kan forekomme, hvis kateteret indføres blindt eller med kraft. Forudsat at kateteriseringen udføres under omhyggelig palpatorisk kontrol, er teknikken imidlertid helt sikker for tæven. Nogle tæver er sværere at kateterisere, især dem, der tilhører nogle af de gigantiske racer, såvel som overvægtige eller nervøse dyr. Brug af det skandinaviske kateter kun mellem 2 og 3,5% af forsøgene på intra-uterin kateterisering mislykkedes . Resulterende hvalpehastigheder ved hjælp af frosset optøet sæd er rapporteret at være 84.5% og 71%, når de udføres af dygtige inseminatorer, i gennemsnit 65% med frisk og kølet sæd og 52% med frosset optøet sæd i en større feltundersøgelse, der også involverede mindre erfarne inseminatorer (Fig. 1). Denne teknik kan også anvendes til intra-uterin infusion af kontrastmedium til hysterografisk undersøgelse af tæven .

Intra-uterin Insemination ved hjælp af endoskopisk visualisering af livmoderhalsen

Transcervikal intra-uterin insemination kan også udføres ved hjælp af et stift fiberoptisk endoskop og et urin-eller angiografisk kateter på den stående tæve og uden sedation (Fig. 4 og Fig. 5).

Intra-uterin Insemination ved hjælp af laparoskopi

Abdominal laparoskopi bør tilbyde et noget mere acceptabelt alternativ til fuld operation for AI hos hunden. Teknikken er blevet beskrevet af vildt og Silva et al. . En graviditetsrate på 60 Til 73% er rapporteret af AI ved hjælp af laparoskopi , men antallet af tæver i disse undersøgelser var få.

Intra-uterin Insemination ved hjælp af kirurgi

kirurgi til udførelse af intra-uterin insemination er rapporteret . Forskellige kirurgiske procedurer er blevet anvendt, med tæven under generel anæstesi og i dorsal recumbency. Den ventrale mave klippes, og efter rutinemæssig kirurgisk forberedelse foretages et snit på 4-6 cm midt imellem pubis og umbilicus gennem linea alba. Livmoderen hæves gennem snittet, og nålen på sprøjten, der indeholder sæden, indsættes i lumen i livmoderkroppen i en 45o vinkel med nålens skråning op. Sæden injiceres langsomt i livmoderen. Det skal flyde let med åbenlyst afstand af livmoderhornene, ellers skal nålen omplaceres. En saltvand fugtet gasbind holdes over injektionsstedet, efter at nålen er trukket tilbage. Efter 1 min fjernes gasbindet, livmoderen udskiftes i maven og såret lukkes ved hjælp af rutinemæssig metode. For at undgå tilbagestrømning af sæd skal tæven placeres med ryggen hævet, når hun kommer sig efter anæstesi . Omkring 60% graviditetsrate er rapporteret efter kirurgisk AI hos hunden , men som med laparoskopiske AI-resultater er baseret på begrænsede eksperimentelle undersøgelser, og der er ingen feltdata tilgængelige til evaluering ved hjælp af nogen af metoderne. Om det er etisk acceptabelt at ty til kirurgi for at opnå graviditeter kan diskuteres. Metoden, selv om den er anbefalet af nogle, anses af mange for at være uetisk og uacceptabelt stressende for tæven. Risikoen for infektion osv. forbundet med kirurgi generelt og det begrænsede antal kirurgiske AI ‘ er, der kan udføres i en given tæve, er to åbenlyse ulemper. Metoden er også kostbar og tidskrævende.

1. Seager, Platt CC, Fletcher vs. Befrugtningshastigheder og relaterede data ved hjælp af frosset hundesæd. J Reprod Fertil 1975; 45: 189-192.

2. Linde-Forsberg C, Forsberg M. fertilitet hos hunde i forhold til sædkvalitet og tidspunkt og sted for insemination. J Reprod Fertil 1989; 39 (Suppl): 299-310. – PubMed-

3. Linde-Forsberg C, Forsberg M. Resultater af 527 kontrollerede kunstige inseminationer hos hunde. J Reprod Fertil 1993; 47 (Suppl): 313-323. – PubMed-

4. Linde-Forsberg C, Strr Kurtm Holst B, Govette G. sammenligning af fertilitetsdata fra vaginal vs intrauterin insemination af frosset optøet hundesæd: en retrospektiv undersøgelse. Theriogenologi 1999; 52: 11-23. – PubMed-

5. Linde-Forsberg C. fertilitetsdata fra 2041 kontrollerede kunstige inseminationer hos hunde. I: Procedure af 4. Int Symp Canine Feline Reprod, Oslo, 2000, 120 s.(abstr.)

6. Thomassen R, Farstad V, Krogenaes, a, Fougner, J. A. og Andersen Berg K. Kunstig befrugtning med frosset sæd i hunden. En retrospektiv undersøgelse. J Reprod Fertil 2001, i pressen.

7. Tsutsui T, Kaakami E, Murao I, et al. Transport af sædceller i tævens reproduktive kanal: observationer gennem livmoderfistler. Jpn J Dyrlæge Sci 1989; 51: 560-565. – PubMed-

8. Linde-Forsberg C. kunstig befrugtning med frisk, kølet udvidet og frosset optøet sæd i hunden. Seminarer i Vet Med Surg (lille dyr) 1995; 10: 48-58.

9. Tsutsui T, Tsuka T, Shimisu T, Murao I, Kovakami E, Ogasa A. Kunstig befrugtning med frisk sæd i Beagle tæver. Jpn J Dyrlæge Sci 1988; 50: 193-198.

10. Andersen K. Insemination med frosset hundesæd baseret på en ny inseminationsteknik. 1975; 10: 1-4.

11. Linde C. Transport af røntgenfast væske ind i livmoderen efter vaginal aflejring i den østrous tæve. Acta vet scand 1978; 19: 463-465.

12. B, Lagerstedt A-S, Linde C, Obel N. hysterografi i tæven. Vet Radiol 1985;26:12-18.

13. Ikke-kirurgisk intrauterin kunstig insemination hos tæver ved hjælp af frosset sæd. J Reprod Fertil 1993; 47 (Suppl): 307-311. – PubMed –

14. Battista M, Parker J, Concannon PV. Hundesæd efter optøning overlevelse efter frysning i sugerør eller pellets ved hjælp af rør, lactose, tris eller TESTFORLÆNGERE. I: arbejdet i 11. Int Congr Anim Reprod og AI, Dublin 1988; 3: 229-231.

15. Vildt de. Laparoskopi. I: Burke TJ, Red. Reproduktion af små dyr og infertilitet. Philadelphia: Lea & Febiger, 1986;121-140.

16. Silva LDM, Onclin K, Snaps F, Verstegen JP. Laparoskopisk intrauterin insemination i tæven. Theriogenologi 1995; 43: 615-623.

17. Silva LDM, Verstegen JP. Sammenligninger mellem tre forskellige forlængere til intrauterin insemination hos hunde med frosne optøede sædceller. Theriogenologi 1995; 44: 571-579.

18. Silva LDM, Onclin K, Lejeune B, Verstegen JP. Sammenligning af intravaginal og intrauterin insemination af tæver med frisk eller frossen sæd. Vet Rec 1996; 138: 154-157. – PubMed –

19. Smith FO, Graham EF: kryopræservering af hundesæd: teknik og ydeevne. I: arbejdet i Congr Anim Reprod og AI, Champaign-Urbana 1984; 2: 216.

20. Hutchison RV. Vaginal & kirurgisk intrauterin aflejring af sæd. I: Proceedings of the Canine Theriogenology Short Course 1993; 33-37.

21. Hutchison RV. Maksimering af undfangelseshastigheder ved hjælp af frisk afkølet eller frosset hundesæd. I: Proceedings of the Canine Male Reprod Symp 1997; 61-70.