Hvad er et polyklonalt antistof?
hvordan man laver polyklonale antistoffer
hvordan man laver polyklonale antistoffer
et polyklonalt antistof er en samling af manyimmunoglobuliner, der hver genereres fra en anden B-celleklon. Disse antistoffer retter sig mod forskellige epitoper eller bindingssteder på et enkelt antigen. Afledning fra flere B-cellekloner og efterfølgende målretning af flere epitoper er det, der adskiller polyklonale antistoffer framonoklonale antistoffer.
Sådan fremstilles polyklonale antistoffer
Al antistofgenerering, polyklonal eller monoklonal, begynder med fremkaldelse af et immunrespons, betegnet immunisering. De tilsigtede mål injiceres i værten, genkendes af immunsystemet som fremmed og målrettes af antistoffer til immunblokering eller clearance. Manglende montering af et immunrespons ville kræve brug af adjuvanser, immunogene stoffer såsom Freunds adjuvans eller nøglehul limpet hemocyanin (KLH) for yderligere at drive immunrekruttering. Immunisering omfatter størstedelen af, hvad der kræves for at fremstille polyklonale antistoffer. Et typisk immunrespons er beskrevet nedenfor.
fremstilling af antistoffer begynder med immunisering
Initial eksponering for Prime immunrespons
Initial værtseksponering for antigen med passende adjuvanser kaldes eksponering “Prime” immunisering. Typiske eksponeringsmetoder inkluderer injektion i huden, peritoneum, subkutant lag eller muskel. Mindre almindelige alternativer er oral og intranasal administration.DNA-immunisering er også en ny teknologi til giftige eller på anden måde vanskelige at producere antigener. Enhver efterfølgende eksponering for antigen kaldes en” boost ” immunisering.
Antigenbehandling af antigenpræsenterende celler
makrofager, dendritiske celler (DC) og i mindre grad B-celler, alle antigenpræsenterende celler (APC ‘ er), internaliserer antigen ved endocytose eller fagocytose. Antigenbehandling bryder antigenet i mindre stykker, som derefter flyttes til overfladen af APC.
stimulering af B-celler
genkendelse af antigen præsenteret på overfladen af APC ‘ er inducerer frigivelse af stimulerende signalmolekyler, cytokiner, fra hjælper-T-celler. Disse cytokiner aktiverer B-celler, som også genkendte antigen gennem deres B-cellereceptor (BCR). Nogle B-celler kræver ikke hjælper-t-celleaktivering efter BCR-antigen-interaktion, hvilket normalt producerer et hurtigere immunrespons med antistoffer med lavere affinitet. Inddragelsen af hjælper-T-celler er kritisk i et fyldt immunrespons såvel som reguleringselvtolerance.
Proliferation af B-celler og Antistofsekretion
aktiverede B-celler deler sig for at skabe både hukommelse B-celle og plasmacellepopulationer. Begge typer celler genkender den samme epitop. Plasmaceller udskiller antistoffer i serumet til immungenkendelse, mens hukommelse B-celler vedvarer i længere perioder, hvilket giver hurtig reaktion på sekundær eksponering af det samme antigen.
måling af immunresponset
måling af antistofniveauerne under immuniseringsprocessen er nødvendig for at evaluere fremskridt. AnELISA mod målantigen sammenligner immuniserede serumprøver med præimmuniserede serumprøver, der afslører graden af immunrespons drevet af immunisering. Serielle fortyndinger af prøver bestemmer antistoffets titer. Typisk en 1:64.000 titer betragtes som et robust immunrespons og tilstrækkeligt til at fortsætte til serumhøst eller lymfocytfusion. Lavere titere kan kræve efterfølgende boost-immuniseringer, alternative administrationsveje eller yderligere adjuvanser.
polyklonalt Antistofserumhøst
polyklonalt antistofproduktion kræver blot genopretning af blod fra værtsdyret og adskillelse af den cellulære fraktion fra serumfraktionen indeholdende udskillede antistoffer. Da mange antigenspecifikke antistoffer udskilles af flere aktiverede B-celler, indeholder blodserum de mange produkter fra forskellige antistofkloner, deraf udtrykket polyklonalt antistof. Specifikt opnås dannelsen af flere klonale antistoffer mod et antigen ved både behandling af antigen i fragmenter såvel som hvert fragment med mindre regioner, betegnet epitoper. Hver kan genkendes af specifikke BCR ‘ er. Forskellige B-cellepopulationer udskiller specifikke, men alligevel forskellige antistoffer mod det samme antigen. Endvidere indeholder serum ikke kun antistoffer rettet mod det tilsigtede målantigen, men alle andre immunoglobuliner mod andre mål, lægemidler, hormoner osv. det er i serum. Serum kan bruges direkte som en molekylærbiologisk sonde, men kræver ofte yderligere oprensning for at øge følsomheden og specificiteten af et bestemt assay. Affinitetsrensning opnår antistofgenvinding i varierende grad afhængigt af teknikken som vist nedenfor, men ingen når epitopniveauet specificitet af et monoklonalt antistof.
| Affinity Purification Technique | Pro | Con |
|---|---|---|
| Protein A/G | Simple, Cost effective | Recovers all immunoglobulin. |
| Antigen Specific | Recovers only antigen specific antibody. | kræver en ikke-triviel mængde antigen. |
Polyclonal Antibody Applications
| Application | Polyclonal AntibodyUse Rationale |
|---|---|
|
ELISA Detection Antibody
(direct, indirect, sandwich, and capture ELISA formats) |
Binds multiple epitopes to deliver many detection molecules.
|
|
ELISA Capture Antibody
|
Polyreactivity can maximally recover antigen from samples.
|
|
Western Blot
Detection Antibody |
Multiple epitope recognition can allow for antigen changes (denaturing/linearizing).
|
|
Target recognized by many Ab for maximal drug delivery, immune recruitment, blocking, or activation.
|
|
|
kliniske Tests
|
potentielt øget detektionskapacitet.
|
polyklonale Antistofrelaterede tjenester
Ourpolyekspress-service er en omkostningseffektiv og hurtig måde at lave brugerdefinerede molekylære prober på. Fra antigensekvens til leverede antistoffer på 45 dage garanteret. Leder du efter endnu mere kontrol med antistofudvikling? Se på nogle af vores andre antistoftjenester:
- DNA-immuniseringer, vores specialitet. Til starten af ethvert antistofudviklingsprojekt. Omgår in vitro – proteinantigenproduktion og beskæftiger sig med vanskelige mål.
- Monoekspress-Antistofservicetjenesten bærer branchens førende applikationsgarantier, der sikrer succes i dine analyser.
- Anti-idiotype antistoffer gør PK-eller PD-test af terapeutiske antistoflægemidler let. De registrerer kun CDR af målantistoffet.
med 12 års erfaring med at udvikle tilpassede antistoffer er dit projekt i eksperthænder. Få et tilbud i dag!
tilbud og bestilling
vores kundeservicemedarbejdere er tilgængelige 24 timer i døgnet, mandag til fredag for at hjælpe dig.