V: Nedávné Pokroky v Malých Zvířat, Reprodukce, P. W. Concannon, G. Anglie a J. Verstegen (Eds.) Vydavatel: mezinárodní veterinární Informační služba (www.ivis.org), Ithaca, New York, USA.

intrauterinní inseminace u psa pomocí skandinávského Trans-cervikálního katétru a srovnání s jinými metodami ( 2-Únor-2001)

C. Linde-Forsberg

Fakulta Veterinárního Lékařství, klinika Porodnictví a Gynekologie, švédská Zemědělská Univerzita, Uppsala, Švédsko

Úvod

zájem o psí sperma zachování a umělé oplodnění (AI) se stále zvyšuje, svět-široký, ale poměrně málo studií jsou publikovány každý rok v této oblasti, a to je obzvláště obtížné najít data z umělé inseminaci použití čerstvého spermatu, nebo spermatu zachovalé podle různých metod pro zchlazování nebo zmrazování a rozmrazování, a také srovnání výsledků při různých používají se techniky k provádění inseminací. Jedním z důvodů nedostatku údajů je to, že je nákladné provádět experimentální studie u psů a jen málo výzkumných center může udržovat dostatečně velké psí kolonie pro tento druh studií. Dalším důvodem je, že většina velkých společností, zpracování a distribuci psí sperma pro chovatele psů pracují na čistě komerční bázi, a i když některé z nich se zdají vést záznamy o jejich výsledcích ani tyto výsledky ani složení nástavce nebo metody pro uchování spermatu jsou zveřejněny. Žádné znalosti takto získané bude, proto zůstávají u různých společností, a nebude přínosem pro vědecký svět, a tedy ani pro chovatele psů obecně. Jediné studie o umělé inseminaci psů, které uvádějí výsledky plodnosti z velkého počtu inseminací, jsou studie Seager et al. na 156 zmrazené-rozmrazit sperma AIs pomocí vaginální depozice, Linde-Forsberg & Forsberg na 470 a 527 AIs, respektive používat jak čerstvé, chlazené rozšířené a zmrazené-rozmrazit sperma a vaginální stejně jako uvnitř dělohy, AI, Linde-Forsberg et al. na 327 zmrazené-rozmrazit sperma AIs, porovnání vaginální a intra-děložní AI, Linde-Forsberg podávání zpráv o 2041 AIs s čerstvé a chlazené prodloužena, a zmrazené-rozmrazit spermatu a pomocí obou vaginální a intra-děložní AI, a Thomassen et al., na 312 zmrazených-rozmrazených hlavně intrauterinních AIs. Řada faktorů, jsou důležité při určování úspěšnosti inseminace u psů, jako je například kdy a kolikrát během estrous cyklu feny AI se provádí, kvality spermatu a zacházení, a technika inseminace. Více informací o těchto aspektech naleznete v citovaných odkazech. Tento článek se bude zabývat pouze technikami inseminace a účinky místa ukládání spermatu. Nedávné klinické studie poukázaly na význam intra-děložní oproti intravaginální inseminace u psů a jsou první prokázat výrazně lepší výsledky, když se sperma bylo uloženo v děloze, spíše než v pochvě. Ve studii Linde-Forsberg et al., míra šlehání pomocí intrauterinní depozice zmrazeného spermatu byla 84,4 % ve srovnání s 58.9 % pomocí vaginální depozice, a průměrná velikost vrhu byla 5.4 + 3.0 oproti 4.0

+2.7 mláďat/vrh (P<0.001). Údaje o plodnosti z 2041 umělých inseminací jsou psi, provedeni u švédských fen v letech 1990 až 1998 a nahlášeni do Kennel Clubu do 2 týdnů (tj. předtím, než těhotenský test by mohl udělat, aby se zabránilo zkreslení výsledků), prokázaly, že výrazně vyšší porodu sazby a vrhu byly získány nejen s zmrazené-rozmrazit spermatu, ale také čerstvé i chlazené, rozšířené spermatu, pokud sperma bylo uloženo v děloze, spíše než v pochvě (Tabulka 1).

výsledky použití čerstvého spermatu, je uvedeno v Tabulce 1, jsou mírně příliš vysoká, protože 11 % z těch fen, z různých důvodů, ne jen uměle oplodněna, ale také nakryta. Nejčastějším důvodem bylo to, že se chovatelé pokusili pářit feny příliš brzy během říje a když se psi nebudou pářit, jejich majitelé požádali AI. Do porodu frekvence v i-pářil skupina byla stejně vysoká jako 84.5%, s průměrnou velikost vrhu 6,0 + 2.8 mláďat, oproti porodu sazba o 48,9% a průměrná velikost vrhu 5,8 + 2.8 štěňata pro ty děvky, které byly pouze uměle oplodněna. Zdá se tedy, že počet AIs, které jsou prováděny s čerstvého spermatu ve skutečnosti se provádí v non-optimální doba, během říje, obvykle proto, že chovatel je nezkušenost, ale poměrně špatný výsledek, je pravděpodobné, že také z důvodu, že AI je požadováno, protože různé problémy v psi. Švédské údaje však jasně ukazují, že u psa intrauterinní AI výrazně zlepšuje rychlost a velikost vrhu. Do porodu sazbu o intra-děložní AI zvýšil z 36% na čerstvé sperma do 50% pro zmrazené-rozmrazit spermatu, ve srovnání s vaginální AI. A s intrauterinní AI se průměrná velikost vrhu zvýšila o 0,3 mláďat na vrh u zmrazeného spermatu a o 0,6 a 0,7 na vrh u čerstvého a chlazeného rozšířeného spermatu. Je také zajímavé v této souvislosti na vědomí, že pes je považován za druh s intra-děložní depozici spermatu na přirozené páření, protože v době, kdy kopulační kravata je u konce, spermie dosáhli vejcovody . Spermie bohatý zlomek je ejakuloval na narušování a během rané fáze kopulační kravatu, a je následován velkým objemem prostatické tekutiny, která se okamžitě spláchne spermie z úzké lebeční pochvy přes děložní hrdlo do děložní tělo a rohy. Vagina, zdá se, nabízejí nepříznivé prostředí pro psí spermie, protože velká část ztratit jejich ocasy během několika minut po nanesení v lebeční pochvy . Bylo také prokázáno, že přibližně 10 krát tolik spermií, jsou povinni dosáhnout podobných výsledků tím, že vaginální AI jako intra-děložní AI s čerstvého spermatu , stejně jako s zmrazené-rozmrazit spermatu . Existuje tedy mnoho faktorů, které přispívají k horším výsledkům získaným ukládáním intravaginálního spermatu ve srovnání s ukládáním uvnitř dělohy.

metody provádění intrauterinního AI u psa.

Uvnitř děložní AI v pes může být provedeno transcervically buď Skandinávský (či norského) katétru, nebo pomocí pevné fiberoptic vaginální endoskopu k vizualizaci děložního čípku a pes močového katétru do příčné. Intrauterinní AI lze dosáhnout také invazivními metodami, jako je laparoskopie nebo úplná břišní chirurgie. V některých zemích mohou být tyto metody nezákonné nebo nejsou považovány za eticky přijatelné.

Prohmatání Čípku

je naprosto nezbytné, aby osoba, která chce provádět psí AI se učit, jak najít hrdla do břišní pohmat aby bylo možné, aby se sperma na správné místo a aby se zabránilo zranění fena. Fena by měla mít prázdný žaludek a močový měchýř, aby se usnadnil postup. Pro tréninkové účely se doporučuje používat jednorázové plastové Psí vaginální AI-katétry (Minitüb GmbH, Tiefenbach, Německo) (obr. 1).

Obrázek 1. Tři velikosti skandinávského umělého inseminačního katétru pro psy a plastového jednorázového vaginálního umělého inseminačního katétru.

Protože uretheral otevření fena se nachází na pánevní okraj, je překvapivě snadné pro AI katetru, nebo tenký rigidní endoskop, být neúmyslně zavedené do močového měchýře. Kromě nebezpečí perforace močového měchýře katétrem je zřejmé, že po AI nebude následovat žádné těhotenství. Správná poloha katétru by tedy měla být vždy zkontrolována palpací před uložením dávky spermatu. Pokud je katétr v močovém měchýři, může být lebeční část vagíny a děložního čípku palpována nad katétrem. Stěny močového měchýře jsou obvykle tenčí než stěny vagíny a špička katétru vyniká výrazněji, než kdyby byla v pochvě. Pro palpaci děložního čípku se do vagíny feny zavede katétr AI. Zavedení katétru je usnadněno, pokud je vulva zvýšena, dokud není těsně pod konečníkem(jako když fena stojí za psa). Když je špička katétru zavedena až k okamžitému lebečnímu okraji pánve, měla by být palpována. Kraniálně se vagina u většiny fen svažuje mírně dolů. U některých plemen, zejména u pozorovacích psů s velmi klenutým bedrem, má vagina hřbetní směr. Kraniální konec katétru by nyní měl být spuštěn blíže k břišní stěně, aby byl přístupnější k palpaci. Když může být hrot katétru palpován a takto zkontrolována jeho správná poloha v pochvě, je pečlivě zaveden dále, pod pokračující palpační kontrolou, dokud nedosáhne paracervikální oblasti. Je to úzký, kraniální část pochvy vytvořená hřbetní, mediánu post-krční složit a lze nahmatat jako 1 až 2 cm dlouhou, pevnou strukturu. Končí u děložního čípku, což je u feny v říji 0,5 až 1,5 cm tvrdá, zaoblená až vejčitá volně pohyblivá struktura. Obvykle není možné přenést vnější ochranný plášť skandinávského katétru, který má průměr 10 mm, do paracervikální oblasti. Také tenčí plastové AI katétr, který má průměr 5 mm, může být příliš široký, zavést do paracervical oblasti v některé feny, zvláště těch menších plemen, nebo ty, které nemají po porodu vrhu mláďat. Jakmile je děložní hrdlo identifikováno, může být corpus uteri a děložní rohy nahmatány před touto strukturou. Spodní hrot katetru a pak zavřete špičku palce proti ukazováčku nad katétr, pak zvedněte kraniální konec katétru tak, že děložní hrdlo a děložní rohy jsou vytáhl nahoru mezi prsty. Jejich velikost a konzistence se pak projeví. (Tato metoda pohmatem děloha je také velmi užitečná pro včasnou detekci březosti a zkoumat děvky s podezřením na pyometra).

intrauterinní inseminace pomocí skandinávského katétru

skandinávský katétr se skládá z ocelového katétru o šířce 1 – 2 mm s 0.Špička o průměru 75 mm až 1 mm a je dodávána ve třech různých délkách: 20, 30 nebo 40 cm. Používá se společně s vnějším ochranným nylonovým pláštěm o průměru 10 mm (obr. 1 a obr. 2). Středně velký katétr se hodí pro většinu malých a středních fen. Zařízení lze získat od norské asociace chovatelů kožešin, P. O. Box 136, Økern, N-0509 Oslo 5, Norsko.

Obrázek 2. Detailní záběr dvou velikostí špiček skandinávského AI katétru pro psy.

intrauterinní AI se skandinávským katétrem se provádí s fenou stojící na podlaze nebo na stole. Sedace je velmi vzácná, naopak většina fen v říji tento typ manipulace volně přijímá. V případě, že by měla být vyžadována lehká sedace například u velmi velké, obézní nebo nervózní feny, lze použít 1 – 3 mg / kg xylazinu IM nebo IV. Vnitřní ocelový katétr, se špičkou uvnitř a chráněnou nylonovým pláštěm, je zaveden do pochvy. Kraniální konec nylonového pláště je palpován před pánevním okrajem, jak bylo popsáno výše. Pokud byl hrot pláště katétru spuštěn blíže k břišní stěně, děložní hrdlo se obvykle nachází několik cm před ním a nad ním. Ocelový katétr se pak zavádí pláštěm, dokud jeho špička nedosáhne ventrálního fornixu. Čípek je pevně mezi palcem a ukazováčkem a použitím mírně klesající trakce v corpus uteri, to je nakloněna tak, že úhel, z cervikálního kanálu se stává více horizontální (Obr. 3).

obrázek 3. Schematické kreslení Psí paracervikální oblasti a cervikálního kanálu se skandinávským katétrem v poloze v lebeční pochvě. Manipulací na děložním čípku a corpus uteri se změní úhel děložního čípku, aby se cervikální kanál lépe vyrovnal se špičkou katétru, aby se usnadnila katetrizace.

špičku katétru je pak pečlivě staženy, zatímco tlačí opakovaně proti povrchu čípku při hledání otevření děložního hrdla. Pocit, když je tento otvor nalezen, lze ve většině případů popsat jako pocit dotyku chrupavky, tj. Jakmile je otvor nalezen, upevněte katétr a začněte pracovat s děložním hrdlem proti katétru. Cervikální kanál je dlouhý 5 až 10 mm a ne vždy zcela rovný. Proto může být nutné vyvinout mírný tlak při otáčení katétru, aby se usnadnil. U většiny fen může být špička katétru snadno cítit před děložním hrdlem v corpus uteri. U některých fen však tento pocit není tak výrazný. Injekční stříkačka obsahující sperma je připojena ke katétru a sperma se pomalu infunduje do dělohy. Někdy existuje rezistence na infuzi v závislosti na tom, zda otevření katétru tlačí na sliznici endometria. Lehká trakce korpusu dělohy nebo děložního čípku obvykle zmírňuje situaci a umožňuje infuzi spermatu. Chcete – li zkontrolovat, zda je katétr skutečně v děloze feny, může být infuzováno 1-2 ml fyziologického roztoku. Pokud je katétr ve správné poloze v těle dělohy, může být tekutina snadno infuzována. Pokud je naopak katétr v paracervikální oblasti, dojde mezi katétrem a nylonovým pláštěm k téměř okamžitému zpětnému toku fyziologického roztoku. Katétr je odstraněn a zadních končetin feny jsou zvýšené a mrcha stále v této poloze po dobu 5 – 10 minut po AI, aby se minimalizoval zpětný tok spermatu a usnadnit děložní transportu spermií směrem k vejcovody . Fena by měla být také opeřena kolem perineální oblasti, protože se předpokládá, že stimuluje kontrakce dělohy. Naučit se tuto techniku vyžaduje určitou praxi, ale jakmile se to dozví, je to rychlá metoda, která se obvykle provádí během několika minut. Doporučuje se, aby byly zpočátku získány vzorky orgánů pro účely výcviku a anatomické studie. Je také výhodou, pokud se zejména první pokusy provádějí u fen, které porodily jeden nebo více vrhů, protože je obvykle mnohem snazší katetrizovat. Perforace může nastat, pokud je katétr zaveden slepě nebo silou. Za předpokladu, že katetrizace je prováděna pod pečlivou palpatorickou kontrolou, je však technika pro fenu zcela bezpečná. Některé feny je obtížnější katetrizovat, zejména ty, které patří k některým obřím plemenům, stejně jako obézní nebo nervózní zvířata. Použití skandinávského katétru pouze mezi 2 a 3,5% pokusů o intrauterinní katetrizaci bylo neúspěšné . Bylo hlášeno, že výsledná míra whelpingu pomocí zmrazeného rozmrazeného spermatu je 84.5% , 71%, když se provádí zkušený inseminátora, v průměru 65% čerstvé a chlazené sperma a 52% s zmrazené-rozmrazit spermatu, v větší oblasti studie zahrnující také méně zkušených inseminátora (Obr. 1). Tato technika může být také použita pro intrauterinní infuzi kontrastního média pro hysterografické vyšetření feny .

Intra-Děložní Inseminace pomocí Endoskopické Vizualizace děložního Čípku

Transcervical intra-děložní inseminace může být také provedeno pomocí pevného fiberoptic endoskopů a močových nebo angiografického katetru, o postavení děvka, a bez sedace (Obr. 4 a obr. 5).

Intra-Děložní Inseminace pomocí Laparoskopie.

Břišní laparoskopie by měl nabídnout poněkud přijatelnější alternativa k plné operaci pro AI v psa. Tuto techniku popsali Wildt a Silva et al. . Při laparoskopii byla hlášena míra těhotenství 60 až 73%, ale počet fen v těchto studiích byl malý.

intrauterinní inseminace pomocí chirurgického zákroku

byla hlášena operace k provedení intrauterinní inseminace . Byly použity různé chirurgické zákroky, přičemž fena byla v celkové anestezii a v dorzální ležérnosti. Ventrální břicha je oříznut, a po rutinní chirurgická příprava 4 -6 cm, řez se provádí uprostřed mezi stydké kosti a pupek, přes linea alba. Děloha je zvýšené řezem, a jehlu injekční stříkačky obsahující sperma je vložen do dutiny děložní tělo na 45 ° úhel zkosení jehly. Sperma se pomalu vstřikuje do dělohy. Měl by snadno proudit se zjevným roztažením děložních rohů, jinak by měla být jehla přemístěna. Po vytažení jehly se nad místem vpichu drží slaná navlhčená gáza. Po 1 min se gáza je odstraněn, dělohy nahrazuje do břicha a rána uzavřena pomocí běžné metodiky. Aby se zabránilo zpětnému toku spermatu děvka by měl být umístěn s jeho zadní zvýšené, jak se probere z narkózy . Přibližně 60% míra těhotenství byla hlášena po chirurgickém AI u psa, ale stejně jako u laparoskopické AI výsledky jsou založeny na omezených experimentálních studiích a nejsou k dispozici žádné terénní údaje pro hodnocení pomocí obou metod. Zda je eticky přijatelné uchýlit se k chirurgickému zákroku k dosažení těhotenství, je diskutabilní. Metoda, i když ji někteří obhajují, je mnohými považována za neetickou a nepřijatelně stresující pro fenu. Rizika infekce atd. spojené s chirurgickým zákrokem obecně a omezeným počtem chirurgických AI, které lze provést u dané feny, jsou dvě zjevné nevýhody. Metoda je také nákladná a časově náročná.

1. Seager SWJ, Platz CC, Fletcher WS. Míra početí a související údaje pomocí zmrazeného spermatu psa. J Reprod Fertil 1975; 45: 189-192.

2. Linde-Forsberg C, Forsberg m. plodnost u psů ve vztahu ke kvalitě spermatu a době a místu inseminace. J Reprod Fertil 1989; 39 (Suppl): 299-310. – PubMed –

3. Linde-Forsberg C, Forsberg M. Výsledky 527 kontrolovaných umělých inseminací u psů. J Reprod Fertil 1993; 47 (Suppl): 313-323. – PubMed –

4. Linde-Forsberg C, Ström Holst B, Govette G. Srovnání plodnosti data z vaginální vs intrauterinní inseminace zmrazené-rozmrazit pes spermatu: retrospektivní studie. Theriogenology 1999; 52: 11-23. – PubMed –

5. Linde-Forsberg C. Údaje o plodnosti z roku 2041 kontrolované umělé inseminace u psů. In: Řízení 4. Int Symp psí kočičí Reprod, Oslo, 2000, 120 s. (abstr.)

6. Thomassen R, Farstad W, Krogenaes, a, Fougner, J. a. Andersen Berg k. Umělá inseminace se zmrazeným spermatem u psa. Retrospektivní studie. J Reprod Fertil 2001, v tisku.

7. Tsutsui T, Kawakami E, Murao I, et al. Transport spermií v reprodukčním traktu feny: pozorování pomocí děložních píštělí. Jpn J Vet Sci 1989; 51: 560-565. – PubMed –

8. Linde-Forsberg C. Umělé oplodnění s čerstvé, chlazené prodloužena, a zmrazené-rozmrazit sperma v psa. Semináře v Vet Med Surg (malé zvíře) 1995; 10: 48-58.

9. Tsutsui T, Tezuka T, Shimizu T, Murao I, Kawakami E, Ogasa A. Umělé oplodnění čerstvým spermatem u Beagle fen. Jpn J Vet Sci 1988; 50: 193-198.

10. Andersen k. inseminace zmrazeným spermatem psa na základě nové inseminační techniky. Zuchthyg 1975; 10: 1-4.

11. Linde C. Transport rentgenové tekutiny do dělohy po vaginální depozici u estrální feny. Acta vet scand 1978; 19: 463-465.

12. Funkquist B, Lagerstedt A-S, Linde C, Obel N. hysterografie ve feně. Vet Radiol 1985; 26: 12-18.

13. Wilson m. nechirurgická intrauterinní umělá inseminace u fen pomocí zmrazeného spermatu. J Reprod Fertil 1993; 47 (Suppl): 307-311. – PubMed –

14. Battista M, Parks J, Concannon PW. Přežití psích spermií po rozmrazení po zmrazení v brčkách nebo peletách pomocí trubek, laktózy, tris nebo testovacích prodlužovačů. In: Proceedings of the 11th Int Congr Anim Reprod and AI, Dublin 1988; 3: 229-231.

15. Wildt DE. Laparoskopie. In: Burke TJ, ed. Reprodukce malých zvířat a neplodnost. Philadelphia: Lea & Febiger, 1986;121-140.

16. Silva LDM, Onclin K, Snaps F, Verstegen JP. Laparoskopická intrauterinní inseminace u feny. Theriogenology 1995; 43: 615-623.

17. Silva LDM, Verstegen JP. Srovnání tří různých prodlužovačů pro intrauterinní inseminaci psů se zmrazenými rozmrazenými spermiemi. Theriogenology 1995; 44: 571-579.

18. Silva LDM, Onclin K, Lejeune B, Verstegen JP. Srovnání intravaginální a intrauterinní inseminace fen s čerstvým nebo zmrazeným spermatem. Vet Rec 1996; 138: 154-157. – PubMed –

19. Smith FO, Graham EF: kryokonzervace psího spermatu: technika a výkon. In: Proceedings of the Xth Int Congr Anim Reprod and AI, Champaign-Urbana 1984; 2: 216.

20. Hutchison RV. Vaginální & chirurgické intrauterinní ukládání spermatu. In: Sborník psího Teriogenologického krátkého kurzu 1993; 33-37.

21. Hutchison RV. Maximalizace početí sazby pomocí čerstvé chlazené nebo zmrazené Psí sperma. In: Proceedings of the Psí samec Reprod Symp 1997; 61-70.