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A. Introducción

El típico compuesto microscopio de luz (Fig.1) es capaz de aumentar nuestra capacidad de ver detalles 1000 veces para que se puedan ver objetos tan pequeños como 0,1 micrómetros (um) o 100 nanómetros (nm). Los microscopios electrónicos amplían aún más este rango,lo que nos permite ver objetos tan pequeños como 0,5 nm de diámetro o aproximadamente 1/200, 000 del tamaño que podemos ver a simple vista. Huelga decir que el desarrollo y el uso de microscopios ha mejorado enormemente nuestra comprensión de las células y su estructura y función.

Figura 1. Microscopio compuesto binocular.

B. El aumento, la resolución y la distancia de trabajo

El aumento es simplemente una función de hacer que un objeto parezca más grande, como cuando usamos una lente de mano para agrandar la palabra impresa. La mera ampliación de un objeto sin un aumento simultáneo de la cantidad de detalles vistos no proporcionará al espectador una buena imagen. La capacidad de un microscopio (u ojo) para ver detalles es una función de su poder de resolución. El poder de resolución se define como la distancia mínima entre dos objetos a la que los objetos se pueden distinguir como separados y es una función de la longitud de onda de la luz utilizada y la calidad de la óptica. En general, cuanto más corta sea la longitud de onda de la fuente de luz, mayor será la resolución del microscopio.

La distancia de trabajo es la distancia entre la lente del objetivo y la muestra. Con un aumento bajo, la distancia de trabajo es relativamente larga. A medida que aumenta la ampliación, la distancia de trabajo disminuye drásticamente. Las lentes de inmersión en aceite tocan pacticamente la muestra. Tenga en cuenta este cambio en la distancia de trabajo con un aumento creciente para evitar daños a sus muestras.

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C. Partes del Microscopio de luz Compuesto Monocular:

Por favor, tómese el tiempo para familiarizarse con su microscopio y su uso adecuado. Los controles de las dos marcas de microscopios que utilizamos en nuestros cursos se muestran a continuación (Fig. 2).

la Figura 2. Controles en los microscopios compuestos binoculares Leica y Olympus.

1. Lente ocular o ocular: los nuestros son de aumento de 10x. Los telescopios que usaremos son monoculares (un solo ocular).)

2. Tubo corporal: contiene espejos y prismas que dirigen la imagen a la lente ocular.

3. Revólver: sujeta las lentes del objetivo, gira, nota los topes positivos para cada lente.

4. Objetivos: por lo general 3-4 en nuestros visores, 4x, 10x, 43x, 100x inmersión en aceite (bandas rojas). Aumento total = potencia ocular x potencia del objetivo.

5. Escenario: plataforma en la que se montan las diapositivas para su visualización; algunos telescopios tienen escenarios mecánicos. Aprenda a sujetar la diapositiva en su posición correcta.

6. Diafragma: el diafragma controla la cantidad de luz que pasa a la muestra y puede afectar drásticamente el enfoque de la imagen. APRENDA A USAR EL DIAFRAGMA LO MÁS RÁPIDO POSIBLE. LA MAYORÍA DE LOS PROBLEMAS DE ENFOQUE SE DEBEN A UN AJUSTE INCORRECTO DE LA LUZ.

Tenemos dos tipos:

• diafragma de iris: Busque una palanca justo debajo del escenario, cerca de la parte delantera.
• tipo de esfera: Justo debajo del escenario hay una esfera giratoria con aberturas (agujeros) de diferentes tamaños; este tipo es útil para crear un efecto de campo pseudo oscuro.

7. Perillas de enfoque: Ubicadas en el lado del microscopio; más externo es el enfoque fino y más interno es el enfoque grueso.
8. Fuente de luz: nuestros telescopios cuentan con fuentes de luz integradas. El interruptor de botón se encuentra (la mayoría de las veces) detrás de la lente de luz en la base.

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D. Cuidado y manejo del Microscopio compuesto

Solo hay unas pocas reglas absolutas que observar en el cuidado de los microscopios que usará. Si se cuidan, estos instrumentos durarán muchas décadas y seguirán funcionando bien. Informe inmediatamente a su instructor de cualquier fallo.

1. SIEMPRE use dos manos para llevar el visor, una en el brazo y otra debajo de la base, ¡SIN EXCEPCIONES! NUNCA lleve el visor boca abajo, ya que el ocular puede caerse y se caerá.

2. Use papel para lentes para limpiar todos los lentes antes de cada sesión de laboratorio y después de usar el lente de inmersión en aceite. NUNCA, NI AHORA, NI NUNCA, USE NADA QUE NO SEA PAPEL PARA LENTES PARA LIMPIAR LAS LENTES. Otros papeles son demasiado impuros y rayarán el revestimiento óptico de las lentes. Además, no use líquidos al limpiar las lentes, ¡SOLO PAPEL PARA LENTES!

3. Utilice siempre la técnica de enfoque adecuada para evitar embestir la lente del objetivo contra una diapositiva – esto puede romper la lente del objetivo y / o arruinar una diapositiva costosa.

4. Siempre apague la luz cuando no use el visor.

5. Siempre coloque el cable con cuidado fuera de peligro. Los cables colocados en los espacios de las piernas invitan a un desastre mayor en el microscopio. Intente deslizar el cable hacia abajo a través de las asas de los cajones a la orilla del espacio de su banco.

6. Siempre reemplace la cubierta del microscopio cuando la guarde

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E. Procedimiento de enfoque: Microscopios compuestos monoculares

1. Encienda la fuente de luz.

2. Cambie a la lente de objetivo 10x.

3. Retroceda en el foco grueso para elevar la pieza de la nariz.

4. Coloque el portaobjetos en el escenario y asegúrelo en la posición adecuada. Mire el portaobjetos y colóquelo de modo que la muestra esté sobre la abertura de luz del escenario.

5. Lente de objetivo inferior al límite inferior (cerca del deslizamiento). Levante la lente con la perilla de enfoque grueso hasta que vea que la imagen se enfoca y luego salga de nuevo, luego enfoque de nuevo hasta que encuentre el enfoque central. Ajuste el enfoque fino de manera similar.

6. Centre la imagen y ajuste la luz con el diafragma.

7. Recentrar y ajustar el enfoque, primero grueso, luego enfoque fino como en el paso 5.

8. Reajuste el diafragma según sea necesario.

9. Ahora cambia los objetivos al 43x si se necesita un aumento mayor. Reajuste el enfoque fino y la luz (diafragma) según sea necesario.

Nuestros alcances son parfocales, lo que significa que cuando cambia de potencia baja (100x) a alta (430x), una imagen enfocada a baja potencia permanecerá más o menos enfocada a la potencia más alta. Lo más probable es que tengas que reajustar ligeramente el enfoque fino y el diafragma.

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F. Procedimiento de inmersión en aceite

En algunos de nuestros microscopios monoculares y en todos los microscopios compuestos binoculares, tenemos lentes de inmersión en aceite de 100x. Estos se pueden identificar por una banda roja alrededor de la carcasa de la lente. Con aumentos superiores a aproximadamente 500x, la luz se refracta demasiado a medida que pasa por el aire para producir un buen poder de resolución. Por lo tanto, las ópticas para estos aumentos más altos se utilizan con un aceite mineral de alta calidad como medio para transmitir luz. Es imperativo que use solo aceite de inmersión y que limpie la lente a fondo con papel para lentes después de cada uso.

1. Localice la región de interés en su diapositiva y céntrela a 430x.

2. Elevar la lente del objetivo a su límite (p. ej., maximice la distancia entre el escenario y los objetivos) y saque el objetivo del camino aproximadamente a la mitad de la siguiente posición.

3. Coloque cuidadosamente una pequeña gota de aceite de inmersión directamente sobre el tobogán sobre el centro de la región de interés.

4. Gire el objetivo de inmersión en aceite en su posición y, con cuidado, mientras mira desde un lado, bájelo con la perilla de enfoque grueso hasta que la lente solo entre en contacto con la gota de aceite. Verá el salto de gota hacia arriba en una columna a medida que se realiza el contacto.

5. Baje la lente un poco más y luego, usando el enfoque fino y mirando a través de la lente ocular, enfoque en la muestra.

6. Cuando haya terminado, limpie la lente con papel para lentes hasta que no se desprenda más aceite y limpie la diapositiva para guardarla.

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G. Determinación del diámetro del campo de visión

Es posible que desee estimar el tamaño de las muestras (por ejemplo, células) que verá en el laboratorio. La mejor manera de hacerlo es con un micrómetro ocular, un inserto de lente ocular de precisión que tiene una regla grabada en el vidrio. Los telescopios monoculares que utilizamos en los cursos introductorios no están tan equipados, por lo que utilizaremos un método alternativo basado en conocer el diámetro del campo de visión para su microscopio en particular. Para ello, debe determinar:

• el diámetro aproximado de su campo de visión de bajo aumento para su microscopio en particular.
• la ampliación total para cada una de las lentes de tus objetivos.

Sabiendo esto para cada lente de objetivo, puede comparar el tamaño de la muestra con el diámetro de campo conocido y hacer un esimate razonable de tamaño. Esta técnica funciona para cualquier microscopio.

1. Obtenga una escala de deslizamiento y colóquela en el telescopio. Una regla métrica transparente también funcionará.

2. Ponlo en foco usando el objetivo de 10x (100x en total). Las barras de escala son incrementos de 1 mm como se muestra en la siguiente figura. Por lo tanto, una barra negra = 0,5 mm al igual que un espacio.

3. Mueva la diapositiva de manera que el borde de una barra negra exterior sea tangente al campo iluminado (consulte el punto «A» arriba).

4. A partir de ese borde, calcule cuántas barras y espacios se necesitan para cruzar el campo de visión. Probablemente tendrá que estimar la última fracción de un espacio o barra. Para la mayoría de nuestros microscopios tiene aproximadamente 1,8 -2,0 mm de ancho. Debe verificar esto en cualquier microscopio que use que no tenga un micrómetro ocular.

5. Registre el número de identificación de su telescopio y el diámetro de campo a 100 veces en su cuaderno de laboratorio para referencia futura.

6. A continuación, calcule el ancho de campo con un aumento total de 430x utilizando la siguiente fórmula (nos referimos al mag de 100x como » baja potencia «y a 430x como»alta potencia»):

(mag de baja potencia/ mag de alta potencia) x diámetro de campo de baja potencia (en mm)

Por ejemplo, supongamos que determina que el diámetro de campo de 100x es de 1,8 mm, a 430x, el diámetro de campo sería:

(100 / 430) x 1,8 mm = 0,418 mm = 418 um (micrómetros)

Tenga en cuenta que el diámetro del campo a alta potencia es proporcional a la relación entre los objetivos de baja y alta potencia. Es decir, a medida que aumenta la ampliación, el campo de visión real se vuelve proporcionalmente más pequeño.

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H. Microscopios ópticos compuestos Binoculares
Partes del microscopio óptico

1. Lente ocular o ocular: los nuestros son de aumento de 10x. Los telescopios que usaremos son binoculares (dos oculares).

2. Tubo corporal: contiene espejos y prismas que dirigen la imagen a las lentes oculares.

3. Revólver: sujeta las lentes del objetivo, gira

4. Objetivos: por lo general 3-4 en nuestros visores, 4x, 10x, 43x, 100x inmersión en aceite (bandas rojas). Aumento total = potencia ocular x potencia del objetivo. La mayoría de nuestros binocs tienen lentes de posición fija: el escenario se mueve hacia arriba y hacia abajo en lugar de la lente.

5. Escenario: Plataforma móvil en la que se montan las diapositivas para su visualización; todos nuestros telescopios tienen escenarios mecánicos con escalas vernier X,Y. Las perillas de enfoque mueven el escenario hacia arriba y hacia abajo.

6. Condensador: Una lente de subestaciones que enfoca la luz en la muestra. Nuestros binocs tienen condensadores que se mueven hacia arriba y hacia abajo para enfocar el haz de luz.

7. Diafragma del Iris: el diafragma se encuentra justo debajo del escenario y controla la cantidad de luz que pasa a la muestra y puede afectar drásticamente el enfoque de la imagen.

8. Botones de enfoque: más externo es el enfoque fino y más interno es el enfoque grueso. En los binocs, estas perillas controlan el movimiento hacia arriba / hacia abajo del escenario.

9. Fuente de luz: nuestros telescopios cuentan con fuentes de luz integradas. El interruptor de encendido / APAGADO del reóstato se encuentra en el visor o en la fuente de alimentación externa y se utiliza para regular la intensidad de la luz.

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I. Procedimiento de enfoque: Binoculares, Microscopios Compuestos

1. Encienda la fuente de luz. Los visores Binoc tienen una unidad incorporada o una fuente de alimentación externa.

2. Cambie a la lente de objetivo 10x.

3. Ajuste el enfoque grueso para elevar la pieza de la nariz (o bajar el escenario).

4. Sujete el portaobjetos de la muestra en el escenario en la posición adecuada.

5. Mira las lentes oculares de tu telescopio. Una lente es fija y la otra tiene un anillo de enfoque (como un par de binoculares). Acerque la lente lo más cerca posible del portaobjetos, luego, mirando solo a través de la lente ocular fija, retroceda hasta que la muestra simplemente se enfoque. Ajuste el enfoque fino de manera similar para la lente fija.

6. Ahora, mirando solo a través del ocular ajustable, ajuste su enfoque usando el anillo de enfoque alrededor de la lente. Mire con ambos ojos (ajuste la distancia interpupilar para ver un solo campo iluminado redondo) y realice los ajustes menores para enfocar.

7. Centre la imagen y ajuste la luz con la lente de condensador, el diafragma de iris y el reóstato de la fuente de luz.

8. Recentrar y ajustar el enfoque, primero grueso, luego el enfoque fino como en 5.

9. Reajuste el diafragma según sea necesario.

10.Ahora cambia los objetivos a una potencia superior. Reajuste el enfoque fino y la luz (diafragma) según sea necesario.

Nuestros alcances son parfocales, lo que significa que cuando cambia de potencia baja a alta, una imagen enfocada a baja potencia permanecerá más o menos enfocada a la potencia más alta. Lo más probable es que tengas que reajustar ligeramente el foco fino y el diafragma (aumentar la luz a potencias más altas.

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Department of Biology, Bates College, Lewiston, ME 04240